PROCEDIMIENTOS PARA RECOLECTAR Y PROCESAR MUESTRAS SANGUÍNEAS Y PRUEBAS DE

AGLUTINACIÓN
Arias.L., Guzmán.F., Jácome.P., Poaquiza.A., Quishpe. D
pajacome7@espe.edu.ec

Resumen Métodos Resultados

Tinción Wright: Identificación de las células sanguíneas
La presente práctica muestra los procesos para recolectar y procesar muestras
sanguíneas, así también pruebas de aglutinación e identificación de células sanguíneas,
para lo cual se realizó una tinción de Wright con un previo frotis sanguíneo y al llevar al
microscopio se observaron y diferenciaron las estructuras sanguíneas presentes en la
muestra.
También, se realizó la identificación del Grupo Sanguíneo y Rh, para lo cual se usaron Se tomó una muestra de sangre con la que se procedió a realizar un frotis sanguíneo. Se dejó secar al aire libre el Imagen 1. Imagen 2. Imagen 3. Imagen 4. Imagen 4.
frotis en una rejilla de tinción. Se cubrió completamente el portaobjetos con colorante Wright dejándolo de 5 - 8 Linfocito
gotas de sangre y sus respectivos anticuerpos para marcarlos y determinar si existe o no minutos. Se agregó colorante adicional porque este se comenzó a evaporar. Después se agregó un volumen igual al Monocito Eosinófilo Neutrófilo Basófilo
aglutinamiento para identificar la presencia o ausencia de antígenos determinados. de colorante de solución amortiguadora, se dejó actuar durante 10 -15 minutos hasta que se formó un brillo metálico.
Se lavó con agua corriente cuidadosamente hasta que la placa obtuvo un aspecto rosado a simple vista. Se limpió el
Y finalmente, se obtuvo la diferenciación de los monocitos en los macrófagos mediante un dorso del portaobjetos eliminando restos del colorante. Se dejó secar la placa al aire y posteriormente se observó con
cultivo de células obtenidas de un criovial, cambiando el medio hasta que los monocitos se el objetivo 10x en el microscopio.
diferencian y proliferen lo suficiente para se vuelven confluentes y puedan ser observados. Identificación de Grupo Sanguíneo y factor Rh:

Imagen 6. Imagen 7. Imagen 8. Imagen 9.

Linfocito Eosinófilo Neutrófilo Izquierda:Monocito/Derecha:
Fondo Identificación del grupo sanguíneo y Rh
Neutrófilo
Diferenciación de
Tabla 2. Recuento de leucocitos, valores monocitos en macrofagos
Tabla 1. Tinciones de granulocitos y normales, alteraciones y causas de
Anti-A Anti-B Anti-D Negativo
diferenciación de sus estructuras enfermedades producidas
Se trazó 3 círculos en una placa de vidrio. Colocamos una gota de sangre en cada círculo a la que posteriormente se Imagen 10. Grupo A-
re agregó una gota de reactivo distinto de anticuerpo Anti A, B y D. Se mezcló el contenido de cada círculo con
aplicadores de madera distintos. Se procedió a observar la presencia o ausencia de aglutinación para cada antígeno. negativo
Diferenciación de monocitos en los macrófagos:
Se descongeló un criovial de células en baño María a 37 °C. Inmediatamente se transfirió el contenido criogénico de 1 Anti-A Anti-B
Anti-D Negativo
mL a 25 mL de medio RPMI precalentado a 37 °C el mismo que se encontraba suplementado con 2 mM de L-
glutamina, 50 ng/mL de M-CSF, 25 ng/mL de interleucina -10 y 10% de FBS. Se transfirió 12.5 mL de la suspensión de Imagen 11. Grupo O-negativo
monocitos a un frasco de cultivo F75. Se incubó los cultivos a 37 °C con 5% de CO2 y 95% de aire por 48 horas. Se
enjuagó los cultivos 3 veces con 10 mL de medio RPMI precalentado a 37 °C para retirar el medio de cultivo. Después
del enjuague se añadió medio completo fresco y se lo cambió durante 2 días hasta que los monocitos se diferenciaron
Negativo
y proliferaron lo suficiente para volverse confluentes, Para esto se requirió una semana de cultivo.
Anti-A Anti-B Anti-D Imagen 13. Proceso de
Imagen 12. Grupo O-positivo diferenciación de monocitos en
macrofagos al cabo de 12 días

Objetivos Resultados Evidencias Conclusiones y Bibliografía

GENERAL: Identificación de leucocitos La imagen (1) y (9-izquierda) • Se deben seguir los protocolos de identificación de células sanguíneas para clasificar correctamente
• Seguir los procedimientos de recolección y procesamientos de muestras sanguíneas y poseen núcleo arriñonado, en (2) su citoplasma es rosado y las células sanguíneas con los resultados obtenidos.
pruebas de aglutinación su núcleo biolobular, (3), (8) e (9-derecha) poseen núcleos • Es más eficaz el uso de un número definido de macrófagos para iniciar el cultivo en vez de un
polimorfonucleares, (D) posee muchos gránulos, (E) y (F) su número definido de monocitos
núcleo es de mayor tamaño que el citoplasma. • El uso de monocitos crioconservados reduce la necesidad de disponer del donante y produce cultivos
ESPECÍFICOS: de macrófagos más homogéneos.
Morfología y organización citoesquelética de macrófagos
adherentes. En imagen (12) se observa microscopía de • Menck, K., Behme, D., Pantke, M., Reiling, N., Binder, C., Pukrop, T., & Klemm, F. (2014). Isolation of Human Monocytes by Double Gradient
• Realizar pruebas de aglutinación para la identificación de células sanguíneas Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags. Journal of Visualized Experiments : JoVE, 91.
contraste de fase de macrófagos adherentes antes (A) y Puntajes de la simulación https://doi.org/10.3791/51554
• Cultivar células de macrófagos derivados de monocitos humanos después (B) de la eliminación de células no adherentes. (C, sobre anticuerpos: Quishpe • Díaz, C., Magzul, P., & Wendy, P. (agosto de 2013). Colección de Referencia en Hematología. Obtenido de Tinciones Hematológicas :
file:///C:/Users/USUARIO/Desktop/SEMESTRE/6TO%20SEMESTRE/INMUNOLOG%C3%8DA/QB1069.pdf
D) Tinción con faloidina-TRITC de actina filamentosa en Damián pts 170/180 • Mello, M., & Murciano, T. (2012). Regreso a las Bases. Obtenido de Interpretación del hemograma y pruebas de coagulación:
macrófagos adherentes no estimulados. Barra de escala = file:///C:/Users/USUARIO/Desktop/SEMESTRE/5TO%20SEMESTRE/FISIOLOG%C3%8DA%20ANIMAL/Inte.%20hemograma.pdf
• Torrens, M. (2015). INTERPRETACIÓN CLÍNICA DEL HEMOGRAMA. Obtenido de LEUCOCITOS:
100 µm en A-C, 20 µm en D (Menck et al., 2014). file:///C:/Users/USUARIO/Desktop/SEMESTRE/5TO%20SEMESTRE/FISIOLOG%C3%8DA%20ANIMAL/interpretacion-clinica-del-hemograma.pdf

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 Tabla 1. Tinciones de granulocitos y diferenciación de sus estructuras

Elaborado por: (Arias,L.;2021)

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 Tabla 2. Recuento de leucocitos, valores normales, alteraciones y causas de enfermedades producidas

` Elaborado por: (Arias,L.;2021)