Una Visión Personal de la Historia de la Biología Molecular

desde el Descubrimiento que el material genético es el

ADN (DNA) hasta el Desciframiento del Genoma Humano
Relato de un Testigo

Curso Teórico Práctico de Biología Molecular y Genómica

www.laboratoriosportatiles.cl

JORGE E. ALLENDE
Enero 2-5, 2018
• Para aprender Ciencias hay que hacer ciencias, para las
ciencias experimentales esto significa que los estudiantes
deben hacer experimentos que demuestren algún
Concepto Fundamental que se está enseñando.

• En la educación media en Chile, y en otros países de

América Latina, se hacen muy pocos trabajos
experimentales.

• Relato sobre una innovación en la Enseñanza de la Biología

en Educación Secundaria que se está probando en Chile y
otros 5 países latinoamericanos y que permite que
estudiantes hagan experimentos de la Biología del Siglo XXI
en sus Liceos.
2
• En 1998 organizamos un curso teórico-práctico para capacitar
profesores de Biología en Biología Molecular.

• Ese curso se repitió en Chile y con apoyo de RELAB y UNESCO

organizamos un curso el año 2003 para profesores de Biología de
varios países latinoamericanos.
• Este curso que se repitió el 2005 en Buenos Aires y el 2006 en Costa
Rica con alumnos de muchos países de Centro América.

• En general los cursos fueron muy bien recibidos por los profesores
que nos decían que habían aprendido mucho. Pero algunos se
mostraban frustados por no poder compartir con sus alumnos la parte
más didáctica y más entretenida del curso- la parte experimental.

• En Roma el año 2001 en la Academia Pontificia de la Ciencia, presenté

un trabajo que se publicó en un libro, y en este yo decía que
estábamos desarrollando un laboratorio portátil.
3
NOVEMBER 2001
Paper of J.E. Allende
The problems and Promises of Science
Education in Chile

In our Institute of Biomedical Sciences, Faculty

of Medicine, University of Chile, we are actively
working with biology teachers in the public
schools of Santiago, running courses on
morphology, physiology, genetics and molecular
biology.

In this last subject we have developed a

practical one week course in which we have
trained more than one hundred high school
teachers. It is great to see the excitement of
these teachers when they can clone genes and
transform bacteria and isolate DNA.

We have the project of developing a mobile

DNA laboratory that can visit schools and let
the students carry out experiments of genetic
engineering
 Proyecto Wellcome Trust para
“Difundir las Ciencias de la Vida en la Sociedad”
2011 RELAB presentó proyecto en el año 2011 con 3 países participantes con una Universidad de
cada país:
México – UNAM
Costa Rica – Universidad de Costa Rica
Chile – Universidad de Chile
2012 Se aprueba proyecto con USD$ 48.000
Actividades:
1.- Organización de Cursos Teórico-Prácticos en Biología Molecular y Genómica para Profesores de
Biología en Educación Secundaria
Cada país se organizaron cursos con similares contenidos que capacitaban y actualizaban a los
profesores en 4 conceptos fundamentales de la Biología Molecular y Genómica. Estos cursos son de
carácter intensivo y tenían 40 horas de clases, experimentos y discusiones que se dictan de lunes a
viernes.
2.- Visita a los Liceos
Los profesores que aprueben los cursos pueden solicitar la visita del laboratorio portátil al liceo donde
ellos trabajan. Los profesores dictan las clases teóricas a sus alumnos y participan en la organización de
los experimentos que usando el “laboratorio portátil” hacen sus alumnos con la asesoría técnica de los
estudiantes de postgrado de la Universidad que acompañan al laboratorio portátil.
Esto último es clave porque permite el contacto entre los estudiantes de media con los estudiantes de
postgrado de las Universidades y este diálogo es tremendamente beneficioso para los dos tipos de
estudiantes. Los liceanos ven que hay jóvenes chilenos que se han embarcado en una vida dedicada a la
ciencia y los de postgrado adquieren una experiencia clave en transmitirle a la sociedad el porqué es
importante que se cultive las ciencias.

5
 Conceptos Fundamentales Cubiertos en este
curso con Clases Teóricas y Experimentales

• Concepto Fundamental 1
• La identidad de las especies y de los individuos esta
determinada por la información genética contenida
en la estructura del ADN de esas especies e
individuos
• El Fenotipo depende del Genotipo
Premio Nobel
de Medicina 1993

7
 From Phenotype to Genotype – The taste receptor for PTC
De Fenotipo a Genotipo
Mutation of Taste Receptor TAS 238

Se amplifica un fragmento del

Receptor Gustativo TAS 238
que tiene 220 pares de bases
y se corta con enzima de
restricción Hae 3 que
reconoce secuencia GGCC.

Corta en gustadores y no
corta en los no gustadores.

PCR gano Premio Nobel de

Química el año 1993.

177

221 44
8
 Conceptos Fundamentales Cubiertos en este curso con Clases Teóricas y Experimentales

• Concepto Fundamental 2
• La mayoría de las células de los organismos multicelulares contienen la misma
información genética que el total del organismo pero esas células presentan
diferencias en morfología y expresan proteínas diferentes que les permiten cumplir
diferentes funciones fisiológicas. Esto está mediado por la regulación de la
expresión genética.

• Concepto Fundamental 3
• El Código Genético que se usa para traducir la información genética para generar
proteínas es prácticamente universal en todos los seres vivos que habitan o
habitaron en nuestro planeta y la maquinaria usada para lograr la traducción es
también muy similar en diferentes seres vivos. Estos dos hechos son la base para
poder hacer ingeniería genética permitiendo que el material genético que es
introducido en células vivas de otra especie pueda ser correctamente expresada en
la célula receptora.

• Experimento de Transgénesis con gen de proteína fluorescente verde en

bacterias – Plasmidio y foto de bacterias fluorescentes. Alumnos usan la
proteína cuyo descubrimiento ganó el Premio Nobel de Química el 2008.
 Se trasnsforma a E. coli con este ADN circular que contiene varios genes

Apaga expresión
Plasmidio pGLO

Transfección en E. coli
11
Poleron de Alumnas Liceo 7

12
 Conceptos Fundamentales Cubiertos en este curso

• Concepto Fundamental 4
• La evolución Darwiniana puede ser investigada por medio de un estudio
comparativo de las secuencias nucleótidicas de los genes o de las
secuencias de aminoácidos presentes en las proteínas codificadas por esos
mismos genes presentes en especies relacionadas. La genómica molecular
nos aporta información sobre la escala de tiempo en la cuál las diferentes
ramas filogenéticas fueron emergiendo en el proceso evolutivo.

• Experimento computacional entrando a banco de datos (NCBI) que tienen

la estructura de millones de genes y de las proteínas que estos genes
codifican.

• Uno introduce la información de un gen y usa un software llamado BLAST

que busca todos los genes similares al humano.
 REVOLUCIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1944 DNA es el material que tiene la información Oswald Avery
Genética. (Pneumococus)
The Professor, the Institute and DNA, René J.
Dubos
Experimento de Avery

1949 Las proteínas están determinadas Linus Pauling *

genéticamente. La hemoglobina de las células Electroforesis de proteínas
falciformes – Hb S.
Medicina Molecular. F. Sanger
L. Pauling y H. Itano Secuencia de
Biografía - Force of Nature insulina

1953 Las moléculas de DNA son cadenas que J. Watson * y F. Crick

forman una doble hélice.
Nature, 1953
El Dogma Central de la Biología Molecular.
 PNEUMONIA
EXPERIMENTO DE GRIFFITH
OSWALD AVERY Y LA TRANSFORMACIÓN CON ADN
ILUSTRACIÓN ERRÓNEA
EXPERIMENTO DE HERSHEY - CHASE
EXPERIMENTO DE HERSHEY-CHASE
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1944 DNA es el material que tiene la Oswald Avery
información Genética. (Pneumococus)
The Professor, the Institute and DNA,
René J. Dubos
Experimento de Avery

1949 Las proteínas están determinadas Linus Pauling *

genéticamente. La hemoglobina de Electroforesis de proteínas
las células falciformes – Hb S. F. Sanger
Medicina Molecular. Secuencia de
insulina
L. Pauling y H. Itano
Biografía - Force of Nature
1953 Las moléculas de DNA son cadenas J. Watson * y F. Crick
que forman una doble hélice.
Nature, 1953
El Dogma Central de la Biología
Molecular.
 Carta de Pauling a Itano en 1950

• “Creo que la Medicina está en este momento entrando a una

nueva era en que los avances serán mucho más rápidos que
antes, cuando los científicos descubrirán las bases
moleculares de las enfermedades y descubrirán el por qué
moléculas de ciertas drogas resultan en tratamientos
eficientes, mientras que otras moléculas no son efectivas.

• Tuve el honor de conocerlo en Santiago en 1964, y haber

conversado con él por más de una hora en mi laboratorio.»
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1944 DNA es el material que tiene la Oswald Avery
información Genética. (Pneumococus)
The Professor, the Institute and DNA,
René J. Dubos
Experimento de Avery

1949 Las proteínas están determinadas Linus Pauling *

genéticamente. La hemoglobina de Electroforesis de proteínas
las células falciformes – Hb S. F. Sanger
Medicina Molecular. Secuencia de
insulina
L. Pauling y H. Itano
Biografía - Force of Nature
1953 Las moléculas de DNA son cadenas J. Watson * y F. Crick
que forman una doble hélice.
Nature, 1953
El Dogma Central de la Biología
Molecular.
EL
EL DOGMA
DOGMA CENTRAL
CENTRAL DE
DE LA
LA BIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
MOLECULAR –– NOV.
NOV. 1952
1952

Libro de Double Helix, 1968 de J.D. Watson

Fenotipo

Genotipo
Según
Según elel
sueño
sueño de
Crick
de POLIRRIBOSOMAS
Crick

La
La idea
idea de
de Crick
Crick
Watson
Watson en
en mi
mi casa
casa en
en la
la Reina
Reina
 Mi
Mi clase
clase de
de Medicina
Medicina de
de 1961
1961
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1960 Teoría del RNA mensajero Jacob* y Monod*
La Estatua Interior 1987
Tomando Té el Viernes Santo de
1960 en la casa de Brenner
1961 Uuu es fenilalamina M. Niremberg*
Piedra Rosetta del código
Mi fracaso como futurologo
1961-1965 Se completa el código genético Niremberg*, Ochoa*, Khorana*

1962-1967 Mecanismo de traducción para Lipmann* y varios

síntesis de proteínas. laboratorios
Mi participación en el laboratorio
Lipmann y posteriormente en el
de Niremberg
Mi clase a Estudiantes de Medicina y Predicción
1961
El
El DOGMA
DOGMA CENTRAL
CENTRAL DE
DE LA
LA BIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
MOLECULAR
 Mi
Mi clase
clase de
de Medicina
Medicina de
de 1961
1961
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1960 Teoría del RNA mensajero Jacob* y Monod*
La Estatua Interior 1987
Tomando Té el Viernes Santo de
1960 en la casa de Brenner
1961 Uuu es fenilalamina M. Niremberg*
Piedra Rosetta del código
Mi fracaso como futurologo
1961-1965 Se completa el código genético Niremberg*, Ochoa*, Khorana*

1962-1967 Mecanismo de traducción para Lipmann* y varios

síntesis de proteínas. laboratorios
Mi participación en el laboratorio
Lipmann y posteriormente en el
de Niremberg
 1961-1965
1961-1965

-universal
-degenerado
-sin comas pero con punto aparte
 Mi
Mi clase
clase de
de Medicina
Medicina de
de 1961
1961
AÑO DESCUBRIMIENTO INVESTIGADORES
1960 Teoría del RNA mensajero Jacob* y Monod*
La Estatua Interior 1987
Tomando Té el Viernes Santo de
1960 en la casa de Brenner
1961 Uuu es fenilalamina M. Niremberg*
Piedra Rosetta del código
Mi fracaso como futurologo
1961-1965 Se completa el código genético Niremberg*, Ochoa*, Khorana*

1962-1967 Mecanismo de traducción para Lipmann* y varios

síntesis de proteínas. laboratorios
Mi participación en el laboratorio
Lipmann y posteriormente en el
de Niremberg
Grupo del Laboratorio del Dr. Lipmann 1962
En Reñaca 1963
 PUBLICACIONES DE J.E. ALLENDE sobre la Síntesis de Proteínas

DANIEL NATHANS, 2JORGE E. ALLENDE, 3THOMAS W. CONWAY, 4GEORGE J. SPYRIDES, AND FRITZ
LIPMANN, PROTEIN SYNTHESIS FROM AMINOACYL sRNA’s
Symposium on Informational Macromolecules
JORGE E. ALLENDE, † ROBIN MONRO, AND FRITZ LIPMANN. RESOLUTION OF THE E. COLI
AMINOACYL sRNA Academic
TRANSFERPress, NEW YORK,
FACTOR 1963COMPLEMENTARY
INTO TWO pp. 349-365 FRACTIONS
PNAS. USA. 51, 1211 – 1216 (1964)
Jorge E. Allende, Robin Monro and Fritz Lipmann
Reprinted from the Proceedings of the National Academy of Sciences
Vol.54, N.6, pp.1211-1216, July, 1964*
JORGE E. ALLENDE, AND HERBERT WEISSBACK (1964)
GTP INTERACTION WITH A PROTEIN SYNTHESIS INITIATION FACTOR PREPARATION FROM
ESCHERICHIA COLI
BIOCHEN BIOPHYS. RES. COMM. 28, 82-88, 1967

By JORGE E. ALLENDE, † NICHOLAS W. SEEDS, ‡THOMAS W. CONWAY, ‡ AND HERBER

WEISSBACH § GUANOSINE TRIPHOSPHATE INTERACTION WITH AN AMINO ACID
POLYMERIZATION FACTOR FROM E. COLI*

PNAS., USA 58, 1566 – 1573 (1467

 1962-1968
1962-1968 Mayormente
Mayormente en
en U.S.A.
U.S.A.

Etapa en la que participé activamente

1963-1966 En Chile
Aminoacil – tRNA Sintetasas
Las enzimas inteligentes que son bilingües
Catalizan reacción

1.- Amino acido (X) + ATP + Enz -------> amino acido (X)-AMP-ENZ+P-P
<--------

2.- Amino acido (X) - ATP – Enz + + RNA(X) -------> AAx-tRNA(X) + AMP + ENZ
AA (X) + ATP + tRNA -------> AA (X) – tRNA(x) +AMP+P-P
<--------
ENZ

Allende, C.C., and Allende, J.E. (1964) Purification and substrate specificity of arginyl-ribonucleic acid
synthetase from rat liver. J. Biol. Chem. 239, 1102-1106.

Allende, J.E., Allende, C.C., Gatica, M., and Matamala, M. (1964) Isolation of threonyl adenylate-enzyme
complex. Biochem. Biophys. Res. Commun. 16, 342-346.

Allende, C.C., Allende, J.E., Gatica, M., Celis, J., Mora, G., and Matamala, M. (1966) The aminoacyl
ribonucleic acid synthetases: I. Properties of the threonyladenylate-enzyme complex. J. Biol. Chem. 241,
2245-2251.

Allende, C.C., Chaimovich, H., Gatica, M., and Allende, J.E. (1970) The aminoacyl transfer ribonucleic acid
synthetases: II. Properties of an adenosine triphosphate-threonyl transfer ribonucleic acid synthetase
complex. J. Biol. Chem. 245, 93-101.
AÑO Descubrimiento Investigadores
1969 Transcriptasa Reversa Baltimore * y Temin *
Retrovirus pueden sintetizar DNA a partir de RNA (flecha 4)

1963-1972 Enzimas de restricción cortan DNA en sitios específicos – trozos Arber* Brown* Nathans*
manejables.
1973 Plasmidios – circulitos de DNA de las bacterias sirven para Berg*, Cohen*, Boyer
introducir DNA de otras especies a bacterias.

1977 Método para determinar la secuencia del DNA. Gilbert, *Sanger*

•Con esto se hace posible la ingeniería genética y surge la
biotecnología.
•Bacterias sintetizan insulina humana y hormona de crecimiento
humana “la biología del terror”.

•Genes de escariontes están interrumpidos por intrones

1979

1981 Animales transgénicos – ratones Palmiter, Brinster

1983 Plantas Transgénicas usando Agrobacterium tumefasciens Van Montagu y Schell
1985 Reacción de la Polimerasa en cadena – Amplifica DNA millones Mullis*
de veces (PCR).
1970
BASES CONCEPTUALES PARA LA INGENIERÍA GENÉTICA

 EL CÓDIGO GENÉTICO ES DEGENERADO Y PRÁCTICAMENTE

UNIVERSAL CON UN MECANISMO DE TRADUCCIÓN MUY
SIMILAR

 ERGO: TODAS LAS FORMAS DE VIDA SON COMPATIBLES

CON RESPECTO A LA INFORMACIÓN GENÉTICA.

 ESTE CONOCIMIENTO HIZO LA INGENIERÍA GENÉTICA

TEÓRICAMENTE POSIBLE.

 SE PUEDE INTRODUCIR INFORMACIÓN GENÉTICA EXÓGENA

A CUALQUIER ORGANISMO VIVO QUE LA VA A PODER
INTERPRETAR CORRECTAMENTE
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Y DNA
RECOMBINANTE
Plasmidos Recombinantes
Frederick Sanger

Primera Secuencia de una

Proteína

• Premio Nobel 1958

Primera Secuencia de un DNA

• Premio Nobel 1980

Método DIDEOXI nucleótidos -
Sanger
 Agrobacterium tumefaciens Plantas Transgénicas

bacterial
T-DNA border
chromosome region
Ti plasmid
T-DNA

vir genes

In response to chemical signals, the vir genes

become activated and direct a series of events
to transfer the T-DNA to the plant cell.
MARK
MARK VAN
VAN MONTAGU-SALA
MONTAGU-SALA SAZIÉ
SAZIÉ –– FAC.
FAC. DE
DE MEDICINA
MEDICINA
 2001
• La gran sorpresa que nos dio el texto completo de las
secuencias del genoma es que el ser humano solo tiene ~
26000 genes que es igual al de los ratones y mucho menos que
algunas plantas y animales. Golpe a nuestro orgullo. Solo el
3% del Genoma codifica para proteínas.

• Esto nos presentó con el concepto del “DNA basura” y que la

complejidad humana no se basa en genes sino más bien en
sus interrelaciones.
• Con el genoma aparecen nuevos enfoques que buscan encontrar la
base de esas interrelaciones – los microconjuntos.

• No hay relaciones de causa efecto lineales sino que estímulos y

señales encienden o apagan circuitos enteros de cientos de genes.

• PROYECTO ENCODE
• Se vuelve a examinar el genoma en un trabajo laborioso que se
inicia el 2003 y sigue actualmente que se encuentra que el 80%
del genoma se usa para activar o reprimir genes.

• Septiembre 6 del año 2012 – Se publica la Enciclopedia de elementos

del DNA (ENCODE) y el 60% del genoma se transcribe. Esto nos dice
que prácticamente gran parte del trabajo con microconjuntos es
irrelevante porque estábamos mirando al 3% que codifica proteínas y
olvidándonos del 80% que tiene función. Esto quiere decir que hay 3-
4 millones de elementos en el genoma que cumplen funciones y esa
es una complejidad apabullante. En este momento realmente no
sabemos como atacar esa complejidad.
• Nuevamente, las bacterias nos dan la
pista para una nueva metódica de
ingeniería de genomas.

• (CRISPR-Cas9) - Esta metódica esta

causando una nueva revolución en la
biotecnología pero también ha causado
la preocupación desde el punto de
vista ético en cuanto se podría usar en
la línea germinal humana.
SCIENCE EXPRESS - PERSPECTIVES, 19 March 2015
• La nueva generación de
secuenciadores permite tener un
perfil genómico de una persona por
poco más de lo que cuesta una
resonancia magnética nuclear.

• Medicina personalizada