INTRODUCCIÓN A LA

ESPECTROMETRÍA DE MASAS

José Luis Pineda Lucas

Director Técnico
Laboratorio Químico Microbiológico S.A.

02/10/20 1
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
 Contenido:

 Componentes espectrómetro de masas

 Procesos de Ionización

 Ionización por impacto electrónico

 Ionización Química

02/10/20 2
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

La espectrometría de masas es una técnica analítica

muy potente usada para:


Identificar compuestos desconocidos.


Cuantificar materiales conocidos.


Elucidar la estructura química de las moléculas.

02/10/20 3
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

 La muestra en fase gas, se introduce en el sistema de

vacío a través de una interfase entre el CG y el MSD,
siendo ionizada en la fuente de iones.

 La molécula ionizada, se rompe en fragmentos, los

cuales son filtrados por un analizador de masa
conforme a su relación masa/carga, para llegar al
multiplicador en donde se genera una señal eléctrica
proporcional al número de iones.

02/10/20 4
 Diagrama de un
Espectrómetro de Masas

Fuente de Detector de
Iones Analizador
Iones
Sistema en Vacío

Sistema de
Datos

Inyector

Espectro de
Introducción de la Muestra: Masas
GC/MS - LC/MS - Directa

02/10/20 5
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

Rendimiento total medio de iones en función la

energía de ionización

120
100
% Rendimiento

80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100 120
Energía electrones (eV)

02/10/20 6
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

 Impacto electrónico: 70 eV(1600 Kcal/mol)

 Enlace covalente: Entre 50-100 Kcal/mol

02/10/20 7
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

 Las moléculas en estado gaseoso son

bombardeadas por electrones de alta energía.

ABC + e- (70eV) ABC+ + 2 e-

 Como consecuencia del choque se desprende un

electrón de la molécula para producir un ión con
carga positiva llamado ión molecular.

02/10/20 8
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
 A partir del ión molecular, la molécula se
fragmenta, fragmentación que depende de la
naturaleza del ión molecular.

ABC+ AB* + C+
A+ + BC*
AB+ + C*
AC+ + B*

02/10/20 9
 INTRODUCCIÓN A LA
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

 Los iones formados son filtrados por un

analizador de masa conforme a su relación
masa/carga, para llegar al multiplicador en donde
se genera una señal eléctrica proporcional al
número de iones
Espectro de Masas

+
+ AB
C
Abundancia
+.
Señal ABC
+
A +
AC

02/10/20 m/z 10
 Proceso de Ionización por Impacto
Electrónico (EI)

 Ion molecular:
-Su masa se corresponde al peso molecular del
compuesto del que proviene

-Su intensidad depende de la estabilidad de la

molécula ionizada , la cual depende de su
estructura

02/10/20 11
 Proceso de Ionización por Impacto
Electrónico (EI)
 Ion molecular:
-En general el ión molecular se estabiliza por la
presencia de electrones π , ya que ayudan a
deslocalizar la carga.
-Las estructuras cíclicas, dan grandes picos
progenitores,porque la ruptura del enlace,no
produce necesariamente 2 fragmentos.
*Pico Base:
Ión más abundante en un espectro de masas.

02/10/20 12
 Espectrometría de masas
Clorfenson Pm 302

O
O
S
O
Cl
Cl

02/10/20 13
 Espectro de masas clorfenson
Abundance

#82: CHLORFENSON
111 175

9000

8000

7000

6000

5000

4000 75

3000 99

2000 127 302

63

1000
51
87 139 159
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
m/z-->

02/10/20 14
 Clorfenson ion 111

O
O
S
O
Cl
Cl

02/10/20 15
 Espectro de masas clorfenson
Abundance

#82: CHLORFENSON
111 175

9000

8000

7000

6000

5000

4000 75

3000 99

2000 127 302

63

1000
51
87 139 159
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
m/z-->

02/10/20 16
 Clorfenson ion 127

O
O
S
O
Cl
Cl

02/10/20 17
 Espectro de masas clorfenson
Abundance

#82: CHLORFENSON
111 175

9000

8000

7000

6000

5000

4000 75

3000 99

2000 127 302

63

1000
51
87 139 159
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
m/z-->

02/10/20 18
 Clorfenson ion 175

O
O
S
O
Cl
Cl

02/10/20 19
 Espectro de masas clorfenson
Abundance

#82: CHLORFENSON
111 175

9000

8000

7000

6000

5000

4000 75

3000 99

2000 127 302

63

1000
51
87 139 159
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300
m/z-->

02/10/20 20
 Clorfenson ion 302

02/10/20 21
 Impacto Electrónico (EI)
Ion molecular estabilidad
Aromáticos
Olefinas conjugadas
Alicíclicos
Sulfuros
Hidrocarburos no ramificados
Cetonas
Aminas
Ésteres
Ácidos carboxílicos
Hidrocarburos ramificados
Alcoholes
02/10/20 22
 Detalle de la Ionización por Impacto
Electrónico

"MAGNET" (imán)
FILAMENTO
FILAMENTO
e e e e e e e
e e e e ee e e e
e e ee
e e
e e e e ee e
e e ee e
ee e "REPELLER" e e e
e
ee
M M
M M M M
M + .
M+
.
M M
M M +
M M M M + F1.
+
. M .
M M F
MM M M M M M M 2
M M M M M M M M
M
ENTRADA DE M M M M
M
MUESTRA M M M
M M
+ M
M. M
M
M
M
+
M.
REPELLER

"MAGNET" (imán)

02/10/20 23
 Sistema de vacío

 Aumenta el tiempo de vida del filamento

 Disminuye el ruido de fondo

 Trayectoria de los iones libre de choque

 Aumenta la sensibilidad

02/10/20 24
 Sistema de vacío

Difusora Turbomolecular

Flujo (ml/min) 2 4

Tiempo hasta 5-10 min 1-2 min

vacío
Vacío 10e-5 Torr 10e-6Torr

02/10/20 25
 Aceleración de Iones

 Una vez formados los iones son acelerados por el

repeller, de forma que la energía electrostática se
transforma en energía cinética.
 La velocidad de los iones es directamente
proporcional al raíz cuadrada de la carga e
inversamente proporcional a la raíz cuadrada de
su masa .
 eU= ½ mv2 v= 2eU/m
v aprox 100 Km/seg
02/10/20 26
 Analizador-Filtro de Masas

 El analizador de cuadrupolo consiste en

cuatro rod paralelos a los que se aplica una
corriente continua (DC) sobre la que se
superpone un potencial de radiofrecuencia
(RF). El campo creado en los rod actúa a
modo de filtro y determina que iones
alcanzarán el detector.

02/10/20 27
 Filtrado masas seleccionadas

Electrodo positivo

M+

02/10/20 28
 Filtrado masas pequeñas

Los iones con una m/z demasiado baja

"resuenan" entre los electrodos positivos,
desarrollando una amplitud creciente. Esta
amplitud de oscilación va aumentando
hasta que es lo suficientemente grande para
colisionar con el electrodo positivo (cuando
éste tiene potencial negativo).

02/10/20 29
 Filtrado masas pequeñas
Electrodo positivo

M+

02/10/20 30
 Filtrado masas grandes

Los iones con m/z excesiva desarrollan

demasiado momento y no pueden ser
controlados por el campo eléctrico oscilante
colisionando con el electrodo negativo
mientras éste tiene potencial negativo (la
mayoría del tiempo). La colisión neutraliza
los iones.

02/10/20 31
 Filtrado masas grandes

Electrodo negativo

M+

02/10/20 32
 Parámetros Sintonización

 Repeller
 Ion Focus
 Entlens
 EntOffs
 MassGain
 MassOffs
 AmuGain
 AmuOffs
 EMVolt

02/10/20 33
 Sintonización automática

 Autotune.

 Perfluorotributilamina (PFTBA).

 Masas 69-219-502

02/10/20 34
 Sintonizado con PFTBA
Espectro Perfluorotributylamine (PFTBA)

Scan: 10.00 - 650.00 Samples: 16 Thresh: 500

117 peaks Base: 69.00 Abundance: 1974784
69
100
F3 C - F2C - F2C - F2 C

..
N CF2 - CF2 - CF2 - CF3
219
F3 C - F2C - F2C - F2 C
50

131

264
414 (GCD)
502
614
0

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650

Mass Abund Rel Abund Iso Mass Iso Abund Iso Ratio
69.00 1974784 100.00 70.00 20344 1.03

219.00 1161216 58.80 219.95 45968 3.96

502.00 56648 2.87 503.00 5690 10.04

02/10/20 35
 Modos de adquisición

 Modo SCAN
Adquisición de rango de masas.Permite investigar
el espectro obtenido en bibliotecas comerciales
(Willey-NIST).
 Modo SIM
Adquisición de iones seleccionados.Mayor
sensibilidad.Espectros no buscables salvo que se
adquieran suficiente números de iones

02/10/20 36
 TIC Metil Clorpirifos-SCAN
Abundance

TIC: VIE1.D
5000000

4800000
4600000

4400000
4200000
4000000

3800000
16.58 Metil Clorpirifos
3600000

3400000
3200000
3000000

2800000
18.42
2600000

2400000
2200000

2000000

1800000
1600000
1400000

1200000
1000000

800000
600000

400000
17.33 18.85
15.92 18.15 18.56
200000

15.50 16.00 16.50 17.00 17.50 18.00 18.50 19.00

Time-->

02/10/20 37
 Espectro de masas Metil
Clorpirifos-Modo SCAN
Abundance

Scan 2274 (16.576 min): VIE1.D

286
700000

650000

600000

550000

500000

125
450000

400000

350000

300000

250000

200000
79
150000
93 109
100000 63

50000 168 197

182 212
144 226 258 271 308 323
155 241
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320
m/z-->

02/10/20 38
 TIC Metil Clorpirifos-SIM
Abundance

TIC: VIESIM.D

75000

70000

65000 Metil Clorpirifos

60000

55000

50000

45000

40000

35000

30000

25000

20000

15000

10000

5000

15.00 15.20 15.40 15.60 15.80 16.00 16.20 16.40 16.60 16.80 17.00 17.20 17.40
Time-->

02/10/20 39
 Espectro de masas Metil
Clorpirifos-Modo SIM
Abundance

Scan 1492 (16.566 min): VIESIM.D (-)

286
23000

22000

21000

20000

19000

18000

17000

16000

15000 125

14000

13000

12000

11000

10000

9000

8000

7000

6000

5000

4000

3000

2000

1000

0
120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290
m/z-->

02/10/20 40
 Comparación espectros
SCAN-SIM
Abundance
Abundance

Scan 2274 (16.576 min): VIE1.D Scan 1492 (16.566 min): VIESIM.D (-)
286 286
700000 23000

22000
650000
21000

600000 20000

19000

550000 18000

17000
500000
16000

125 125
450000 15000

14000

400000 13000

12000
350000
11000

300000 10000

9000

250000 8000

7000
200000
79 6000

150000 5000

93 109 4000

100000 63 3000

2000
50000 168 197
182 212 1000
144 226 258 271 308 323
155 241 0
0 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 m/z-->

m/z-->

02/10/20 41
 IONIZACION QUIMICA
INTRODUCCION
 La ionización química es una técnica para la
creación de iones en espectrometría de masas.
 El modo de ionización en impacto electrónico
(EI) es diferente al de ionización química (CI).
 En EI los electrones a alta energía (70 eV)
colisionan con las moléculas a analizar.
 Estas colisiones , producen primariamente iones
con carga positiva.

02/10/20 42
 IONIZACIÓN QUÍMICA
INTRODUCCIÓN
 Bajo estas condiciones de ionización ,los fragmentos
de las moléculas , son fácilmente predecibles.
 En CI, la ionización se realiza en una atmósfera que
contiene el carrier gas, la moléculas de la muestra y
el gas de ionización, todo ello en la cámara de
ionización.
 Como consecuencia,al ser predominante el gas de
ionización, los electrones emitidos por los
filamentos , ionizan a este formando iones reactivos
que son los que reaccionan con las moléculas.
02/10/20 43
 IONIZACIÓN QUÍMICA
INTRODUCCIÓN
 La formación de iones en CI implica una
menor energía , siendo la fragmentación
menos drástica que en EI.
- Como consecuencia , los espectros en CI
muestran una alta abundancia del ión
molecular, razón por la cual , este modo de
ionizacion se utiliza para conocer el peso
molecular de un compuesto.

02/10/20 44
 IONIZACIÓN QUÍMICA
INTRODUCCIÓN
 Reacciones ionización gas reactivo:
CH4 + e- CH4+ + 2e-
CH4+ + e- CH3+ + e- + H+
CH4+ + CH4 CH5+ + CH3+ (M+1)
CH3+ + CH4 C2H5+ + H2 (M+29)
C2H5+ + CH4 C3H5+ + 2H2 (M+41)

02/10/20 45
 IONIZACION QUIMICA
INTRODUCCION
 Como gases reactivos, es preferible la utilización
de metano, aunque otros gases utilizados son
 Dióxido de Carbono
 Isobutano
 Amoniaco
 Hidrogeno
 Freon
 Metilamina
 Etc.

02/10/20 46
 IONIZACIÓN QUÍMICA
POSITIVA
 Los cuatro procesos fundamentales de
ionización química positiva son los siguientes

 Transferencia de protones.
 Perdida de protones( abstracción hidruro).
 Adición.
 Cambio de carga.

02/10/20 47
 IONIZACIÓN QUÍMICA
POSITIVA
 Transferencia de protones
 BH+ + M MH+ + B
 BH+ se corresponde con (CH5+)
 Si la afinidad protónica de la muestra es mayor
que la del gas reactivo, el gas reactivo protonado
transferirá el protón a la muestra, formando un ion
cargado positivamente.
 B + H+ BH+ (ap en Kcal./mol)

02/10/20 48
 IONIZACIÓN QUÍMICA
POSITIVA
Abstracción de hidruro
R+ + M (M-H)+ + RH
R+ se corresponde con CH5+ y C2H5+

La reacción para CH5+ es:

CH5+ + M (M-H)+ + CH4 + H2

El espectro resultante presentaría como ion M-1 amu

02/10/20 49
 IONIZACIÓN QUÍMICA
POSITIVA
 Adición
 Los iones de gas reactivos se combinan con las
moléculas por reacciones de adición (asociación o
condensación)
 Los iones resultantes reciben el nombre de
aductos.
 Los aductos observados en CI con metano son:
 M+C2H5+ (M+29) y M+C3H5+ ( M+41)

02/10/20 50
 IONIZACIÓN QUÍMICA
POSITIVA
 La adición es particularmente interesante en
PCI cuando se usa como gas reactivo NH3
ya que tiene una alta afinidad protónica.

 NH4++ M (M+NH4)+ (M+18)

02/10/20 51
 Comparación EI-PCI

Pm = 222

02/10/20 52
 Comparación EI-PCI

02/10/20 53
 IONIZACIÓN QUÍMICA
NEGATIVA (NCI)
 En este caso la polaridad del voltaje del
analizador se selecciona para iones negativos
 Los mecanismos de reacción son los
siguientes:
 Captura de electrones.
 Disociación de captura de electrones.
 Formación de pares de iones.
 Reacciones Ion molécula.

02/10/20 54
 IONIZACIÓN QUÍMICA
NEGATIVA (NCI)
 Cuando el gas reactivo se bombardea con
electrones de alta energía ocurre la
siguiente reacción:
 CH4 + e- (230 eV) CH4+ + 2e- (térmicos)
 Los electrones térmicos presentan una menor
energía que los generados por los filamentos y
son los que reaccionan con la molécula.

02/10/20 55
 IONIZACIÓN QUÍMICA
NEGATIVA (NCI)
 No se forman iones negativos de gas
reactivo, por lo que el nivel de ruido es
menor y por tanto mayor el limite de
detección ( de 10 a 1000 veces que en
PCI)para captura de electrones
 Como gases reactivos se suele utilizar
metano y CO2

02/10/20 56
 IONIZACIÓN QUÍMICA
NEGATIVA (NCI)
 Captura de electrones
 Es el mecanismo primario de interés en NCI
 La reacción es la siguiente
 MX + e- MX - · (anión radical)
 La captura de electrones se favorece si la
molécula contiene heteroátomos
 N,O,P,S y especialmente halogenados

02/10/20 57
 IONIZACIÓN QUÍMICA
NEGATIVA (NCI)
 Disociación de captura de electrones.
 Es un proceso similar a la captura de
electrones,pero durante la reacción la molécula se
fragmenta o disocia.
 MX + e- M · + X-
 El resultado es un anión y un radical neutro.
 Esta reacción no tiene la misma sensibilidad que el
proceso de captura de electrones.

02/10/20 58
 Comparación EI-NCI
Cl

Cl O
Cl
S O
Cl

Cl O

Cl

Pm = 404

02/10/20 59