1

CONTENIDOS

1. Fundamentos

2. Clasificación

3. El proceso cromatográfico

4. Parámetros fundamentales

5. Aplicaciones de la cromatografía

2
1. Fundamentos
1903: usó columnas de adsorción para separar
pigmentos vegetales

Fase
móvil
Pigmentos
vegetales

Fig.1

Tswett (1872-1919) Fase

estacionaria

Chroma: color
Graphein: escribir CROMATOGRAFÍA

3
2. Clasificación

O 2A. Según la disposición de la fase estacionaria:

O Cromatografía plana:
O Cromatografía en capa fina
O Cromatografía en papel
O Cromatografía en columna
O Cromatografía de líquidos
O Cromatografía de gases
O Cromatografía de fluidos supercríticos

4
2. Clasificación
CROMATOGRAFÍA PLANA

Papel Cromatografía en papel

Fase estacionaria
Adsorbente sobre soporte Cromatografía
en capa fina
Gel de sílice, poliamida….
Lámina de vidrio, de plástico o
metálica Tapadera

METODOLOGÍA DE TRABAJO
Papel
Frente de
fase móvil

Fase
móvil

1 5 Fig.1
2 3 4 5
2. Clasificación
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Muestra
Fase (A+B)
móvil

B
Fase
estacionaria
A B

A B

6
2. Clasificación

O 2B. Según el tipo de fase móvil:

O Cromatografía de líquidos (LC)

O Cromatografía de gases (GC)

En columna o en superficie plana

O Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC)

En columna

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2. Clasificación

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS EN COLUMNA

Método Técnica Fase estacionaria Tipo de equilibrio

LC Reparto Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre líquidos
inmiscibles
Adsorción Sólido Adsorción

Intercambio iónico Resina de Intercambio Iónico Intercambio iónico

Exclusión por Líquido en intersticios de un sólido Distribución/Exclusión

tamaños polimérico

GC Gas-líquido Líquido adsorbido sobre un sólido Distribución entre gas y líquido

Gas-sólido Sólido Adsorción

SFC Especies orgánicas enlazadas a Distribución entre fluido

superficie sólida supercrítico y superficie
enlazada

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3. El proceso cromatográfico

Muestra
(A+B)
Fase
móvil

B
Fase
A B
estacionaria

B
A
B

Detector ● ● ● ● ● ● ●
Señal analítica

t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
A
B

9
Tiempo, min t0 t1 t2 t3 t4 t5 t6
3. El proceso cromatográfico

ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Columna

Comienzo

Fig.1

Perfil de concentración

Fig.2 Tiempo 10
4. Parámetros fundamentales
Respuesta del detector

CH4 Octano No
identificado Nonano

Inyección Tiempo
Fig.1

tr´ = tr - tm
11
5. Aplicaciones de la cromatografía
ANÁLISIS CUALITATIVO

Disolución estándar
Señal analítica

F1

CH4 Nonano
La muestra no contiene
Octano Decano
metano ni octano.
Tiempo Si los contiene será a
concentraciones inferiores
Muestra a los correspondientes
límites de detección
Señal analítica

CH4 Octano ¿Nonano? ¿Decano?

Tiempo

Identificación positiva: - Comparación de datos de retención 12

- Uso de detectores en línea
5. Aplicaciones de la cromatografía
ANÁLISIS CUANTITATIVO

Área

Señal analítica
Altura, h

Fig.1
tm tr Tiempo

MÉTODOS DE ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO CUANTITATIVO

1. Calibración con patrones
0,4
Preparación de disoluciones patrón

Área de pico, s
0,3

0,2
Obtención de sus cromatogramas
0,1

13
0,0
0 5 10 15 20 25 30

Concentración, ng ml-1
5. Aplicaciones de la cromatografía

0,35
B. Método del estándar interno

Area de pico/Area del estándar interno

0,30

0,25

Se añade a disoluciones 0,20

patrón y a muestras 0,15

0,10

Analito 1 0,05
Señal analítica

0,00
Estándar 0 10 20 30 40 50 60

interno Concentración, ng ml-1

Analito 2

Tiempo
Fig.1 14