PATOLOGÍA CLÍNICA Y

TRANSFUSIONAL
Enfermedad zoonótica infecciosa Cocobacilo
causada por especies de la Gram-
bacteria del género Brucella.

No forma
cápsula,
ETIOLOGÍA esporas, ni
flagelo

Aerobias e
inmóviles
Especies de género
 Brucelosis aguda Brucelosis crónica
Debilidad Influenza recurrente
Cefalea Debilidad
Dolor muscular o articular Cefalea
Sudoración Dolor muscular o articular
Escalofríos Sudoración
Fiebre
 Membrana externa
Contiene:

 Fosfolípidos distribuidos asimétricamente,

 Proteínas y
Brucella spp  Lipopolisacarido (LPS), principal antígeno

LPS; incluye dos tipos de complejos:

• Envoltura celular del microorganismo

Brucella está formada por:  Complejo liso de lipopolisacárído (S-LPS)
 Membrana interna,  Complejo rugoso de lipopolisacarido (R-LPS)
 Membrana externa y un
 Espacio periplásmico intermedio
Factor de virulencia principal

es el lipopolisacarido (LPS) de la pared celular del microorganismo.

LPS Pruebas de
aglutinación
Es el principal antígeno que participa
en las pruebas ordinarias:
Fijación de
complemento

Los LPS situados en la superficie y algunos antígenos

proteínicos interviene en las pruebas diagnósticas y en la
actividad protectora de vacunas.
 Fisiopatología

RESPUESTA
INMUNE

Ganglios linfáticos
regionales
Diseminación sistémica por el torrente
sanguínea a predominio del SRE
 fisiopatología
 LPS
 Fusión fagosoma – lisosoma
Mecanismo  Síntesis de enzimas  Desgranulación
 Proteínas de membrana Supervivencia
antioxidantes  Activación sistema
de ingreso externa (receptores de tipo en las células  Producción GMP y adenina
manosa o integrinas) mieloperoxidasa hialuro
 Producción TNF-α

SISTEMA DE  Vía clásica

 Vía alterna IgM/IgG/IgA
COMPLEMENTO
OPSONIZACION

Requiere la liberación de Brucella spp es capaz de

NEUTROFILOS gránulos de neutrófilos multiplicarse y vivir dentro
MIELOPEROXIDASA
Interacción CD14
Producción INMUNIDAD CELULAR
MACROFAGO y LPS
de IL-12 IL-2, IL-3, IL-6, IL-12, TNF-α, IFN-g

No se requieren la participación de LsTh para inducir LsB

IgM,IgG, IgA
 Transmisión Las vías de entrada de la Brucella son:

Vía oral (o por ingestión)

Vía respiratoria (o por inhalación)

Vía de contacto directo

Por inoculación accidental

 Prevención
El control de la enfermedad en los animales domésticos, principalmente a través de la vacunación
masiva de los mismos. Aún no existe vacuna para la inmunización en humanos; esto obliga a procurar
medidas protectoras de higiene y control de alimentos.

La vigilancia con fines de detección puede pasar por la realización sistemática de pruebas
serológicas y de análisis de la leche, con técnicas como la prueba del anillo en leche.

Es preciso aplicar un programa de pruebas diagnósticas y sacrificios sanitarios para erradicarla por
completo. La mejor manera de prevenir la brucelosis humana es luchar contra la infección en los
animales.

La pasteurización de la leche de animales infectados fue en su día muy importante para reducir los
niveles de infección en las personas.
 Triptosa
Caldo

Medio base la adición

La adición de agar al
de tiamina, dextrosa y
Cultivo y aislamiento 0.1% puede aumentar
sales de hierro
de bacterias patógenas el crecimiento de
aumentaron el
y saprofitas aerobios y anaerobios
crecimiento
en medios líquidos.
de brucella.
Procedimiento

Sembrar el cultivo en un tubo de caldo-triptosa por

inoculación. Incubar a 35° C a 37° C durante 24 a 48 horas .

Interpretación de Resultados

Se considera positivo cuando hay crecimiento bacteriano

cambio de coloración mas oscuro con manchas blancas
visibles.

.
 Triptosa Agar

Procedimiento
El exitoso aislamiento Interpretación de
Sembrar el cultivo en una placa
de Brucella apoya el uso Petri de agar-triptosa por estria
Resultados
de los medios de triptosa Incubar a 37° C durante 48 Se considera positivo
como medios ricos de horas, en atmosfera enriquecida
con 5 a 10% de anhidrido cuando hay crecimiento
uso general carbonico, cuando se requiera bacteriano blanquecino
 Fundamentos :Triptosa Caldo y
Agar

La triptosa es hidrolizada por la

bacteria.

gran valor nutricional ya que es

utilizado como un medio rico en
nitrógeno ,vitaminas ,minerales y
aminoácidos

balance osmótico, para medios de

cultivo microbiológicos de
brucella.
Favorece el desarrollo en general y
aislamiento de una gran variedad de
microorganismos aerobios(como
brucella) y anaerobios facultativos y
estrictos.
 Fundamento

Contiene peptonas o triptonas a las que

se adiciona extracto de levaduras, suero o
sangre para favorecer el crecimiento de
brucella.

La tripteina y la peptona de soya aportan

nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos
libres, bases púricas y primidinas,
minerales y vitaminas
 Fundamento

La peptona de soya además es fuente de

hidratos de carbono que estimulan el
crecimiento de diversos microorganismos.

 El cloruro de sodio mantiene el balance

osmótico y el agar es el agente
solidificante.
 Puede ser utilizado como base a la
cual se suplementa con nutrientes.
 Procedimiento

Siembra en estría ,sobre la

superficie del medio de cultivo

Incubación se recomienda en
bacterias aeróbicas 35 -37 ºc
durante 18 a 24 horas

Sangre al 10% o con 5% de

suero bovino, en agar soya
tripticasa (TSA) con extracto
de levaduras al 0.5%
 Interpretaciòn de resultados

Colonias de Brucella en agar tripticasa

soya con 5% de suero bovino, incubadas
a 37° C por 72 h de manera aerobia Se
observan colonias pequeñas y traslúcidas.

En 6 días de se observan colonias

de mayor tamaño y opacas
• Medio de cultivo y reactivo Resultados

Caldo Triptonado

Reactivo de Kovac

• Procedimiento
Se inocula un tubo del medio con el asa de platino, transfiriendo una porción del cultivo puro y se
incuba a 37°C por 40 a 48 horas. Luego se añaden 0,5 mL del reactivo de Kovac y se agita
suavemente.
No está diseñado para usarse en el diagnóstico
de enfermedades u otras afecciones en
humanos.

Se usa para determinar las reacciones

hemolíticas bacterianas

se puede utilizar como base para el aislamiento

de Campylobacter spp.
• Cultivo

Se multiplican por
Se incuba en CO2
medios de tripcasa
al 8 al 10%.
y soya.

A una Las cepas lisas son

virulentas y las
temperatura rugosas no
de 35 a 37°. virulentas.
Este método de hemocultivo en brucelosis, requiere
un medio de agar, que se deja solidificar sobre una de
las paredes o caras de una botella, en tanto que cierta
cantidad de caldo queda en el fondo de la misma. La
ventaja de este medio doble consiste en la facilidad
con que se determina si un cultivo es o no positivo.
La fase sólida está compuesta por Agar
Tripticasa de Soya y Agar- Agar. La fase liquida
está compuesta por caldo de Tripticasa de
Soya, Adicionado de Sulfonato Sódico de
Polianetol (SPS). El SPS actúa como
anticoagulante e inhibidor del complemento,
factores opsonizantes y leucocitos, los cuales
de no ser inhibidos pueden destruir los
patógenos presentes en la muestra. Contiene
además un 5% de Sacarosa, la cual aumenta
las posibilidades de aislamiento de
microorganismos, evitando la ruptura y
disolución de las bacterias por alteración de la
membrana celular bacteriana.
 El antígeno utilizado es una
Utilizado para el diagnostico suspensión de células de
in vitro de la brucelosis Brucella abortus
humana y animal inactivadas por calor.

Método para corroborar los Detecta la presencia de

resultados de otras pruebas anticuerpos IgM e IgG2 en el
serológicas suero

Es llamada también prueba lenta en

tubos al necesitar 48 horas para la
lectura de las reacciones de
aglutinación.
 Se realiza enfrentando diferentes diluciones
del suero problema con una suspensión de
brucelas formolizadas a una concentración
preestablecida y estandarizada.

Los anticuerpos aglutinantes hacen su

aparición muy pronto y alcanzan su título más
elevado rápidamente.

Títulos débilmente positivos (< 1/80) no

En la enfermedad aguda son ya frecuentes
permiten el diagnóstico de enfermedad activa
títulos muy superiores a 1/160 -
ya que pueden ser consecuencia de un simple
1/320 (100-200 UI/mL), casi siempre
contacto con el microorganismo o
superiores a 1/512 en la primera muestra
sensibilización
LECTURA

 La lectura se realiza sobre un fondo negro

con una luz que atraviesa los tubos.

 Las determinaciones se basan en la claridad turbidez de la

mezcla y en la firmeza de los grumos al agitar suavemente
los tubos.

Aglutinación Completa:

El líquido de la mezcla de suero – antígeno aparece claro con una

sedimentación de grumos al final del tubo, que al agitarlo
suavemente se suspenden en el liquido.
Aglutinación Incompleta:

La mezcla suero - antígeno se presenta parcialmente

clara, que al agitar suavemente el tubo aparece una leve
suspensión de grumos.

Aglutinación Negativa:

La mezcla a suero - antígeno aparece turbia, a una suave

agitación no aparecen grumos.

Interpretación de resuItados

En sueros humanos se considera como título

positivo una dilución 1/200. Un título de l/100 es
considerado sólo como presuntivo.
 Prueba selectiva que detecta
solo presencia de IgG

SE BASA:

 Los anticuerpos IgM se degradan debido a

la acción de compuestos, que contienen el
radical tiol, como el 2- mercaptoetanol

 Las moléculas IgG no sufren efecto que

altere su actividad para reacción de
aglutinación
 Prueba 2 - Mercaptoetanol

• En el hombre esta •La prueba 2-

prueba debe Mercaptoetanol es útil
incorporarse en el para detectar
diagnostico de infectados crónicos
rutina humanos o animales
 Gran interés para el Presencia de anticuerpos
aglutinantes y no
diagnóstico de la aglutinantes,
brucelosis crónica fundamentalmente IgG

Facilitar la aglutinación
Aporta en 48 h de los anticuerpos no
una información aglutinantes del suero
complementaria problema, fijados a la
suspensión antigénica
de gran utilidad. de B. abortus

Hay que citar como

El título obtenido es, por
posibles falsos positivos
ello, como mínimo el de
las reacciones cruzadas
la aglutinación y
con Vibrio cholerae,
generalmente es mucho
Francisella tularensis y
más elevado.
Yersinia enterocolítica.
 Prueba de
Brucella Animales
“screening” o
Abortus humanos
“Card Test”

8% de células de
B.abortus solución
Detecta Resultado a los 4
salina fenolada al
principalmente IgG min
0,5% y colorante
rosa de bengala
 Se basa en la inhibición

Fundamento
e inactivación de
aglutininas inespecíficas
(IgM) a pH acido (pH
3,6)

difícilmente detectables
por el método tradicional a pH acido (pH 3,6)
de aglutinación en tubo.

útil para el diagnóstico

en fase crónica de la
enfermedad, los cuales
presentan un nivel
elevado de IgG
 Lectura Interpretación
Se recomienda prueba de 2-
mercaptoetanol como prueba
confirmatoria o la prueba de fijación de
Aglutina complemento.

Sensibilidad del
94% y especificidad
No aglutina
del 100%
Reacción de
Brucella Animales
aglutinación
Abortus humanos
rápida

suspensión de B.
abortus al 3-10% de
Detecta IgM, IgG, Resultado a los 4
gérmenes en fenol,
IgA min
con verde brillante
y cristal violeta.
 Suspensión de
Brucella abortus en
solución fenolada, a
la que se agrega:
Se enfrentan cantidades
decrecientes del suero a
investigar con cantidades
constantes de antígeno y se
observa la presencia o no de
Una aglutinación tardía y
aglutinación. con gránulos finos:
Mezcla de violeta
genciana y verde
Pacientes vacunados o
Brillante.
enf. Crónicos.

El resultado: Una
aglutinación rápida y
de grumos grusos:
Brucelosis aguda.
 Procedimiento y
Lectura Interpretación
Todo el material de vidrio deberá estar perfectamente Negativo: Ausencia de aglutinación.
limpio y libre de detergentes. Llevar a temperatura
ambiente los reactivos y los sueros a ensayar, agitar Positivo: Suero reactivo (Indicar
adecuadamente la suspensión antigénica antes de usar. dilución).
Sobre una placa de vidrio colocar: Interpretación: en caso de obtener títulos
SUERO 80ul 60ul 40ul 20ul 5ul significativos (1/40,1/80), es importante el
ANTÍGENO 1gts. 1gts. 1gts. 1gts. 1gts. control del paciente a través de una curva
DILUCIÓN 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320
de aglutinación, que se efectúa sobre los
resultados obtenidos con determinaciones
Mezclar con varilla de vidrio o madera, empezando por la seriadas. En sueros de enfermos, (fase
dilución mayor. Balancear con movimientos circulares aguda) pueden encontrarse títulos de
entre 1 a 3 minutos, observar sobre fuente luminosa con 1/320 o mayores. Para el titulo se
fondo oscuro, la presencia o no de aglutinación. considera la última dilución que da
aglutinación.
Prueba de ELISA
 ELISA

detección de estos Sensibilidad de 89%

sensible y específica
anticuerpos tipo IgM y especificidad de
frente a Brucella. 100%.

Fundamento Toma de
del método: muestra
Basado en la La sangre debe
reacción de los extraerse en
anticuerpos de la condiciones
muestra con el asépticas
antígeno unido a mediante técnicas
la superficie de de venipuntura
poliestireno. por personal
experimentado.
 Protocolo de validación por el usuario:

Cada ensayo debe utilizar control Su utilización permite la validación

positivo, negativo y cut off. de la prueba y el equipo.

Las densidades ópticas (D.O.) de los controles

deben estar en los rangos siguientes. En caso
contrario se desechará la prueba.

CONTROL D.O.
Control positivo >0,9
Control negativo < 0,5
Control CUT OFF > 0,55
< 1,5
 Interpretación de resultados

Las muestras con resultados dudosos

9 = no tienen anticuerpos específicos frente a
deben ser vueltas a analizar y/o
Brucella de tipo IgM. 11 = anticuerpos
solicitar una nueva muestra para
específicos frente a Brucella de tipo IgM.
confirmación de los resultados.

INDICE INTERPRETACIÓN

<9 Negativo
9 - 11 Dudoso
> 11 Positivo
Gracias