MOLÉCULAS RECOMBINANTES

INTEGRANTES:
CRUZ VALDEZ LORENA
FRAGOSO GÓMEZ NAZLLELY
GÓMEZ RANGEL ADRIANA
MARTÍNEZ CALIXTO DANIEL
GRUPO: 7220601
INGENIERÍA EN GENÉTICA
 ¿Qué es?
• La técnica del ADN recombinante se utiliza
en estudios sobre la regulación de la
expresión génica, en la regulación de la
producción comercial de síntesis de
proteínas como la Insulina o la hormona
del crecimiento, en el desarrollo de
organismos transgénicos y en la
amplificación del ADN, es decir, en
obtener un gran número de copias de un
gen determinado. En este último caso,
existe una técnica mejor, denominada con
las siglas PCR.
Las etapas en la producción de ADN recombinante
son las siguientes:

Preparación de la secuencia del ADN para su clonación

Preparación de un vector de clonación

Formación del ADN recombinante

Introducción del ADN recombinante en una célula anfitriona

Propagación del cultivo

Detección y selección de clones recombinantes

1. Preparación de la secuencia del ADN para su clonación

Es la parte esencial del proceso, ya

que el ADN debe separarse y
concentrarse.

Concentrar y
Romper las células Separar el DNA
fragmentar el DNA

Añadir reguladores
de la expresión
Aislar el DNA
génica si se va a
expresar el DNA.
2. Preparación de un vector de clonación.

El vector es el portador de la
secuencia de ADN que se desea
clonar. Un vector debe presentar las
siguientes características:

Contener distintos
Aislar una pequeña Poder ser incluido en la
puntos de ataque a
secuencia de DNA, por célula anfitriona con
enzimas de restricción y
ejemplo un plásmido. facilidad.
que sean conocidos.

Poseer un gen marcador

Replicarse de forma con el que puedan
independiente al ADN de identificarse y
la célula anfitriona. seleccionar las células
clonadas.
Etapas del proceso consisten en:
Una vez que el ADN ha sido
introducido en el vector se
denomina ADN inserto, o
1. Cortar el vector
simplemente, inserto.
con enzimas de Los tipos de vectores que se
restricción, las utilizan suelen ser plásmidos,
mismas enzimas que virus como el fago l,
se utilizaron para cromosomas creados de
cortar el ADN que se forma artificial y quimeras.
quiere insertar.
2. Unir el vector y el
ADN que se va a clonar
mediante los llamados
extremos cohesivos, o
pegajosos, o
escalonados.
3.Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona

Introducción del ácido desoxirribonucleico (ADN) al

interior de la célula huésped

Utilizando metodologías que facilitan el ingreso

de la molécula de ADN recombinante

Existen varias formas de realizar esto, y dependerá

del tipo de célula huésped (procarionte o eucarionte)
que se utilice.
 «EXISTEN
BÁSICAMENTE TRES
PROCESOS
MEDIANTE LOS
CUALES LAS
CÉLULAS PUEDEN
ADQUIRIR MATERIAL
GENÉTICO
Los tipos de células anfitrionas son:

Células eucariotas: aunque las células

eucariotas son, en general, difíciles de
mantener se usan levaduras y células
tumorales:
• Levaduras: se utilizan en procesos
Células bacterianas: son las relacionados con la investigación
más utilizadas, ya que de la expresión y la regulación
tienen una alta velocidad de génica y la síntesis de proteínas
replicación, un bajo coste eucariotas.
de mantenimiento de las • Células tumorales: apropiadas en
colonias y son fácilmente procesos de clonación, ya que la
manipulables. velocidad de replicación es muy
alta y se mantienen los caracteres
sin producirse cambios, pues son
muy estables.
4. Propagación del cultivo

Se induce la • Se producen también

copias de ADN
división de células recombinante y, por ello,
anfitrionas la clonación.

Se efectúa una • Como medio de cultivo

siembra en placas • Permitiendo el
crecimiento de células
Petri con agar
Cada una de ellas • A distintos medios líquidos
• donde seguirá
será seleccionada y Aumentando el número de
transferida individuos de la colonia.
5. Detección y selección de los clones
recombinantes

En los procesos de clonación se utiliza un gran número de células.

Al final del proceso se hace necesario separar las células que
contienen ADN recombinante de las que no lo contienen.

La detección y la selección de colonias se realiza en los medios de

cultivo. En los procesos de clonación se obtienen células
anfitrionas que no han incluido el vector, células recombinantes, es
decir, que han incluido el vector con el ADN para recombinar, y
células anfitrionas con vector que no lleva el ADN inserto
Métodos para detectar y
•Se utiliza una sonda marcada que
hibrida con el ADN recombinante o
Método de hibridación
con el ARN mensajero que se
transcribe a partir de él.
seleccionar son:

Se detecta la proteína codificada en

Método inmunológico el ADN recombinante mediante
anticuerpos específicos.

Por ejemplo, si la colonia no produce

Inserción del vector y el ADN
enzima lactasa, es que el ADN
recombinante en un gen de la célula
recombinante se encuentra dentro del
anfitriona que queda desactivado.
ADN bacteriano en ese gen.

En el medio se agrega el antibiótico y

Vector con genes de resistencia a un sólo crecerá aquella colonia que sea
Métodos genéticos
antibiótico resistente a él, por tanto, que porte el
ADN.

Se utilizan células anfitrionas mutantes

que no puedan sintetizar, por ejemplo,
Colonias con defectos nutricionales un aminoácido. Para que la colonia
sobreviva, el aminoácido debe ser
añadido al medio de cultivo.
PROTEINAS RECOMBINANTES

Las proteínas
recombinantes, también
llamadas proteínas
quiméricas o proteínas
heterólogas, son aquellas
que se obtienen al expresar
un gen clonado en una
especie o una línea celular
distinta a la célula original
A escala industrial, la producción de proteínas
recombinantes involucra las siguientes etapas:
• Fermentación: las bacterias
son cultivadas en tanques
sellados (fermentadores) que
contienen un medio de
cultivo nutritivo.
• Extracción: las células son
centrifugadas para recuperar
las proteínas de su interior.
• Purificación: se separa la
proteína recombinante de las
otras proteínas bacterianas.
• Formulación: la proteína
recombinante es modificada
para conseguir una forma
estable y estéril que puede
administrarse
terapéuticamente.
 APLICACIONES

• El ADN recombinante es utilizado para identificar, mapear y

obtener la secuencia de genes, y determinar su función.

• La investigación de ADNr es utilizada para analizar la expresión

de genes en las células de los individuos, y a través de los tejidos
de organismos completo.
QUIMOSINA RECOMBINANTE
La quimosina es una enzima utilizada para la manufactura del queso.

Fue el primer aditivo alimentario diseñado genéticamente que fue utilizado

en el ambiente comercial.

Los procesadores obtuvieron la quimosina del cuajo, una preparación

derivada del cuarto estómago de los terneros que se alimentan de leche.

Los científicos diseñaron una cadena (K-12) no patogénica de la bacteria "E. coli" para la
producción a gran escala en el laboratorio de la enzima.

Dicha enzima recombinante microbiológicamente producida, estructuralmente idéntica a

la enzima derivada del ternero, cuesta menos y es producida en cantidades abundantes
 INSULINA HUMANA RECOMBINANTE

La insulina recombinada es
sintetizada insertando el gen de
insulina humana en E. coli, o en
levadura (saccharomyces
cerevisiae) que luego produce
insulina para uso humano
 HORMONA DEL CRECIMIENTO HUMANO
RECOMBINANTE

• Administrada a • Antes de que la

pacientes cuya glándula hormona recombinante
pituitaria genera estuviera disponible, la
cantidades insuficientes hormona para uso
para sostener un terapéutico era
crecimiento y desarrollo obtenida de las
normal. glándulas pituitarias de
cadáveres
 FACTOR DE COAGULACIÓN VIII RECOMBINANTE

Proteína de coagulación
sanguínea administrada a
pacientes con el desorden de
sangrado conocido como
hemofilia.

Antes del desarrollo del factor

de coagulación VIII
recombinante, la proteína era
obtenida mediante el
procesamiento de grandes
cantidades de sangre humana de
múltiples donadores
 VACUNA CONTRA LA HEPATITIS B RECOMBINANTE

La Hepatitis B es una infección El desarrollo de la vacuna

controlada a través del uso de una recombinante fue importante ya
vacuna de hepatitis B recombinante, que el virus de la hepatitis B, a
la cual contiene una forma del diferencia de otros virus
antígeno de superficie del virus de la como poliovirus, no pueden ser
hepatitis B producido en las células cultivados in vitro
de levadura
 DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN CON VIH

El test de anticuerpos (ELISA o western blot )utiliza una proteína

de VIH recombinante para encontrar la presencia de anticuerpos
que el cuerpo ha producido en respuesta a una infección de VIH.

El test de ADN busca la presencia del material genético del

VIH utilizando RT-PCR (Reacción en cadena de la polimerasa
con transcriptasa inversa)

El desarrollo de la prueba RT-PCR fue posible gracias a la

clonación molecular y la secuencia de análisis del genoma del
VIH