PRUEBA DE FRAGILIDAD

GLOBULAR
 PRUEBA DE FRAGILIDAD GLOBULAR:
INTRODUCCIÓN
 Cuando los glóbulos rojos se exponen a soluciones hipotónicas en las células
entra agua hasta que se alcanza un equilibrio, a medida que este proceso se
desarrolla, las células se hinchan hasta que su volumen interno aumente
demasiado que provoca la lisis del glóbulo rojo. Debido a que en las
membranopatias (esferocitosis, Eliptocitosis) la relación superficie volumen se
encuentra disminuida, en soluciones menos hipotónicas se lisan mas que los
glóbulos rojos normales y por consiguiente tienen una fragilidad globular
aumentada, Esta prueba es útil para la confirmación de la esferocitosis
hereditaria.
 Con esta prueba se mide la resistencia osmótica de la celula, para ello se
someten las células rojas a diferentes concentraciones de cloruro de sodio, la
membrana es semipermeable, es decir, que permite el paso de agua pero
restringe el paso de iones como el cloro, el potasio y el sodio, al entrar agua a
la célula esta se hidrata y si la hipotonicidad supera el limite de resistencia
de la membrana esta se lisa y se libera hemoglobina al sobrenadante, que es
lo que se determina por espectrofotometria.
 PRUEBA DE FRAGILIDAD GLOBULAR:
INTRODUCCIÓN
 En anemias hemoliticas con células que presentan una relación superficie
volumen aumentada la fragilidad osmótica estará disminuida y la resistencia
del glóbulo rojo estará aumentada, algunas de estas son: anemias
hipocromicas, talasemias.
 Hemolisis inicial o resistencia mínima: Esta dada por la concentración de NaCl
en donde se observa el primer indicio de hemolisis. En los glóbulos rojos
normales esta se presenta en 0.45%
 Hemolisis total o resistencia máxima: Esta dada por la concentración de NaCl
en donde hay lisis total de los glóbulos rojos. En los glóbulos rojos normales se
presenta en 0.35%
 FUNDAMENTO
Objetivo: Medir la resistencia del glóbulo rojo
cuando se expone a diferentes
concentraciones de NaCl
PRUEBA DE FRAGILIDAD GLOBULAR
 PROCEDIMIENTO

 En cada tubo adicionar 20 ul de muestra de sangre, cambiar la punta con cada

tubo
 Mezclar los tubos por inversión
 Dejar en reposo 30 minutos
 Centrifugar 5 minutos a 2000 rpm
 Leer la absorbancia de cada tubo a 540 nm tomando como blanco el primer
tubo (concentración de NacL 0.85%)
 Determinar el porcentaje de hemólisis con la siguiente fórmula
 % de hemolisis = Absorbancia de cada tubo
_______________________ x 100
Absorbancia total (tubo 14)
 PROCEDIMIENTO
 Graficar en la hoja de papel milimetrado
 % de hemólisis vs [NaCl]
 Interpretación: La curva es sigmoidea reflejando una población mixta de glóbulos rojos, la
cola de la curva representa un pequeño numero de células con resistencia aumentada o
disminuida equivalente a glóbulos rojos seniles y aquellos recién emitidos por la medula ósea,
en la curva se observan 3 zonas bien delimitadas:
 1. Se inicia la curva partiendo desde 0, en los primeros tubos no hay hemolisis
 2. Al disminuir las concentraciones de NaCl se inicia la hemolisis y aumenta gradualmente
 3. Hemolisis total o liberación máxima de hemoglobina dada la hipotonicidad de la solución

 Valores de referencia:
 En los globulos rojos normales los valores corresponden:
 10% de hemolisis: 0.48 – 0.44% de NaCl
 50% de hemolisis: 0.42%
 90% de hemolisis: 0.40 – 0.36%
EJEMPLO
EJEMPLO
 CONCLUSIÓN

RFG Aumentada RG Disminuida

 CICLAJE

 Fundamento

La prueba falciforme es una prueba confirmatoria que se practica con menos

frecuencia, pero que permite identificar la presencia de células drepanociticas
características de la anemia falciforme y del rasgo falciforme, el metabisulfito
de sodio se emplea para reducir la tensión de oxigeno, la sangre se desoxigena
mediante la colocación de la sustancia reductora de metabisulfito de sodio en un
portaobjetos y el sellado con un cubreobjetos para evitar la reoxigenacion de las
células, cuando esta presente dentro del glóbulo rojo hemoglobina S (se en
estado homocigoto o en estado heterocigoto) la desoxigenación de la sangre
conduce a la formación de las células falciformes (anemia falciforme) o de las
células en forma de hoz (rasgo falciforme).
 PROCEDIMIENTO

 En una lamina portaobjeto agregue una gota de sangre del paciente, una gota
de sangre del control positivo y una gota de sangre de un paciente normal,
agregue dos gotas de metabisulfito de sodio (si la hemoglobina del paciente
es normal) si la hemoglobina es menor a 8 g/dL adicione una sola gota de
metabisulfito de sodio a la muestra del paciente y del control positivo, al
control negativo adicione una gota de solucion salina
 Con un palillo mezcle muy bien la muestra con el reactivo
 Coloque encima de la mezcla una laminilla evitando dejar burbujas (oxigeno
presente), con la ayuda de un palillo presione la laminilla hasta obtener una
capa delgada, limpie el exceso de muestra y selle con esmalte transparente o
con vaselina
 PROCEDIMIENTO

 Coloque las preparaciones en cámara húmeda por 15 - 30 minutos

 Revise bajo el microscopio en el objetivo de 40x (si utiliza vaselina tenga
mucho cuidado
 de no contaminar el objetivo)
 Observe la presencia de células falciformes o de las células en forma de hoz,
si encuentra mas del 10% la muestra será positiva 13. Si después de los 30
minutos la muestra esta Negativa se debe dejar 24 horas y volver a revisar
 La muestra se registra como positiva o negativa, una prueba positiva indica la
presencia de la anormalidad pero no distingue entre una anemia falciforme y
un rasgo falciforme, en ese caso se debe realizar una prueba confirmatoria
que es la electroforesis de hemoglobina
 RETICULOCITOS

 Son eritrocitos inmaduros

 Retículo o red cromatinica formado por restos de RNA
 Azul de cresilo brillante
 RETICULOCITOS: PROCEDIMIENTOS

 Mezclar la sangre total

 En un tubo colocar partes iguales: 2 gotas de sangre + 2 gotas de reactivo
(azul de cresilo brillante)
 Incubar a 37°C por 15 minutos
 Realizar los extendidos y dejar secar al aire
 Recuento en objetivo de 100X (promedio por campo de 100 glóbulos rojos)
 500 – 1000 glóbulos rojos
 El recuento de reticulocitos debe realizarse en las primeras 2 horas
después de extraída la sangre (maduran in vitro) – temperatura ambiente
 RETICULOCITOS

 Valor relativo: es el valor en % que se obtiene haciendo una relación

después de contar los reticulocitos presentes en 1000 eritrocitos
 Reticulocitos (%): Número de reticulocitos contados / número de eritrocitos
observados X 100

 Valor corregido de reticulocitos: como el valor relativo viene referido a

una cifra normal de eritrocitos, cuando existe anemia con disminución del
número de eritrocitos, este valor debe ser corregido de acuerdo con la
intensidad para poder ser considerado como real:
 Reticulocitos corregidos (%): Reticulocitos observados (%) X Hto del paciente /
Hto normal
 RETICULOCITOS

 Valor absoluto de reticulocitos: nos da a conocer el número de

reticulocitos por mm3 de sangre.
 Valor absoluto reticulocitos: No. De eritrocitos por mm3 x valor relativo /100

 IPR: Es una medida aproximada de la producción efectiva de eritrocitos,

en condiciones normales los reticulocitos permanecen en médula ósea
durante 2-3 días.
 IPR: Reticulocitos corregidos /2
 IPR: porcentaje de reticulocitos observado X Hto del paciente
 ___________________________ _____________
 Tiempo de maduración de reticulocitos Hto normal