Regulación de la actividad enzimática, 1

Regulación de la actividad enzimática

k+2e0 s Vmax s
v= =
Km + s Km + s

I. Sobre e0: Regulación de la concentración enzimática

II. Sobre Km y k+2: Regulación de la actividad intrínseca

de la enzima

1. Regulación alostérica
2. Regulación por modificación covalente
Regulación alostérica

Procesos a nivel celular; regulación de ajuste fino

de la actividad enzimática, a través de efectos de
retroalimentación (negativa o positiva)

Regulación por modificación covalente

Procesos a nivel supracelular (orgánico); regulación
a gran escala de actividades enzimáticas, a través de
modificación covalente de enzimas, provocadas por
señales (transducción de señales)
 Retroalimentación negativa en vías metabólicas, 1

Síntesis de Isoleucina

Thr a-cetobutirato Ile

Treonina
desaminasa

El producto final de la ruta, Isoleucina, inhibe a la primera

enzima de la misma, Treonina desaminasa
 Retroalimentación negativa en vías metabólicas

Síntesis de pirimidinas

ATP
+

Asp + CP Carbamil aspartato CTP

ATCasa

El producto final de la vía, CTP (citidin trifosfato) inhibe a la

primera enzima de la ruta metabólica, Aspartato transcarbamilasa

Al mismo tiempo, dicha enzima puede ser activada por ATP

 Rutas metabólicas controladas por retroalimentación

Ruta Enzima Inhibidor

Glicolisis Fosfofructokinasa ATP

Neoglucogénesis FBP fosfatasa AMP
Bios. Ács. Grasos AcetilCoA carboxilasa AcilCoA
Bios. Colesterol HMGCoA reductasa Colesterol
Bios. Purinas PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP
En el estudio de las enzimas controladas por realimentación
negativa, se comprobaron una serie de regularidades en las mismas:

1. Primer paso de una ruta metabólica o punto de ramificación

2. Enzimas de naturaleza compleja: subunidades; la enzima puede
desensibilizarse a sus inhibidores por diversos métodos.
3. Los inhibidores se comportan como competitivos (elevan el valor
de la Km aparente, pero sin embargo no son análogos estructurales
del substrato

Estas últimas características lleva al concepto de alosterismo:

Una acción sobre la actividad enzimática que se desarrolla
fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1960)
 Centro Centro Centro
Centro
activo alostérico activo
alostérico

s i s

Cuando el inhibidor ocupa

En ausencia de inhibidor, el centro alostérico, tiene
el substrato se fija normal- lugar un cambio conformacional
mente al centro activo en el centro activo que impide la
fijación del substrato

Inhibición alostérica
 Otra característica importante de las enzimas alostéricas
es que presentan cinéticas anómalas, normalmente
cinéticas sigmoides:

v
La presencia de una
sigmoide implica
la existencia de
cooperatividad en la
fijación del substrato

s
 La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijación de una
molécula de substrato favorece la fijación del siguiente, y así
hasta ocuparse toda la molécula

s + s s + s s + s s
1 2 s 3 s s

En términos de Km veríamos que Km1 > Km2 > Km3

Existe también cooperatividad negativa, cuando la fijación de

una molécula de substrato dificulta la fijación del siguiente.
El comportamiento cooperativo implica:

1. Que hay más de un sitio de fijación de substrato

por molécula de enzima (estr.cuaternaria)

2. Que hay interacciones entre los sitios de fijación

Un sistema alostérico clásico es la Hemoglobina:

1. La fijación de su “substrato”, O2, es de tipo sigmoide

2. La fijación del “substrato” puede inhibirse por efectores

(H+, CO2, 2,3-BPG) que no actúan sobre el “Centro Ac-
tivo” (grupo hemo)

3. Las subunidades, por separado, presentan cinética

michaeliana en la fijación de O2
 Cinéticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina

1.0

Y
0.8 Mioglobina

0.6

0.4

Hemoglobina
0.2

0.0
0 2 4 6 8 10 12

s
 Efecto del pH sobre la saturación de la hemoglobina
(Efecto Bohr)
100

80
pH 7.0
pH 7.4
Saturación de O2, %

60

pH 6.6
40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturación de la hemoglobina

100

80
Saturación de O2, %

0
60 0.1 mM
1 mM

40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 Inhibidores y activadores
alostéricos

1.0
Y
(+ Activador)
0.8
V+
0.6
(sin efectores)
V0
0.4
(+ Inhibidor)

0.2

V-
s
0.0
0 2 4 6 8 10 12
Los efectores alostéricos operan sobre el grado de
cooperatividad del sistema:

- Los inhibidores alostéricos aumentan el grado de

cooperatividad

- Los activadores alostéricos disminuyen el grado de

cooperatividad; a concentraciones elevadas de activador,
la cinética pasa a ser michaeliana, y deja de ser sigmoide.
 Ecuación de Hill
h > 1, cooperatividad positiva
h
_ Ks
y h = 1, no hay cooperatividad
1  Ks h
h < 1, cooperatividad negativa

Obsérvese que para h=1, esta ecuación se reduce a una forma

normalizada de la ecuación de Michaelis-Menten:

1
_ v k 2 x s Km  s Ka s
y    
Vmx k 2 e0 Km  s 1  1  s 1  Ka s
Km
 Modelo MWC
Forma R

s s s s s s s
s s s

i i i
i i i i i i i

Forma T
 a 1  a 
n 1
_
y
L  1  a 
n

a: Concentración normalizada de substrato, s/Km

L: Constante alostérica: a mayor valor de L, mayor

grado de cooperatividad (positiva)

n: Número de sitios de fijación de substrato