ELISAS

Antecedentes
Ventajas del ELISA
 Muy sensible  Cuantificación de
 Gran número de muestras sustancias diversas:
procesadas  HORMONAS
simultáneamente.  metabolitos

 Resultados rápidos  toxinas

 fármacos
 Utilización de reactivos
menos tóxicos  mediadores de inflamación

 proteínas
 Menor costo
 citoquinas

 agentes infecciosos, etc.

 SOPORTE SÓLIDO

Material del Formas disponibles Unión

Soporte
Nitrocelulosa Membranas, No covalente
Láminas
Polivinilo Placas, Láminas Covalente
Poliestireno Placas, Láminas, Covalente
Perlas
Látex, nylon, Membranas, Covalente
celulosa Láminas, Perlas
y sefarosa
Fundamentos y Tipos de ELISA's.

 La técnica se basa en el uso de antígenos o anticuerpos

marcados con una enzima (conjugados), los cuáles tienen
inmunológica y enzimática.

 Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo)

marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte
(inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo
quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente
revelada mediante la adición de un substrato especifico
que al actuar la enzima producirá un color observable a
simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro.
 ELISA Directo

ELISA Indirecto

Anticuerpos ELISA sándwich

marcados

Doble (DAS)
ELISA
Heterólogo
(HADAS)
Antígeno ELISA
marcado competitivo
 ELISA Directo

Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos.

Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan
con los antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados
que no hayan reaccionado.

Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar
la reacción si se desea.

Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

 ELISA Indirecto
Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio.
Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.

Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán específicamente con
los antígenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.

Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima. Lavado para eliminar los anti-
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar
la reacción si se desea.

Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

ELISA
sándwich
Conjugados
 La enzima escogida como marcador debe unirse
fácilmente a antígenos y anticuerpos, encontrarse
en estado puro a un precio razonable y tener un
substrato cromogénico o fluorogénico conveniente y
de fácil preparación.
 Lectores ELISA
 Los lectores ELISA son espectrofotómetros capaces
de realizar lecturas seriadas de cada uno de los
pocillos de la placa ELISA. A diferencia de un
espectrofotómetro convencional, con capacidad de
leer todas las longitudes de onda del ultravioleta y
el visible de manera continua, los lectores de ELISA
disponen de sistemas de filtros que solo permiten la
lectura de una o pocas longitudes de onda; son la
que se corresponden con las necesarias para
determinar la densidad óptica de los cromógenos
más comúnmente utilizados.