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Tecnicas de Identificación de Anticuerpos
Tecnicas de Identificación de Anticuerpos
PRUEBA INDIRECTA
GR con Ag conocido unidos a una placa pretratada con
glutaraldehido y poli-lisina, Ac especifico
Se agrega suero ,incubar,lavar proteinas remanentes
Indicador para el Ac fijado GR recubiertos con IG
Interpretación : Idem
PRUEBA DE ADHERENCIA DE
GR EN FASE SÓLIDA
PRUEBA DE GEL
Utiliza microtubos contenidos en una tarjeta de
gel.Este formato permite la centrifugación simultánea
de los tubos(6) en equipos especialmente diseñados
La incubación del Ac con los GR en suspención se
realiza en la parte superior del tubo ,luego se
centrifuga para que los GR entren en contacto con el
As que baña el gel
Los geles actúan como filtro,reteniendo los aglutinados
y dejando pasar los GR libres que se depositan en el
fondo
EXISTEN 3 FORMULACIONES BÁSICAS
DEL GEL
Gel neutro:
Solo contiene la matriz del gel-sephadex para
detección deaglutinados producidos por Ac
aglutinantes
Prueba inversa ABO,investigación de Ac frios y
pruebas enzimáticas
Gel especifico:
Mezcla de gel-sephadex contra un Ag de gr
sanguineo
Determinación de Gr sanguineo
Gel antiglobulina:
Se usa en la P de Coombs para identificar Ac
antieritrocitarios incapaces de producir
aglutinación directa
Puede ser utilizado para detectar e identificar
Ags y Ac,pruebas de compatibilidad
pretransfusional
En los tubos que contiene el panel ABO,el gel
está en medio salino,mientras que en los del
panel selector está en reactivo de Coombs
VENTAJAS:
Puede efectuarse técnicas en ½ salino,
enzimático,antiglobulinico
Es automatizable
DESVENTAJAS:
Costo y equipamiento
Partículas de gel :filtros que atrapan los
aglutinados
Aglutinados grandes:Parte superior
Aglutinados pequeños: Parte Inferior
No aglutinados :extremos en pico
APLICACIONES:
Detectar e identificar Ac o Ag
Pruebas de compatibilidad
Prueba Funcional: ERITROFAGOCITOSIS
CFA
GR
fagocitado
GRs
adheridos
-INHIBICIÒN DE LA HEMAGLUTINACIÒN:
Neutraliza un Ac especìfico con su sustancia soluble
correspondiente en las pruebas de identificaciòn de Ac (
ùtil cuando se trabaja con muestras sèricas que contienen
mùltiples especificidades)
TRATAMIENTO ENZIMÀTICO:
Se utilizan para tratar Gr con el fin de potenciar cierta
reactividad de Ac o proporcionar una mas efectiva
adhesiòn de Ac en los procedimientos de autoadsorciòn
POTENCIACIÒN DE LA REACTIVIDAD
La potenciciòn de la reactividad Ac con cèlulas tratadas
enzimàticamente se demuestra en los sistemas: Rh, Kidd;
Lewis, Ii, P
DESTRUCCIÒN DE LA REACTIVIDAD:
El tratamiento Ez puede tambien usarse par destruir la
reactividad de los Ag: M, N, Fya, Fyb, Pr, Cha, Rga
ADSORCIÒN:
ELUCIÒN:
Proceso utilizado para la eliminaciòn de Ac unidos a
hematies:
1º se lavan las cèlulas con SF,para eliminar cualquier Ac no
unido.
Mètodos: *Por calor( disocia el Ac de los Ag eritrocitarios
:56-60ºC durante 10 min efectivo para los Ac IgM
*Congelaciòn /descongelaciòn: bueno para la disociaciòn de
las IgM
*Solventes orgànicos: Eter ,etanol , cloroformo, xileno :
Para la IgG
*Eluciòn àcida con Digitonina y Glicina: (por alteraciòn del
Ph)
-TITULACIÒN DE Ac:
Es un mètodo para determinar semicuatitativamente la cantidad
de Ac presente en un suero determinado
El tìtulo se expresa como la recìproca de la diluciòn sèrica mas
alta que provoca la aglutinaciòn macroscòpica
Aplicaciones :en estudios prenatales
UTILIZACIÒN DE REACTIVOS SULFHIDRILOS:
El 2ME rompe los enlaces disulfuros y son utilizados para
inactivar la capacidad de aglutinaciòn de las IgM, destruyendo la
estructura pentamèrica de la IgM .Son ùtiles para investigar las
IgG clìncamente significativa en presencia de un autoAc y para la
deteminaciòn de ABO y Rh en presencia de un autoAc frìo
PRUEBAS PARA Ag ERITROCITARIOS
Cuando el paciente tiene un Ac complicado a veces es ùtil tipificar
los Gr del paciente para los otros Ag de grupo sanguineo
frecuentes para determinar de que Ag carece el paciente y tener
informaciòn sobre que Ac podrìa formar el paciente
-FUENTE DE REACTIVOS : Antisueros :Plasmas extraido de
donates que fueron inmunizados por transfusiòn o embarazo o
animales inmunizados con Ag purificados .
Se debe ensayar el antisuero para especificidad , avidez y tìtulo
ANTICUERPOS MONOCLONALES ; Son sintetizados por
Hibridomas linfocitarios (fusiòn de celulas productoras de AC de
animales y cèlulas neoplasicas)
Los Ac monoclonales se diferencian de los Ac convencionales por
la especificidad ( reaccionan con uno en vez de con mùltiples
determinantes antigènicos.) el grado de pureza y
reproductibilidad
Algunos reactivos derivados de Ac monoclonales murinos:anti A,
anti B, antiH, Anti M, anti N, anti Lewis , anti P y los de origen
humano:antiD, anti C, anti E , antic
LECTINAS: contiene proteinas receptoras que reaccionan con
carbohidratos de la membrana del Gr para causar
hemaglutinaciòn
¡GRACIAS!