MICROBIOLOGIA DE

Bartonella bacilliformis
Rina Meza
Instituto de Investigación de Enfermedades
Tropicales de la Marina de los Estados Unidos
Lima, Peru

Marzo 21, 2005

CLASIFICACION TAXONOMICA
• Phylum BXII. Proteobacteria
• Clase I: Alphaproteobacteria
• Orden VI: Rhizobiales
• Familia II: Bartonellaceae
• Genero: Bartonella.

Fuente: Garrity, G.; Winters, M.; Searles, D. “Taxonomic Outline of the Procaryotic Genera.”
Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Second Edition. Realease 1.0, April 2001
 BARTONELLA
• Microorganismos pequeños, Gram
negativos, aerobicos, de dificil desarrollo
en cultivos.
• Se encuentran en diferentes
animales pero aparentemente no
desarrollan enfermedad
• Algunas especies son capaces de
infectar los eritrocitos y otros
simplemente se adhieren a las celulas
del hospedero
• Murray, et al., Medical Microbiology 3 rd Ed. Table 35-3
 ESPECIES QUE PUEDEN
INFECTAR ERITROCITOS
ORGANISMO ENFERMEDAD

B. quintana Fiebre de las Trincheras

B. henselae Enfermedad del arañazo del Gato

Fiebre de la Oroya, Bartonellosis,
B. bacilliformis Enfermedad de Carrion

B. elizabethae Endocarditis

Fuente: Murray, et al., Medical Microbiology 3rd Ed. Table 35-3

 MICROFOTOGRAFIA DE INVASION POR
BARTONELLA BACILLIFORMES

Fuente: LEE ANN BENSON, SIDDHARTHA KAR, GERALD McLAUGHLIN AND GARRET M. IHLER
Vol. 54, No. 2 INFECTION AND IMMUNITY, Nov. 1986, p. 347-353, American Society for Microbiology
Verruga Peruana
BARTONELLOSIS
• Es una enfermedad infecciosa que presenta tres
fases clínicas causada por Bartonella bacilliformis
– Fase Aguda o Hemática
– Fase Intercalar
– Fase Eruptiva o Verrucosa
• Reservorio: El unico demostrado es el human.
• Vector: Se incrimina algunas especies del género
Lutzomyia como el transmisor causante de la
enfermedad en humanos.
 ESQUEMA SOBRE LA PATOGENIA DE
LA BARTONELLOSIS

Fuente: Javier Arias-Stella “Bartonellosis. De Endemia Regional a Infeccion emergente mundial” Acta Medica Peruana Vol. XVII No. 1
Julio-Setiembre de 1999
 MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Es una bacteria pequeña: 0.25 a 0.5µm
por 1 a 3 µm
• Localización: intracelular
• Pleomórfico: bacilo, cocobacilo, cocoide
y formas L
• Gram negativo
• Posee multiples flagelos unipolares
(flagelina 42kDa)
• Coloración: Giemsa o Romanowsky
 MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Crecen en medios especiales muy
enriquecidos, algunos contienen por ejemplo:
agar semisólido, hemoglobina de conejo o
carnero, infusión de papa
• Temperatura: entre 25-28°C,
• Tiempo de desarrollo: entre 6 a 60 días
• No hemoliza los hematíes
• No utiliza los carbohidratos,
• Se ha determinado 24 antígenos de
B. bacilliformis por immunoprecipitación y
western blot, solo seis detectan anticuerpos
específicos.
 MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Es sensible a los antibióticos
• Es sensible a los anticuerpos antibartonella
• Serología: Aglutinación, fijación de
complemento, ELISA…
• Cultivo del verrucoma
OBTENCION, TRANSPORTE Y CULTIVO DE LA MUESTRA

Tomar 6 ml de sangre

Tarjeta con
filtro
Frotis y Gota gruesa Codificados
Colocar la
muestra en
tubos con o sin
Codificar anticoagulante

Cclocar de 2 a 3 gotas de sangre dentro del

area circular. Dejar secar

Colocar 3 ml en cada tubo

Mamtener en refrigeracion

Cerrar la tarjeta y colocar dentro de la

bolsa de trasporte junto con el
desecante. Mantener a temperatura
ambiente.

Medio de Cultivo F1
modificado NMRCD
Colocar 1 ml de
sangre. Incubar
28ºC.
 FROTIS – GOTA GRUESA

Codificar las laminas.
Colocar una gota de sangre
en el extremo de una lamina
limpia y desengrasada
45º
Con otra lamina (bordes lisos) hacer un
ángulo aproximado de 45º sobre la gota de
sangre de manera que se extienda a lo
ancho del borde de la lamina

Inmediatamente hacer un extendido Dejar secar . Fijar con metanol el

de la muestra a lo largo de la lamina extendido

NOTA.- se sugiere que la lamina se

sostenga tal como se observa en el
grafico
 POLIMORFISMO
Bartonella bacilliformis

Morfología Cocoide
Morfología Coco bacilar

Morfologia bacilar
 CULTIVO
• MEDIO F1 MODIFICADO – NMRCD
– Medio Solido: Sangre de carnero 10%
– Medio Liquido: RPMI y Suero bovino
Controlar de 24 a 48 horas a 28 ºC.
Mantener en refrigeración hasta su uso
• SIEMBRA:
– Inocular 1 ml de sangre
– Homogenizar en vaiven
– Incubar a 28°C
– Controlar desde 1 – 60 días para ver la presencia del
desarrollo de Bartonella
 CULTIVO

B. bacilliformis
•Las colonias se
presentan muy
finas y pequeñas
como gotas de
rocio. Luego
hacer la
coloracion Gram
y la confirmación
por PCR
REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)

– Extracción del ADN: Metodo quimico (FTA)

– Amplificación: Usando iniciadores con
dirección 16S rRNA
– Detección: Usando Gel Agarosa
– Producto: 379 pb
 PCR
ELECTROFORESIS

PCR DE CEPA PCR DE SANGRE

 Bartonella bacilliformis
CASOS POSITIVOS DE BROTES
2000 AL 2004
CIUDAD FROTIS CULTIVO PCR

Piura - Huancabamba
14/83 2/39 10/88
n=104
Cajamarca - Chota
30/57 1/48 8/60
n=60
Ancash - Caraz
N/A 22/76 57/76
n=76
Cusco
N/A 3/32 3/32
n=32
 PCR vs FROTIS

PCR TOTAL
F N P Sensibilidad=76.9%
(95% IC: 46.2, 95.0)
Especificidad 73.4% (95% IC: 64.7, 80.9)
R N 91 3
94
O 73.39 23.08 68.61
VPP = 23.3%

T
VPN = 96.8%
P 33 10 43
I 26.61 76.96 31.39
S TOTAL 124 13
137
100.00 100.00 100
 CONCLUSIONES Y
RECOMENDACIONES
• El Frotis se debe considerar como prueba tamiz
• El PCR es una prueba de alto valor diagnóstico
• El personal que va a realizar al prueba del frotis
debe ser validado
• Realizar la toma y transporte de muestra en
condiciones óptimas para obtener resultados
reales.
• Se recomienda realizar el secuenciamiento de las
cepas nativas
GRACIAS

PREGUNTAS