Benemrita Universidad

Autnoma de Puebla
Facultad De Ciencias Qumicas
Lab. Qumica Orgnica I

Cromatografa

Emmanuel Del Rosal Zamora

Ana Karen Gonzlez Hernndez
 OBJETIVO
Dar a conocer los diferentes tipos de cromatografa, identificar sus
componentes, su elaboracin y que se espera como resultado de cada una. As
como la discusin y aclaracin de las dudas que surjan.
 Conceptos generales

Fase mvil: consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico).

Fase estacionaria: se trata de un slido o un lquido fijado en un slido.

Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase

estacionaria y con la fase mvil.

Los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van

separando.
 COEFICIENTE DE PARTICIN

K = CS/CM
Donde:

CS, y CM son las concentraciones de

soluto en la fase estacionaria y mvil,
respectivamente. Cuando K = 1, el soluto se
encuentra igualmente distribuido entre las
dos fases. El coeficiente de reparto
determina la v
 ALUMINA
Almina es un oxido anftero de Aluminio cuya frmula qumica es
Al2O3
El oxido de aluminio existe en la naturaleza en forma de corindn.

Ciertas piedras preciosas, como el rub, el zafiro, son formas de

almina coloreadas por indicios de xidos de metales pesados.

Rub Zafiro
Corindn
 GENERALIDADES
El oxido de aluminio fundido y vuelto a cristalizar es
idntico en sus propiedades qumicas y fsicas al corindn
natural. Solo le superan en dureza al diamante y algunas
sustancias sintticas, concretamente el carborundo o carburo
de silicio.

Almina
 Estructura
Cristalina

Estructura
Estructura qumica de almina.
Cristalina de la Almina
 Propiedades
Almina (99.8% de
pureza)
Propiedades Fsicas Magnitud/Descripcin
Densidad 3.92g/cm3, or244lb/ft3
Apariencia Slido blanco
Olor Inodoro
Estructura cristalina Trigonal
Dureza Vickers 1500-1650 kgf mm

Propiedades Trmicas Magnitud

Capacidad calorfica especfica 860J/kg-K
Conductividad trmica 30W/m-K
Expansin trmica 20 @ 1000C 8.2m/m-K
Punto de recocido 2100 C
Temperatura mxima de uso 1700 C
continuo
 GEL DE SLICE
Es una sustancia qumica de aspecto cristalino, porosa,
inerte, no txica e inodora, de frmula qumica molecular
SiO2 nH2 O, insoluble en agua ni en cualquier otro
solvente, qumicamente estable, slo reacciona con el
cido fluorhdrico y el lcali.

El gel de slice es capaz de retener hasta un 40% de su

peso en agua, lo que resulta muy prctico tanto para
conservar ciertos productos como para su uso como
desecante en el laboratorio. El inconveniente es que este
compuesto es incoloro y su aspecto no vara con la
presencia de agua, as que por s solo no nos sirve ni
como indicador de humedad ni sabremos hasta qu punto
est siendo eficiente o ha llegado a su lmite de capacidad
de adsorcin. Por este motivo se le aade un indicador de
color que s vara con la presencia de humedad: cloruro
de cobalto II.
 Estructura
Cristalina

Estructura Estructura qumica de gel de slice.

Cristalina de gel de slice
 CELULOSA.
Estructura.
La celulosa se forma por la unin de molculas de -glucopiranosa mediante
enlaces -1,4-O-glucosdico. Por hidrlisis de glucosa. La celulosa es una larga
cadena polimrica de peso molecular variable, con frmula emprica (C 6H10O5)n,
con un valor mnimo de n= 200.

Funcin.
La celulosa es un polisacrido estructural en las plantas ya que forma parte de los
tejidos de sostn. La pared de una clula vegetal joven contiene aproximadamente
un 40% de celulosa; la madera un 50 %, mientras que el ejemplo ms puro de
celulosa es el algodn con un porcentaje mayor al 90%.
Estructura qumica de celulosa.
Reveladores
Los reveladores cromatogrficos se usan en cromatografa de capa fina o TLC.

Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posicin de

dichos compuestos, para ello existen dos tipos de mtodos:

Mtodos qumicos.
Mtodos fsicos.

Mtodos qumicos
Consisten en realizar una reaccin qumica entre un reactivo revelador y los
componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los reactivos reveladores
con la ayuda de un pulverizador de vidrio y una pera de goma, o mediante un
dispositivo que proporcione aire comprimido.
 Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados con los
componentes orgnicos (con tonos amarillo-marrn), pero las manchas desaparecen con el tiempo con
lo que es conveniente sealar las manchas aparecidas.

Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con los componentes
orgnicos produciendo manchas negras.

El tamao de las manchas no est relacionado con la cantidad de componente separado.

Adems de estos reveladores generales, existen otros especficos:

2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas).

Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos).

Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas).

Ninhidrina (para aminocidos).

 Mtodos fsicos.

El ms comn consiste en aadir al adsorbente un indicador fluorescente. De tal forma que al colocar la
placa bajo una lmpara ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la longitud de onda, aparecen
manchas fluorescentes en las zonas en las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la
placa fluorescente excepto donde hay componentes.

Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que pueden ser
detectados directamente en una lmpara de ultravioleta.
 Tipos de Cromatografa

Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel. Las principales tcnicas son: Cromatografa en papel y Cromatografa en
capa fina

Cromatografa en columna.

Cromatografa de lquidos.

Cromatografa de gases.

Cromatografa de fluidos supercrticos.

 Cromatografa

La cromatografa es esencialmente un mtodo

fsico de separacin en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una
inmvil, y otra mvil la cual percola a travs de la
primera. El proceso cromatografico se da como
resultado de repetidos procesos de sorcion-
desorcin durante el movimiento de los
componentes de la mezcla arrastrados por la fase
mvil a lo largo del lecho estacionario(elucin),
producindose la separacin debido a las
diferencias en las constantes de distribucin de
los componentes de la mezcla entre la fase
estacionaria y la mvil. A la distribucin final de
los componentes en funcin de su posicin sobre
el lecho estacionario, o del tiempo en que eluyen
se le denomina cromatograma.
 Cromatografa plana
Se realiza sobre papel u otro material slido. Suele llamarse en capa fina o en capa
delgada porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rgido. Cromatografa
ascendente en capa fina

Cromatografa ascendente en capa fina:

colocacin de una muestra (con 3
componentes), desarrollo de la
cromatografa y revelado del
cromatograma.

Rf es el factor de retardo o retraso, que

mide la movilidad relativa de cada
componente con respecto al mximo
posible, la distancia recorrida por el frente
de fase mvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D
Disposiciones experimentales para realizar una cromatografa en papel descendente
(izqda.) y ascendente (dcha.).
1: Aplicacin de la muestra
2: Se sumerge el extremo inferior en la fase mvil
3 a 5: La fase mvil asciende por capilaridad y se va produciendo la
separacin de los componentes
6: Se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa
7: Revelado de los componentes ya separados y medida de su avance
 Cromatografa en columna

F.M. lquida, F.E. slida: columnas de varios mm de

dimetro y varios cm de longitud.

F.M. gas, F.E. slida: columnas de unos 5 mm de dimetro

y 1-20 m de longitud.

F.M. gas, F.E. lquida: columnas capilares, con menor

dimetro y 30-100 m (incluso ms) de longitud.
Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos
momentos a lo largo de la elucin:

1.Muestra depositada sobre el lecho cromatogrfico

2.La muestra penetra en el lecho
3.Se aade fase mvil
4.Comienza la separacin de los componentes de la muestra
7.Eluye el primer componente
9.Eluye el segundo componente
 Etapas en la realizacin de una cromatografa

Cromatografa en columna Cromatografa plana (papel o capa fina)

1.- Preparacin del soporte y fase 1.- Preparacin del soporte y fase
estacionaria. estacionaria.
1.1.- Equilibrado de la columna.
2.- Aplicacin de la muestra.
2.- Aplicacin de la muestra.
Secado.
3.- Elucin:
a) Lavado de componentes no retenidos.
b) Liberacin, desplazamiento o elucin 3.- Desarrollo de la cromatografa.
propiamente dicha de los componentes
retenidos.
4.- Recoleccin de fracciones o anlisis del
4.- Secado de la placa.
efluente en continuo.
5.- Anlisis, cuantificacin o revelado. 5.- Revelado y cuantificacin en su caso.
6.- Regeneracin de la fase estacionaria.
Cromatografa en fase inversa (reversa)

La cromatografa en fase reversa permite separar molculas en base a su polaridad. El principio

de la cromatografa en fase reversa es semejante al de la cromatografa en capa fina. Sin embargo,
aqu la fase estacionaria es de partculas de slica qumicamente modificadas con hidrocarburos
saturados, insaturados o aromticos de diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria en
una matriz apolar. Por lo tanto, para este tipo de cromatografas se emplean mezclas de solventes
polares, tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y alcoholes alifticos.
 La fase estacionaria.

La fase estacionaria para cromatografa de fase reversa consiste en una matriz porosa
e insoluble a la que se le han unido qumicamente compuestos hidrofbicos. Los
soportes para casi todos los rellenos se preparan con slica rgida, formada por
partculas
mecnicamente resistentes, porosas y uniformes, con dimetros de 3, 5 o 10 micras.
La superficie de la slica est constituida por grupos silanol (SiOH) qumicamente
reactivos

El mecanismo que se ha propuesto para explicar el mecanismo por el cual

estas superficies retienen a los solutos es el siguiente. Cuando un soluto se
disuelve en agua, las fuerzas de atraccin entre las molculas de agua se
distorsionan o se rompen. nicamente los solutos altamente polares o
inicos pueden interaccionar con la estructura del agua. Los solutos no
polares casi no interactan con estas estructuras y como consecuencia
abandonan la fase mvil para adsorberse al hidrocarburo de la fase
estacionaria. La fuerza motriz de la retencin no es la interaccin favorable
del soluto con la fase estacionaria, sino el efecto de
repulsindeldisolventeporelsoluto
 La fase mvil
La retencin hidrofbico del soluto en la fase estacionaria puede disminuirse
aadiendo un disolvente orgnico a la fase mvil acuosa. Al decrementar la polaridad
de la fase mvil, la distribucin de los solutos se cambia hacia la fase mvil.

En principio, entre menos polar sea la molcula que se va a purificar, se

requerir una fase estacionaria ms hidrofbica. Sin embargo, si la muestra
resulta ser muy afn a la matriz, la elucin se dificultara. As que debe
hacerse un anlisis cuidadoso de la molcula de inters
ydeterminarlanaturalezaqumicadeloscontaminantesasociados
 Bibliografia

http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm

ANLISIS QUMICO. F. Rouessac, A. Rouessac, 2003, Mc Graw Hill.QUMICA

ANALTICA

CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.