Enzimologa :

Generalidades
Cintica enzimtica
Papel Clnico
 Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de
reacciones qumicas.
Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el punto
de equilibrio.
Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 10 3 a
104 molculas por segundo.
Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de
modo tal que no genere ms producto que el necesario.
 Actividad enzimtica
Es la forma de medida de una enzima.
La ecuacin general de las reacciones enzimticas es:

E S Cof1 ES E P Cof 2
Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas
veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la reaccin.
La actividad enzimtica se mide por la reaccin cataltica bajo la forma de
desaparicin del sustrato por unidad de tiempo.
Tambin por formacin de producto o modificacin del cofactor.
Unidades: katal = moles de sustrato/segundo.
Unid. Internacionales: umol/minuto.
1 U= 16,7 nkat.
 Clasificacin de enzimas

Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada

Reacciones que transfieren electrones de un sustrato
Oxidoreductasas a otro.xido reduccin
Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra.
Transferasas Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas
Hidrolasas con la adicin de una molcula de agua.
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
Liasas molcula de agua.
Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo
Isomerasas funcional de una posicin a otra.
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
Ligasas molculas con gasto de energa.
 Especificidad y sitio activo
Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porcin sustrato
espacial de la enzima creada enzima
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de amino-
cidos especficos. Estos
pueden no estar en secuencia,
pero los dobleces de la protena
enzimtica los aproximan.
Existen: residuos de captura y
residuos de catlisis.

productos
enzima
 Tipos de
especificidad enzimtica
Modelo de molde rgido Modelo de molde inducido
En este modelo el sitio Aqu el sitio activo es ms
activo tiene una estruc- flexible, se le llama de ma-
tura rgida, se le llama no y guante.
de llave y cerradura. Cuando el sustrato se acerca
Es complementaria del a la enzima se producen
sustrato. cambios conformacionales
Explica la especificidad que llevan a una exacta u-
de sustrato an a nivel nin entre ambos.
de ismeros (estructu- Modelo que explica mejor
ras casi idnticas).
la especificidad de sustrato.
Enzimas y energa de
Las enzimas no afectan el
activacin
punto de equilibrio de una
Estado de
transicin
reaccin qumica.
Energa de activacin
Slo aceleran la velocidad
para alcanzar este punto.
La energa de activacin
es la necesaria para que el sustrato
sustrato se eleve al estado
transitorio.
La velocidad de reaccin
es inversamente propor- producto
cional a la magnitud de la
energa de activacin.
 Actividad cataltica
Las enzimas aceleran la velocidad de reaccin por las
siguientes razones:
La unin de sustrato y enzima incrementa la
concentracin efectiva de sustrato en las inmediaciones
del sitio activo. Hay tambin un cambio
conformacional que orienta al sustrato.
La unin enzima sustrato tiene un nivel ms alto de
energa y las modificaciones de longitud y ngulo del
sustrato asemejan a la forma del estado transitorio.
Algunos de los residuos del sitio activo, participan de
la reaccin donando y aceptando protones.
Algunos residuos catalticos tienen grupos que ayudan
a romper enlaces covalentes.
 Localizacin enzimtica
Las enzimas ejercen su
Na/K ATPasa funcin predominantemente
membrana en el interior celular. Mas an
Retculo endoplasma lo hacen en determinado
Glucosa 6 fosfatasa organelo de la clula.
Las enzimas que se en-
cuentran en el plasma o l-
quidos diversos corresponden
a aquellas que se estn eli-
minando y muy pocas como
la LCAT (Lecitina colesterol
acil transferasa), LLP (Lipasa
lipoproteica), ejercen su
funcin a nivel plasmtico.
Alfa manosidasa
Catalasa Succinato deshidro-
Complejo Golgi
Peroxisoma genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
Factores que modifican la reaccin
enzimtica

La velocidad de una reaccin mediada por

enzimas est influenciada por:

Temperatura del medio

El pH del medio
Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato
 Temperatura

No existe actividad enzimtica a -273C

o cero absoluto.
A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mtica. La que se expresa como coefi-

actividad
ciente de temperatura o Q10. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10C de
aumento de temperatura.
En trminos generales Q10 = 2, es decir
que por cada 10C de temperatura la
velocidad se dobla.
Existe una temperatura ptima tras la cual
los aumentos provocan desnaturalizacin
de la protena enzimtica y prdida de la 0 70
actividad. temperatura
 pH
Cada enzima tiene un pH
ptimo de trabajo, el cul es

actividad
variable. Las enzimas intra-
celulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.
Los extremos de pH afectan la
ionizacin de los centros
activos (-COO- NH3+ SH).
0 14
pH

Enzima YXHH Enzima YX H Enzima YX

pH cido (inac) pH ptimo (activo) pH alcalino (inac)
 Concentracin de la enzima y
constante
La concentracin de la enzima de
incrementa la equilibrio
velocidad de la
reaccin, pero no modifica la constante de equilibrio.
As, si la reaccin se produce en ausencia de la enzima...
K1
SP
K 1
La constante de equilibrio ser: K1 ( P)
Keq
K 1 (S )
Y, si la reaccin se produce en presencia de la enzima...
K1
Enz S Enz P
K 1

La constante de equilibrio ser:

Keq K1
K 1 ( Enz )( P )
( Enz )( S ) (P)
(S )
 Concentracin del sustrato
Si se aumenta la concentracin
del sustrato, manteniendo cons-
tante las dems variables, la Vmax
velocidad inicial de reaccin (Vi)
aumenta hasta un valor mximo
(Vmax) el que se estabiliza. Vmax/2
Se dice bajo estas condiciones
que la enzima est saturada con
el sustrato. Esto se produce de Km.
acuerdo a la afinidad enzima S
sustrato.
 Ecuacin de Michaelis Menten

La relacin entre velocidad de reaccin y concentracin de sustrato se

describe en la frmula:

v Vmax[ S ]
Km [ S ]
Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos estn llenos
de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la Km se define como
concentracin de sustrato a Vmax/2
Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando todos los
sitios activos estn saturados, y es proporcional a la concentracin de la enzima. Sus
unidades son unidades de velocidad.
Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato. Una baja Km
indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de Km son unidades de
concentracin.
 La aplicacin de la ecuacin de
Michaelis Menten se basa en...
K1 K3
E S ES E P
K2 K4

La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de

enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la
concentracin de sustrato.
Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser ignorada.
La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reaccin.
La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la velocidad
de desaparicin de ES.
 Grfica de Lineweaver Burk
La grfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
Se usa la inversa de la ecua- 1/v
cin de Michaelis Menten.
1 km 1 1
.
v Vmax [ S ] Vmax
Cuando 1/v se grafica frente a 1/Vmax
1/s se obtiene una recta, donde
la pendiente es Km/Vmax.
La interseccin en el eje de y -1/Km 1/[S]
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.
 Inhibidores competitivos

Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo

centro activo.
Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
La Vmax no cambia, pero si el Km porque se necesita ms sustrato.
1/V

v inhibidor

1/Vmax

-1/Km 1/[S]
[S]
 Inhibidores no competitivos

Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio indepen-diente

de la enzima.
Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiem-po. Su
efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del sustrato.
No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.

1/V

V
inhibidor
1/Vmax

[S] -1/Km 1/[S]

 Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido de la
enzima, para formar un complejo estable permanentemente inactivado.
Se les llama tambin substratos suicidas.
Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.

Efecto clnico de los Inhibidores

Droga Uso teraputico Enzima afectada Tipo de inhibidor
Lovastatina Hipercolesterolemia HMGCoA reductasa Competitiva
5-fluouracil Cncer Timidilato sintetasa Irreversible
Metrotexate Cncer Dihidrofolato reductasa Competitiva
Alopurinol Gota Xantino oxidasa Irreversible
Cumadin Anticoagulante Glutamil carboxilasa Competitiva
Aspirina Antiinflamatorio Ciclooxigenasa Irreversible
Captopril Hipertensin art. Enz.convert.angiotensina Competitiva
Papel Clnico de las Enzimas
Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
lquidos biolgicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmticas, las del LCR, del L.
Asctico o Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentracin actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destruccin heptica o eliminacin renal.
nicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o
suero.
 Elevacin enzimtica en el
plasma...
La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos
se produce por:
Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminacin: no se elimina normalmente
-obstruccin biliar-.
Incremento de clulas inflamatorias: en lquidos como
Pleural y Asctico los exudados se acompaan de aumento de
actividad enzimtica.
 Origen de las enzimas
en el plasma
Enzimas Ejemplos
Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina,
Especficas del plasma Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa

Secretadas Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno

Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
Del metabolismo celular alanina transferasa.
 Enzimas de uso diagnstico

Enzima Uso diagnstico

Fosfatasa cida Cancer de prstata
GOT Fosfatasa alcalina Enf. heptica y osea
GPT Amilasa Enf. pancretica
GLDH Aspartato amino transferasa Enf. heptica y cardiaca
SDH Alanina amino transferasa Enf. heptica
CPK Creatino fosfo quinasa Enf. muscular y cardiaca
LDH Dehidrogenasa lctica Infarto de miocardio
 Papel de las enzimas en la
medicina
Establecer un diagnstico, CPK
como en el caso de las TGO
enzimas del infarto de
miocardio (CPK y LDH).
Valorar la magnitud de la
lesin
LDH
Monitorizar la mejora del
paciente.
Mostrar la repeticin del
fenmeno (reinfarto) 2 4 6 8 10
Das despus del infarto de
Miocardio.
 Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura
qumica y propiedades cinticas.
Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dmeros o tetrmeros- .
100%
%
90%
80% Isoenzimas LDH
70%
60% LDH1
50%
40% LDH2
30% LDH3
20% LDH4
10%
0% LDH5
Eritrocitos
Pulmones
Miocardio
Rin

Msculo
Hgado

Bazo
Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa lctica Isoenzima SubunidadesTejido predominante
(LDH). Cada una es un oli- LDH1 HHHH corazn
gmero con cuatro prot- LDH2 HHHM corazn
LDH3 HHMM rin, pulmn
meros de los tipos H y M y LDH4 HMMM hgado
tiene un PM de 34 000. LDH5 MMMM hgado
Los protmeros se combi-
nan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia. normal
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos. infarto
 Creatino fosfokinasa
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Msculo cardiaco
CK3 MM Msculo esqueltico

Existen tres isoenzimas de (+)

la creatino fosfokinasa. CK1

Cada una es un dmero CK2

formado por la combina- CK3

cin de protmeros M y B.
Cada dmero representa a
un tejido en particular. (-)