Determinacin

protena total
BTA 2016/2017

MTODO KJELDAHL
Se caracteriza por el uso en ebullicin de cido
sulfrico concentrado (98%)
Se realiza una destruccin oxidativa de la materia
orgnica de la muestra
Reduccin del nitrgeno orgnico a amonaco
El amonio es retenido como bisulfato de amonio y
puede ser determinado in situ por destilacin alcalina y
titulacin

MTODO KJELDAHL
LA DIGESTIN SE REALIZA EN TRES PASOS
En funcin del contenido de agua de la muestra,
empezar la digestin evaporando agua a 150C entre
15 y 30 minutos.
Realizar un segundo paso entre 270 y 300C con una
duracin de entre 15 y 30 minutos con el fin de reducir
la produccin de humos blancos.
Continuar la digestin a 400C entre 60 y 90 minutos

REACCIONES LLEVADAS A CABO EN

EL MTODO DE KJELDAHL
1-Digestin cida de materia orgnica
catalizadores
n - C -NH2 + mH2SO4
SO4 + SO2
protena

calor

CO2 + (NH4)2

REACCIONES LLEVADAS A CABO EN

EL MTODO DE KJELDAHL
2-Neutralizacin
(NH2)SO4 + 2 NaOH
2H2O
3-Destilacin
NH3 + H3BO3
(in borato)
(cido brico)

2NH3 + Na2SO4+

NH 4 + H2BO3-

REACCIONES LLEVADAS A CABO EN

EL MTODO DE KJELDAHL
4-Determinacin de amonio
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno)
es titulado o H2SO4 estandarizado:
H2BO3- + H+

H3BO3

Indicador de Tashiro:
Disolver 0.5 g de rojo de metilo y 1 g de verde de
bromocresol, en 100 mL de etanol del 96%. Ajustar a
pH=4,2
Viraje de rojo a verde

Clculos MTODO DE KJELDAHL

Equivalente Nitrgeno total=Equivalentes cido
sulfrico (H2SO4 )
Volumen cido x normalidad= nmero equivalentes
Nitrgeno
Peso Molecular Nitrgeno= 14g/mol
Multiplicamos equivalentes por 14 y tenemos gramos
de nitrgeno en muestra
Por 100gramos con una regla de tres
Multiplicando por factor de conversin obtenemos
protena total en gramos

Problema ejemplo
Muestra de pescado 1,210g factor conversin 6,25
Destilacin amoniaco sobre 50ml de cido brico
Valoracin con cido sulfrico 0,3N se emplean 17,7mL
17,3x10-3 L de cido sulfrico *0,3eq/L =5,31x10-3 eq nitrgeno
5,31x10-3 eq nitrgeno*14g/mol=0,07434g
0,07434g en 1,210g muestra
X

g en 100 g muestra

6,143g nitrgeno en 100 gramos de muestra

6,146*6,25 =38,39 gramos protena en 100 gramos muestra