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Principios
Por qu preparar la muestra?
Remover interferencias de la muestra
Resultados ms exactos
Concentar analitos para mejorar la
deteccin
Proteger equipos para reducir costos
Columna
SPE
4 Etapas en
SPE
Eluent
Sule
Kanle
Vakuum; zur
Sicherheitsflasche und
Wasserstrahlpumpe
Saugflasche
bzw.
Reaglas mit
Ansaugstutzen
Abb.3:
Arbeitsablauf bei Anwendung der Festphasenextraktion
Filterelement
Sorbens
Filterelement
Konditionieren
Probenaufgabe
Waschen
Elution
Tipos de interaccin
Sorbente-Analito
Polar
No-polar
Intercambio-inico
Covalente
Copolimerico
Extracciones Polares
Tambin llamada fase normal o
hdroflica.
Implica enlaces puente de
hidrgeno, pi-pi e interacciones
dipolo/dipolo.
Sorbentes - silica, diol,
dietilamino,
cianopropil
Aplicaciones - lipidos, aditivos
oleosos,
carbohidratos, fenoles,
Extracciones No-Polares
Tambin llamadas hidrofbicas o
de fase reversa.
Interacciones entre cadena
hidrocarbonada del sorbente y los
enlaces
C-H del analito.
Implica fuerzas de van der
Waals /fuerzas de dispersin
Sorbentes - C2, C3,C4, iC4, tC4,
C5, C6, C7, C8, C10, C12, C18,
C20, C30 fenil y ciclohexil
Applicaciones - drogas de
Principio de la Fase
Reversa
11
R
Si (CH2 )17CH 3
R
H
R
H
C
Si (CH 2)3 C
C
C
R
H
C
H
R
Si (CH 2)3 C
R
Sorbentes
Acidos Bencenesulfonicos(fuerte)
Acido Propilsulfonico (fuerte)
Acido Carboxlico (debil)
Matriz - acuosa
Elucin bsica solventes para neutralizar analito
Intercambio inico
La separacin se basa en diferencias de carga a un pH dado
Las interacciones son electrostticas
Dos tipos
Intercambio aninico: matriz cargada
positivamente (DEAE, TEA, QAE)
Intercambio catinico: matriz cargada
negativamente (carboximetilos,
sulfonatos, fosfatos)
Condiciones iniciales
+
+ ++ -
+
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
Aplicacin de la muestra
+
+ ++ +
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++
+ +
+
+
-
- + ++ + -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ +
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
+
+ ++ -
Comparacin de Ext-L-L vs
SPE
ELL
Poca selectividad
Toma 1 - 2 horas /
muestra
SPE
Usa 2 - 20 ml de
solvente
Proceso de Filtracin
No se forman
emulsiones
Gran selectividad
(adsorbente)
Toma 10 - 20 min. /
muestra
21
Columna SPE
accessorios
23
Fases Silicagel
Fase Reversa
C18
Adsorcin
Si-OH
Fase Normal
NH2
CN
C-OH(OH)
24
Otras Fases
Intercambio Anionico
N+
NH2
Intercambio Cationico
C6H5-SO3H
COOH
SO3H
Biocromatografa
WP PEI (NH2)
WP Butyl (C4)
WP CBX (COO)
Sephadex G-25
25
Interacciones
Non polar:
KJ/mole
~20
Polar:
Dipole / Dipole
KJ/mole
Hydrogen bond ~40 KJ/mole
~ 40
Electrostatic:
KJ/mole!
Ionic
~600
26
Polymer- Phase
Principle
R
(-CH-CH2)n-
N-CH3
C=O
CH3
Polymer- Phase
Principle
R
(-CH-CH2)n-
N-CH3
C=O
CH3
SO3H
or
CH2N+R
3
SO3H or
CH2N+R3
Experimento 1:
Extraccin rpida de colorantes naturales en bebidas
Preparacin de la muestra:
1 mL de jugo de moras se disuelve en 2 mL de agua destilada .
Aondicionamiento de la Column a:
Un cartucho de SPE 3 mL C18 (Baker: 7020-03) se acondiciona con 1 mL
de metanol
seguido por un volumen de columna de agua destilada.
Adicion de la muestra/Lavado:
La muestra preparada es aspirada a la columna. Se usa un lavado de 5
mL de agua destilada
para remover azcares, azucares coloreados y cidos orgnicos.
Elucion:
Los colorantes [antocianinea, flavonoides, taninos y/o alcaloides)] ison
eluidos con un
volumen equivalente a una columna de metanol. En ocasiones el 2propanol puede ser ms adecuado..
Analisis:
Para anlisis ms detallado se puede tomar espectros de absorcin de los
eluatos. Tambin se pueden hacer experimentos de TLC
.
Ambiental
- PAH s de agua y suelo
- PCBs de aceites - Pesticidas de agua/ suelo
- etc.
Alimentos /bebidas
- Aflatoxina del maz
- Cafeina de cola diet de-cafeinada.
- Vitamina E de jugos
- etc.
Farmaceutica/Clinical/Biologica
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Experimento 3:
Extraccin de azcares (glucosa)
Preparation de la muestra:
Disolver 100 mg de glucosa en 10 mL de agua.
Acondicionamiento de la columna:
Una columna SPE Amino de 3 mL (Baker: 7088-03) es acondicionada con
2 mL de etanol.
Adicin de la muestra/Lavado:
2 mL de la muestra preparada es aspirada a travs de la columna.
Elucion:
Se eluye azcar con 2 mL de agua.
Analisis:
Para anlisis detallado
- use gotas de soluciones de Fehling.
Para anlisis detallado
- Se puede tomar un espectro de absorcin del
eluato
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xperiment 4:
eparacin de la muestra:
mL jugo de zanahoria se filtra o centrifuga.
condicionamiento de la columna:
n cartucho de SPE C18 de 3 mL (Baker: 7020-03) se acondiciona con metanol
eguido por una volumen equivalente a una columna de agua destilada.
dicin de la muestra/lavado:
a muestra preparada es aspirada a travs de la columna. Se usa un lavado de 2
e agua destilada para remover todos los otros compuestos.
ucion:
-caroteno es eluido con alrededor de 2 mL de una mezcla heptano-acetona (8:2
l eluato es de color amarillo.
nalisis:
ara analisis detallado
- se puede tomar un espectro de absorcin del eluato.
- Se puede realizar experimentos de TLC.