FACULTAD DE

CIENCIAS
ENZIMAS
Blgo.Mblgo. Eterio ALVA MUOZ
Escuela: Biotecnologa
Curso: Bioqumica II
Nuevo Chimbote, 2015

Medicina

Transaminasas

Industria
Qumica

Penicilina

Transformacin
de Alimentos

Fermentaciones
Quesos
Vinos

Agricultura

Rhyzobium

Las enzimas son protenas

Catalizan reacciones qumicas necesarias

para la sobrevivencia celular
Sin las enzimas los procesos biolgicos
seran tan lentos que las clulas no podran
existir.
Las enzimas pueden actuar dentro de la
clula , fuera de sta, y en el tubo de ensayo.

E + S ESEP E + P
E

Enzima

pH ptimo

Pepsina

1.5

Tripsina

7.7

Catalasa

7.6

Arginasa

9.7

Fumarasa

7.8

Ribonucleasa

7.8

Enzima

Temp. pt.
(oC)

Mamferos

37

Bacterias y algas

aprox.

100

Bacterias rticas

aprox.

Bacterias en muestra de hielo antigua

S: PM 250, 0.8 nm

Cofactor
E: PM 100000, 7 nm
Inorgnico:
Fe2+, Mn2+, Zn2+,etc.
Orgnico:
Orgnico:
Coenzimas
Coenzimas
NAD,
NAD,
FAD,
FAD,
CoASH.
CoASH.
GrupoProsttico
Prosttico
Grupo

Apoenzima

Holoenzima

Coenzimas: Actan como transportadores eventuales de

tomos especficos o de grupos funcionales
Coenzimas

Entidad transferida

Pirofosfato de tiamina . Aldehdos

Dinucletido de flavina y adenina. tomos de hidrgeno

Ion hidruro (H-)

Coenzima A . Grupos acilo

Dinucletido de nicotinamida y de adenina

Fosfato de Piridoxal . Grupos amino

5-Desoxicobalamina (Coenzima B12) tomos de H y grupos

alquilo
Biocitina . CO2
Tetrahidrofolato . Otros grupos
monocarbonados

Coenzimas

Adenosine Triphosphate (ATP)

Coenzyme A (CoA)

Nicotinamide Adenine
Dinucleotide (NAD+)

Nicotinamide Adenine Dinucleotide

Phosphate (NADP+)

Flavin Adenine Dinucleotide (FAD)

Enzimas que requieren

elementos inorgnicos
Citocromo oxidasa
Catalasa, peroxidasa

Fe2+, Fe+,

Citocromo oxidasa

Cu2+

DNA polimerasa
Anhdrasa carbnica
Alcohol deshidrogensa

Zn2+

Hexoquinasa
Glucosa 6-fosfatasa

Mg2+

Arginasa

Mn2+

Piruvato quinasa

K+, Mg2+

Ureasa

Ni2+

Nitrato reductasa

Mo2+

La enzima disminuye la energa de

activacin
Sin enzima
Con enzima

La Ea de la hidrlisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
accin de las enzimas, acelerando
la reaccin 1014 x

E+S

E+P
Tiempo de la reaccin

El aumento de temperatura
necesario para producir la reaccin
no catalizada seria de 529C

Nombre sistemtico:

Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador

Aceptor
Grupo Subgrupo

Nmero sistemtico
Enzyme
Comission

EC 2.7.1.1

Nombre comn: Hexokinasa

Sub-subgrupo

Enzima

Clasificacin de enzimas: Grupos

1. Oxidorreductasas
2. Transferasas
grupos aldehidos
gupos acilos
grupos glucosilos
grupos fosfatos (kinasas)

3. Hidrolasas
Transforman polmeros en monmeros.
Actuan sobre:
enlace ster
enlace glucosdico
enlace peptdico
enlace C-N

4. Liasas
(Adicin a los dobles enlaces)
Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N

5. Isomerasas
(Reacciones de isomerizacin)

6. Ligasas
(Formacin de enlaces, con
aporte de ATP)
Entre C y O
Entre C y S
Entre C y N
Entre C y C

Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto de
cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura

Hiptesis de Michaelis - Menten

E+S

k+1
k-1

ES

k+2

E+P

- La primera parte del mecanismo,

k+1

E+S

k-1

ES

Tiene lugar mucho ms rpidamente que la segunda:

ES

k+2

E+P

Velocidad de la reaccin (v)

Vmax

Relacin entre Km y Vmax

Michaelis y Menten

Vmax/2

Km

Concentracin de Sustrato [S]

La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato
A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato

Representacin directa

Vmax

100

80

60

40

V
K

m x
m

20

s
0
0

20

Km

40

60

80

100

Clculo de Actividad Enzimtica

La velocidad de reaccin catalizada por 0,1ml

de una dilucin 1:100 de Fosfatasa Alcalina es
0,3umoles / min. de producto. Cul es su
actividad enzimtica?
0,1ml-------- 0,3umoles producto / min.
1,0ml------------3,0umoles producto / min.
dil 1:100------------300umoles producto / min.
Respuesta: 300U/ml

Efecto del pH en la ENZIMA

Cada enzima tiene un pH ptimo para su actividad

El pH afecta las interacciones inicas

Efecto de la temperatura en la ENZIMA

Aumento de la
velocidad

Desnaturacin
por calor

15 40 75

Temperatura

Cada enzima tiene una temperatura ptima.

Cmo detectar una enzima?

1.

Actuacin global de la reaccin catalizada.

2.

Utilizar un procedimiento analtico para la determinacin de S

que desaparece o los productos de la reaccin que aparecen.

3.

Si la enzima requiere cofactores (ines metlicos o

coenzimas).

4.

La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o sea K M

del S.

5.

El pH ptimo.

6.

Un intervalo de temperatura en la que la enzima es estable y

muestra actividad elevada.

1.0 Unidad de Actividad Enzimtica

Es la cantidad que transforma 1.0 M (10-6 M) de S /min
a 25oC, en las condiciones de medida ptima.

La Actividad Especfica
Es el no. de U de enzima / mg de protena.
Es una medida de la pureza de la enzima.
Catalasade
de
Catalasa
Aspergilliusniger
niger
Aspergillius
4000-8000U/mg
U/mgde
deprot.
prot.
4000-8000
100mg
mg $$209.80
209.80USD.
USD.
100

Catalasa
Catalasade
de
Hgado
Hgadode
debisonte
bisonte
2000-5000
2000-5000U/mg
U/mgde
deprot.
prot.
11gg $$768.50
768.50USD.
USD.

El Nmero de Recambio de una Enzima

Es el no. de molculas de S transformadas / unidad de tiempo,
por una molcula de enzima
(o por un slo sitio cataltico, cuando la E, es el limitante).

Enzima.

Moles de S, transf./ min.

a 20-38 oC.
Anhidrasa carbnica
-Amilasa
-Galactosidasa
Fosfoglucomutasa

36 000 000
1 000 000
12 000
1 240

Inhibicin Enzimtica
Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).
Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a
la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I.

Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la molcula,

causando un cambio conformacional con repercusin negativa en la
actividad enzimtica.
Activador alostrico:
favorece la unin del
sustrato

Inhibidor alostrico:
impide la unin del
sustrato

Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:
E+I

EI

ES + I

ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:

E+I

Inhibicin reversible
(a) El inhibidor se fija al centro activo
de la enzima libre, impidiendo la
fijacin del substrato: Inhibicin
Competitiva
(b) El inhibidor se fija a la enzima
independientemente de que lo
haga o no el substrato; el inhibidor,
por tanto, no impide la fijacin del
substrato a la enzima, pero s impide
la accin cataltica: Inhibicin No
Competitiva
(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato
una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se
conoce como Inhibicin Anticompetitiva

S
E
I

ES

E+P

Inhibicin
Competitiva

EI
Las fijaciones de substrato e inhibidor son
mutuamente exclusivas; el complejo EI no es productivo

S
E

ES

Inhibicin
No Competitiva

S
EI
El inhibidor se fija
indistintamente a la enzima
libre E y al complejo
enzima-substrato ES; ni el
complejo EI ni el complejo
ESI son productivos

E+P

ESI

S
E

ES

E+P

I
ESI

Inhibicin
Anticompetitiva

El inhibidor slo puede

fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es
productivo

Inhibicin Competitiva

S
E

ES

E+P

I
EI

Se define una constante de

equilibrio de disociacin del
inhibidor:

[E] [I]
Ki =
[EI]

Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato

O
H2 N

C
O-

H 2N

NH2

4-aminobenzoato
4-aminobenceno
sulfonamida

H 2N

N
N

N
N

H
N

CO OH

OH

CH2

c. Flico

CH2
C NH C H
O
H2N

N
N

N
N

COOn

CH3
N

CO OH
CH2

Methotrexate

CH2
C NH C H
O

COOn

O
CH3

HN
O

Anlogos de base

NH

Timina

O
Br

HN
O

NH

5-Bromouracilo

NH2
O
HOCH2

Citidina
OH

OH

NH2
O
HOCH2

N
OH

OH

Citosina
arabinsido

Anlogos de
nuclesido

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio Ki,
sino por una constante de velocidad ki:

E+I

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.

Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

RIBOZIMAS