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REGENERACIN DE

PLANTAS DE TOMATE
DE RBOL
(Solanum betaceum) A
PARTIR DE
PROTOPLASTOS
RIOFRO, L ., ARIAS A ., VENANCIO A ., TORRES, M.

INTRODUCCIN
Susceptibilidad a enfermedades:
antracnosis, oidium y nematodos.
Los nemtodos causan la mayor
reduccin en la produccin de
tomate de rbol, ya que atacan a
las
races,
restringiendo
la
absorcin de nutrientes, lo que
provoca un limitado desarrollo de la
planta.
Reducida diversidad gentica.

OBJETIVO
Estandarizar un protocolo para el aislamiento de
protoplastos a partir de hojas y cotiledones, y la
obtencin de plantas viables de tomate de
rbol.

MATERIALES Y MTODO
MATERIAL
VEGETAL

Hojas de plntulas de 1 mes de edad, var.


Com. Amarillo puntn por 3 das de oscuridad.

AISLAMIENT
O DE
PROTOPLAST
OS

A partir de hojas de tabaco con las siguientes


modificaciones:
Se remplaz la solucin CPW con manitol al
13% por una solucin CPW con manitol al
10%. El pH 5,6.

CULTIVO DE
PROTOPLAST
OS

Sembrados en densidades entre 2,76 x 105 y 9,86 x


105 embebidos en gotas de Mprot con sucrosa al 10%
ms agarosa. Las gotas (1cm) fueron colocadas en una
caja de Petri a la que se agreg Mprot lquido con
sucrosa al 10%.
Incubacin en oscuridad: 4 das a 28o C.
Fotoperiodo: 16 horas luz y 8 horas oscuridad.
Al cabo de una semana, el Mprot lquido con sucrosa al
10%, fue remplazado por una solucin de Mprot lquido
con sucrosa al 3%, donde permanecieron entre 2 - 3
semanas.
Al cabo de este tiempo, cada gota se dividi en 4
secciones, las cuales pasaron a una caja Petri con
medio MS slido suplementado con BAP 4 ppm y cido
naftalnactico (ANA) 0.05 ppm.

RESULTADOS
Edad del tejido inicial: Los cotiledones y las hojas de plntulas
germinadas in vitro, de 1 mes de edad, aseguraron el xito del proceso de
aislamiento de protoplastos.
Pre-tratamiento del material inicial: El tratamiento de las plntulas in
vitro en oscuridad por 3 das, previos a la extraccin de protoplastos, tuvo un
efecto positivo, ya que se obtuvo una densidad mayor en la fase de
separacin de los protoplastos en la solucin de sucrosa al 20%.
pH 5.6 es ptimo para las enzimas degradativas usadas, permitiendo
mejores rendimientos en la formacin de paredes celulares y una alta tasa de
divisin celular.
Densidades de protoplastos efectivas para la siembra:

Densidades de protoplastos efectivas para la siembra:

Los
protoplastos
incubados a 28C
iniciaron
su
divisin celular al
tercer da despus
del aislamiento.
Figura 1. Primeras divisiones de los protoplastos en medio
de cultivo Mprot.(a) Protoplastos a los 4 das de cultivo, se
observa la primera divisin. (b) Protoplastos a los 7 das de
cultivo, se observan colonias de 4 clulas. (c) Protoplastos a
los 9 das de cultivo. (d) Protoplastos a los 12 das de cultivo.

La mayor eficiencia en formacin de callos se obtuvo en los


experimento 3 y 4 (0.26% y 0.145%) cuando se utilizaron
densidades entre de 1,41 x 105 y 2,76 x 105 protoplastos por ml,
respectivamente.
6,125 x 105

1,41 x 105
2,76 x 105

68
%

Figura 2. Porcentaje de formacin de retoos en los 4 ensayos


realizados

El porcentaje promedio de
formacin de retoos fue del
57%. Los retoos obtenidos
presentaron
morfologa
normal y en dos semanas se
obtuvieron
plntulas
enraizadas que pudieron ser
aclimatadas y transferidas a
tierra con un porcentaje de
supervivencia del 85%

Figura 3. Retoos de tomate de rbol obtenidos a partir de


protoplastos: (a) Retoos que presentan enraizamiento en
medio MS. (b) Proceso de aclimatacin en tierra. (c) Plantas,
listas para ser cultivadas en campo.