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BIOLOGIA

CUESTIONARIO 01
Abertura numrica Se le llama abertura numrica al producto del ndice de refraccin del
medio donde se encuentra el objeto, por el seno del ngulo de abertura, es decir:
A = n1 sen Um (11)
La abertura numrica determina la luminosidad y el poder separador del microscopio.
Abertura numrica
medida de la eficiencia del objetivo de un microscopio; es el producto del seno de la mitad
del ngulo de abertura, multiplicado por el ndice de refraccin ms bajo de cualquier
medio, entre el objetivo y la muestra.
Abertura numrica contra f-nmero
La abertura numrica no se utiliza tpicamente adentro fotografa. En lugar, la aceptacin
angular de a lente (o un espejo de la proyeccin de imagen) es expresado por f-nmero,
escrito f# o N, que se define como el cociente del longitud focal al dimetro del pupila de la
entrada:
N=f/D
Este cociente se relaciona con la abertura numrica con respecto a punto focal de la lente.
De acuerdo con el diagrama en la derecha, la abertura numrica de la lente en aire es:
as
Esta aproximacin sostiene cuando la abertura numrica es pequea. El f-nmero describe
la capacidad de luz-acopio de la lente en el caso donde est el rayo marginal antes (o
despus) de la lente enfocado. Este caso se encuentra comnmente en fotografa, donde
estn los objetos que son fotografiados a menudo lejos de la cmara fotogrfica.
Cuando el objeto no es distante de la lente la imagen se forma no ms en la lente plano
focal, y el f-nmero describe no ms exactamente la capacidad de luz-acopio de la lente. En
este caso, f-nmero de trabajo se utiliza en lugar de otro. El f-nmero de trabajo es definido
haciendo la relacin aproximada arriba exacto:
donde NW es el f-nmero el trabajo, y m es la lente ampliacin para un objeto una distancia
particular lejos.[2] La ampliacin aqu es tpicamente negativa; en fotografa, el factor se
escribe a veces como 1 + m, donde m representa valor absoluto de la ampliacin; en
cualquier caso, el factor de la correccin es 1 o mayor.

Poder resolutivo y lmite de resolucin:


El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) de percibir por separado
dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la capacidad para percibir detalles. El poder
resolutivo aumenta a medida que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos
distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto borroso (aparte de necesitar urgente un oculista)
tendr menor poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue perfectamente
puntos que distan de 0,5cm entre si.
Si definimos ahora lmite de resolucin como la distancia mnima que debe existir entre dos puntos para que
sean distinguidos por separado, comprenderemos fcilmente la relacin inversa que se establece entre poder
resolutivo y lmite de resolucin: cuanto menor sea la distancia que debe separar a dos puntos para que se
distingan por separado, mayor ser el poder resolutivo necesario para observarlos.
El poder resolutivo del microscopio no guarda relacin alguna con el aumento del mismo. Depende
principalmente de la apertura numrica de la lente y de la longitud de onda de la luz utilizada. Sin abocarnos
demasiado a definir "apertura numrica" podemos decir que es un valor determinado, entre otras cosas, por el
dimetro de la lente.
La parte mecnica del Microscopio
La parte mecnica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina,
el carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la
parte ptica y de iluminacin, adems permite los desplazamientos necesarios para el
enfoque del objeto.

El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo


general forma de Y o bien es rectangular

El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los
oculares.

El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija.

La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte


posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se
adapta al pie.

La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto


que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el paso de
los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece
inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede
centrarse o producir movimientos circulares.

Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la


preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda.

El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del


microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al


deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin. Lleva
acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus
movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

PARTES DEL MICROSCOPIO


PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos.
1.1 Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio.
1.2 Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene adems el
condensador y el diafragma.
1.3 Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que contienen
a las preparaciones.
1.4 Tubo. Proporciona soporte a los lentes oculares y objetivos.
1.5 Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de
laplatina para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado ntidamente; es
decir, el enfoque preciso para el observador.
1.6 Tornillo macromtrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque
para lograr una observacin precisa.
1.7 Revlver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para
diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente.
1.8 Pinzas. Par de lminas rectangulares, situadas sobre la platina, para mantener al portaobjetos.
2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los dispositivos
de iluminacin.
2.1 Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo del
observavador. Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X.
2.2 Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo, en el
revlver. El de menor aumento es ms corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento

es ms largo (40X y 44X). Puede existir adems un objetivo de inmersin de 100 a 150
aumentos.
2.3 Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la preparacin.
2.4 Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparacin.
2.5 Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el
sistema ptico del microscopio. Existe un espejo plano por un lado y cncavo por el otro,
para ser usados cuando se disponga de abundante o escasa luz, respectivamente. La luz
incorporada corresponde a un foco de luz elctrica adaptado en el lugar que ocupa el
espejo.
Sistema mecnico:

Pie: base que sostiene el aparato.

Brazo: se utiliza para manipular el microscopio y trasladarlo de un


lugar a otro.

Tubo: sostiene el ocular y mantiene constante la distancia entre el


ocular y el objetivo.

Tornillo micromtrico: se utiliza para grandes movimientos en el


enfoque (enfoque aproximado).

Tornillo micromtrico: se utiliza para pequeos movimientos en el


enfoque (enfoque exacto).

Revolver: lleva los objetivos y permite efectuar los cambios de uno a


otro objetivo.

Platina: placa que sostiene las preparaciones. En el centro posee una


abertura circular para dar paso a la luz.

2. Sistema ptico:

Oculares: conjunto de lentes que se encuentran en la parte superior


del tubo. Es una lupa que hace que se vea la imagen dada por el
objetivo de mayor tamao y nos hace la visin ms cmoda.

Objetivos: juegos de lentes situados en el revolver. Estos aumentan la


imagen y la intervienen.

3. Sistema de iluminacin:

Diafragma: esta unido al condensador y su funcin es ampliar o disminuir la


abertura por donde pasa la luz.

Condensador: sistema de lentes que permite concentrar los rayos de luz que
provienen de la fuente luminosa.

Lmpara o fuente de luz.

Poder de resolucin
El poder de resolucin del microscopio es la capacidad de los lentes de mantener separado
dos puntos que a simple vista parece uno solo.
MEDICIONES AL MICROSCOPIO
Para medir objetos que se observan en el campo visual de un microscopio (Metodologa
microscpica), se utiliza un micrmetro ocular. Este consiste de una placa de cristal con una
escala grabada, que se inserta en un ocular microscpico, quedando la escala enfocada por
encontrarse en el plano de la imagen real intermedia.
Es preferible contar con un ocular micromtrico con la placa permanentemente instalada
(especialmente si el microscopio es monocular), el cual reemplaza al ocular visual para
hacer mediciones. Para mayor precisin se puede utilizar un tipo de ocular micromtrico
que tiene una escala exterior adicional en un tornillo micromtrico que en cada vuelta
completa desplaza un trazo perpendicular un intrvalo de la escala grabada. Desde que los
aumentos de los microscopios varan (cuando son de la misma serie y marca pueden variar
ligeramente), las escalas de micrmetros oculares no representan medidas convencionales,
sino simples unidades.
Para determinar la distancia lineal que representa cada unidad (el valor micromtrico), se
debe hacer calibraciones para cada aumento de un microscopio (o sea los productos de los
aumentos de cada combinacin ocular-objetivo) utilizando un micrmetro de platina (un
micrmetro objetivo). Los micrmetros de platina son similares a una lmina portaobjetos y
tienen grabadas escalas que representan medidas exactas y convencionales. Comnmente se
utiliza un micrmetro de platina cuya escala mtrica es de un milmetro (1000 micras),
dividida en 10 unidades con 10 subdivisiones de 10 micras cada una (la unidad ms
pequea representada).

Oculares, estn situados en el extremo superior del tubo, cerca del ojo del observador. Tienen
como funcin multiplicar el aumento logrado por el objetivo, el aumento que se logra con ellos
se representa por un nmero entero acompaado de una X, lo cual significa tantos nmeros,
tenemos oculares de 4X, 6X, 8X, 9X, 10X, l2X, 15X, 20X.

Objetivos, Son los que estn ubicados en el extremo inferior del tubo en la pieza llamada
"revlver" y son los que estn cerca del objeto que se va a observar. Los objetivos pueden
ser "secos" o de "inmersin".
El microscopio ptico
El microscopio ptico simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas
lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. El tipo de microscopio ms utilizado es el
microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del
objeto. Pese a los avances, el microscopio ptico sigue estando vigente, y se ha
transformado en el instrumento bsico para el bilogo, por esto es necesario conocer sus
principios generales.
El microscopio ptico compuesto, es un instrumento que esta formado por una lente en el
ocular y otra en el objetivo montados en extremos opuestos de un tubo cerrado, con las que
se consigue un doble aumento, el primer aumento lo realiza el objetivo el cual produce una
imagen real y define el poder de resolucin del sistema, el segundo aumento lo efecta el
ocular que produce una imagen virtual aumentada de la imagen real formada por el
objetivo.
El aumento total del microscopio depende de las distancias focales de los dos sistemas de
lentes. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000
veces.
Poder resolutivo y lmite de resolucin:
El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) de
percibir por separado dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la
capacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye la
distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yo los
veo como un solo punto borroso (aparte de necesitar urgente un oculista) tendr menor
poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue perfectamente
puntos que distan de 0,5cm entre si.
Como se calcula el numero de aumentos de una muestra? Se multiplica el aumento del
objetivo por el aumento del ocular.... por ejemplo si el objetivo es de 40 X y el ocular de 10
X = la muestra esta aumentada 400 veces....

Microscopio compuesto

Objetivos de un microscopio moderno.


Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms de una lente de
objetivo, una de estas lentes es de 1000x. Los microscopios compuestos se utilizan
especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se
transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no
visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van
instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque.

El sistema ptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que


producen el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas.

El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan,


transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a
travs del microscopio.

Parte mecnica del microscopio


La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina,
el carro y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de
iluminacin; adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.

El pie y soporte: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por
lo general forma de Y o bien es rectangular.

La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la


base por su parte inferior mediante una charnela, permitiendo la inclinacin del tubo
para mejorar la captacin de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en
su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

El tubo: tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar los
reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares y en extremo
inferior el revlver de objetivos. El tubo se encuentra unido a la parte superior de la

columna mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se


mueva mediante los tornillos.

El tornillo macromtrico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del


microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un mecanismo de
cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico: mediante el ajuste fino con movimiento casi


imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto
y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de
0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor
de los objetos.

La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto


que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos
laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la preparacin. Se
encuentran en la platina.

Carro mvil: es un dispositivo que consta de dos tornillos y est colocado sobre la
platina, que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante
hacia atrs y de derecha a izquierda.

El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los
objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija.

Sistema ptico
El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el
conjunto de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo
proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego ampla.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la


cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la
imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de
aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores
a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad
de medir el tamao del objeto observado.

Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen


el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca
de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de
dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin.
o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna
entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices

que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos.


As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17,
significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura
numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero
de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los
aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X,
10X, 20X, 40X y 60X.
o El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de
lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota
de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente
frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos
objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.
PODER DE RESOLUCIN.
Al incrementar el aumento se puede obtener una imagen de tamao ms grande, pero
tambin ms borrosa y en la que no se visualizan los detalles ms finos. Por lo tanto, a la
hora de la observacin microscpica, no es slo importante el aumento generado por las
lentes, sino tambin la resolucin del microscopio.
La resolucin de un microscopio es la capacidad de ste para mostrar los detalles ms finos
de un objeto. El poder o capacidad de resolucin de un microscopio viene determinado por
su lmite de resolucin (distancia resoluble), es decir, por la distancia mnima entre dos
puntos que permite distinguirlos como tales, en lugar de como un nico objeto borroso.
La distancia resoluble es directamente proporcional a la longitud de onda (A) de la luz
empleada e inversamente proporcional a la apertura numrica (A.N.) de la lente utilizada
(objetivo).
La A.N. consiste en la capacidad de la lente para juntar los rayos de luz proyectados hacia
ella, y se calcula multiplicando el ndice de refraccin (I.R.) del medio que hay entre la
muestra y la lente por el seno de la mitad del ngulo de luz que penetra en la lente (sen ).
Hay tres mtodos para disminuir la distancia resoluble o, lo que es lo mismo, para aumentar
el poder de resolucin de un microscopio:

Disminuir la longitud de onda de la luz empleada.

Aumentar el ngulo a en el espacio objeto.

Aumentar el ndice de refraccin en el espacio objeto.

La longitud de onda de la luz puede disminuirse mediante el empleo de filtros selectivos.


Como el poder de resolucin es directamente proporcional a la A.N., para poder aprovechar
un objetivo al mximo, la lente condensadora debe ser capaz de producir un cono luminoso

del tamao mximo que el objetivo es capaz de aprovechar. No obstante, cuando la A.N. de
iluminacin es casi igual a la A.N. mxima del objetivo, disminuye el contraste.
Debido a esto, no se suele trabajar con la mxima iluminacin que permite la lente del
condensador. El diseo del objetivo tambin influye en el poder de resolucin del
microscopio, ya que un objetivo capaz de aprovechar un gran cono de luz procedente de la
muestra generar una mejor resolucin que un objetivo limitado a un cono de luz ms
pequeo.
Si se rellena el espacio existente entre la muestra y el objetivo no con aire, sino con una
sustancia de mayor ndice de refraccin (por ejemplo, aceite) se consigue que la mayor
palie de los rayos perdidos por los fenmenos pticos ocasionados en el condensador y en
el portaobjetos, se refracten y penetren en el objetivo, con lo que se incrementa la
resolucin del microscopio.
QUE TIPOS DE IMGENES PROPORCIONA EL OCULAR YLOS OBJETIVOS?

Objetivos: generan una imagen real, invertida y aumentada del objeto. Estn
colocados en la parte inferior del cabezal, a nivel de una pieza mecnica que
permite cambiarlos fcilmente y recibe el nombre de revlver.

Se llaman as porque estn muy cercanos al objeto.


Los de mayor aumento poseen un sistema de amOliiguacin que dificulta su rotura al
chocar con la preparacin. Tienen dibujado un anillo coloreado que indica su nmero de
aumentos.
Los ms frecuentes son los de 4, 10, 40 Y 100 aumentos. Este ltimo se dice que es de
inmersin porque precisa el uso de aceite sobre la preparacin.

Oculares: captan la imagen formada por el objetivo y la amplan. Estn colocados


en la palie superior del cabezal. Se llaman as porque estn muy cercanos alojo.

En los actuales microscopios binoculares son dos, uno para cada ojo, y estn unidos
mediante un mecanismo que consta de una escala graduada y permite ajustar la distancia
interpupilar. La visin binocular se obtiene por medio de un prisma divisor de rayos y de
tres espejos. Este sistema divide la luz en partes iguales, dirigiendo la mitad alojo derecho y
la otra mitad alojo izquierdo.
Cada ocular consta de dos lentes. Las lentes inferiores de los oculares estn fabricadas con
plstico ptico. Los ms usados producen un aumento de 10 veces.

El poder de resolucin, que es la capacidad para distinguir separadamente dos puntos que
estn muy prximos
Un microscopio ptico puede proporcionar 1500 aumentos y 0,2 mm de poder de
resolucin.
Para la observacin al microscopio ptico, debe hacerse una preparacin, una muestra de
lo que se desea observar, modificada con tcnicas diversas para facilitar su observacin.
PODER DE RESOLUCIN: capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy
cercanos. Determina la mxima amplificacin til del microscopio. Depende de la longitud
de onda (L) y de la apertura numrica (AN): cuanto menor es L y/o mayor la AN, mayor es
la resolucin. La resolucin mxima de un microscopio ptico es de 200 nm.
El aumento o nmero de veces que incrementa el tamao de la imagen de la muestra.
En los microscopios pticos se calcula multiplicando los aumentos indicados en el ocular
por los del objetivo.

CUESTIONARIO 03

PREPARACIONES PARA EXAMEN EN FRESCO.


Entendemos por preparaciones en fresco sin modificar o simplemente
preparaciones en fresco aquellas en las que la muestra se examina
directamente, sin modificar o, como mucho, se diluye o concentra.
Presentan las ventajas siguientes:
Algunos elementos que queremos observar (microorganismos, clulas
humanas, cristales, etc.) se observan suficientemente bien en fresco, ya sea
utilizando el microscopio de campo claro o el de contraste de fases.
Permiten observar la movilidad de los microorganismos vivos, dato que en
ocasiones tiene inters analtico.
Algunas son preparaciones que se elaboran de forma rpida, simple y
econmica.
Observacin de determinados fenmenos microscpicos, tales como divisin
celular (clulas animales, levaduras, etc.) o formacin de esporas.
Sus inconvenientes son estos:
No tienen validez universal: muchos microorganismos no son observables de
este modo.
Hay caractersticas interesantes de los microorganismos que no son
observables de este modo.

microscopio...preparado en SECO y preparado en


FRESCO?
se llama preparado en fresco al que realizas e inmediatamente lo observasd al microscopio,
por ejemplo, si va a observar microorganismos utilizas una gota de agua estancada , si
queres ver celulas vivas, tomas parte de un tejido y asi ves material fresco,.
Un preparado, fijado (seco como le decis tu) es un preparado que lo podes ir a buscar en un
laboratorio quwe se hicieron hace tiempo, y est la muestra fijada en el porta objeto,.si hay
celulas estan muertas, pero conservadas y teidas.OCULARES: Estn colocados en la parte superior del tubo. Se denominan as, porque
estn muy cercanos al ojo. Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en en los
objetivos. En los modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que
estn unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. En
general los mas utilizados son los de 10X ( producen un aumento de 10 veces ).
OBJETIVOS: Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza
metlica, denominada revolver, que permite cambiarlos fcilmente. Generan una imagen
real, invertida y aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este
ltimo se llama de inmersin ya que para su utilizacin se necesita utilizar aceite de cedro
sobre la preparacin. En la superficie de cada objetivo se indican sus caractersticas
principales, aumento, apertura numrica, y llevan dibujado un anillo coloreado que indica
el nmero de aumentos (rojo 4X, amarillo 10X, azul 40X y blanco 100X).
Preparaciones en fresco
La forma ms simple de preparar un espcimen para su examen microscpico es hacer una
preparacin en fresco. Existen dos tcnicas, una preparacin en fresco simple ("entre

porta y cubre") consiste en colocar una gota de lquido con los microorganismos sobre un
portaobjetos y a continuacin cubrirla con un cubreobjetos. Una preparacin en gota
pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubrindolo con
un portaobjetos (invertido) con una excavacin central (portaobjetos excavado) (Figura
3.8). Hay que sellar la preparacin con vaselina alrededor de la excavacin. La ventaja de
esta ltima tcnica, es que la preparacin no se seca y puede ser observada durante un
tiempo ms largo.
Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. Por ejemplo,
para la bsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales. Este protozoo de gran
movilidad causa inflamacin de la vagina y la uretra. Si en la preparacin se observan
clulas en forma de huso que se mueven mediante contracciones o sacudidas cruzando el
campo, probablemente se tratar de T. vaginalis, pudindose efectuar el diagnstico.
Sin embargo, el inconveniente de la observacin en fresco es que no permite aumentar el
contraste de la preparacin. Por tanto, su uso, con un microscopio ptico de campo claro,
est bastante limitado. Normalmente, para observar microorganismos vivos se utiliza
alguno de los otros microscopios pticos que hemos mencionado anteriormente.

Figura 3.7 El microscopio compuesto tiene tres lentes objetivos (tres sistemas de lentes).
Se muestra el mismo campo de Bacillus subtilis visto con el objetivo dbil seco (100x),
fuerte seco (400x), y con el de inmersin (l000x). Los aumentos mayores revelan
progresivamente ms detalle de una porcin de campo menor.

Figura 3.8 Preparacin en gota pendiente. Esta preparacin se realiza colocando una gota
de la suspensin bacteriana en un cubreobjetos en el cual se ha hecho previamente un
crculo con vaselina o parafina (a). La vaselina acta como sellador. (b) Sobre el
cubreobjetos se coloca un portaobjetos con una excavacin central que queda adherido
gracias a la vaselina (c). Se invierte la preparacin y se observa colocndola en la platina
del microscopio (d). Las preparaciones en gota pendiente se utilizan para observar
microorganismos vivos.

3.1.5 Tinciones
El microscopio de campo claro es ms til para la observacin de especmenes teidos. Los
colorantes son compuestos qumicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos,
llamados colorantes vitales, que pueden aadirse directamente a una preparacin en fresco;
por tanto, colorean clulas vivas. No obstante, la mayora de los colorantes son solamente
efectivos despus de que los microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren
muertos y adheridos al portaobjetos. Para la fijacin por calor, se realiza una fina
extensin de una gota de muestra lquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a
continuacin, se pasa la preparacin de Forma rpida sobre la llama de un mechero. El
calor de la llama mata las clulas microbianas por desnaturalizacin de sus protenas. Las
protenas coaguladas unen las clulas al porta. Cuando se desea fijar especimenes delicados
se utiliza la fijacin qumica, va que es menos lesiva que el calor. Para ello se aade una

gota del fijador, por ejemplo, cido smico, formaldehdo, o glutaraldehdo, sobre la
muestra lquida con los microorganismos.
La fijacin posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona la apariencia
real de las clulas, lo cual dificulta la identificacin; adems, no permite la observacin del
movmiento de los microorganismos. Despus de la fijacin, se aade el colorante, que
debe permanecer el tiempo suficiente en contacto con el espcimen, para que pueda ser
absorbido. A continuacin, se retira el exceso de colorante, normalmente lavando con agua.
Tipos de colorantes Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones
cargados. Los colorantes bsicos son aquellos en los cuales el agente que tie es el ion
cargado positivamente, mientras que en los cidos, el colorante es el ion cargado
negativamente. Los colorantes ms utilizados son los de tipo bsico, va que la mayor parte
de las clulas microbianas Poseen cargas dbilmente negativas en su superficie, lo cual
facilita su unin. Entre los colorantes bsicos ms comunes se encuentran la safranina, la
fucsina bsica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes cidos se unen a las
partes de las clulas cargadas positivamente. Se utilizan para teir tejidos animales
infectados con microorganismos. Entre los ms frecuentes estn la eosina, la fucsina cida
y el rojo Congo.
Tincin

Uso

Tcnicas

Dos o ms colorantes; distingue


entre bacterias Gram positivas y
Gram negativas

Se cubre la preparacin de bacterias


fijadas con cristal violeta y despus
con una solucin de iodo
(mordiente). Todas las clulas
quedan tenidas de color violeta
oscuro. Se decolora con acetona al
95%.

Tnciones
diferenciales
Tincin de
Gram

Las clulas Gram positivas


permanecen tenidas, pero las
negativas pierden el colorante. Se
tie con safranina (contraste). El
color violeta de las Gram positivas
se vuelve ms oscuro y las Gram
negativas se tien de rosa.