EXTRACCION DE ENZIMAS

Las condiciones para extraer enzimas y pasalas a solucin, son a menudo criticas y
requieren el estudio de muchas variables. Es necesario destruir las clulas,
eventualmente las estructuras subcelulares y disociar las enzimas de otras
molculas. A veces es necesario pasarlas a solucin como complejo mucoprotico o
nucleoprotico y disociarlo durante la purrificacin.

 En general, el primer paso consiste en la obtencin de un homogenato, que implica la destruccin de la clula y el
pasaje de las enzimas a solucin o suspensin. Esto puede llevarse a cabo por:
1. a)Homogenizacin mecnica: puede utilizarse un homogeneizador de vidrio, mortero, licuadora, a veces
con la ayuda de abrasivos como almina, arena o bolitas de vidrio y con un solvente adecuado, isotnico
(sacarosa 0,25 M, NaCl 0,9%, KCl 0,15 M) o ligeramente hipertnico, en un buffer adecuado para controlar el pH.
2. b)Homogeneizacin snica: el choque de ondas snicas o ultrasnicas provoca cambios de presin de
miles de atmsferas, que rompen la pared celular. Se usa generalmente para bacterias y levaduras y, a veces,
para determinados tejidos animales (bazo, rin, eritrocitos).
3. c)Desintegracin trmica: El congelamiento y descongelamiento rpidos y repetidos suelen usarse para
desintegrar bacterias y eritrocitos. Por congelacin se forman cristales de hielo intracelulares, destruyendo la
estructura. Al descongelarse, las clulas se destruyen osmticamente debido a la presencia de agua pura y se
libera su contenido.
4. d)Desintegracin qumica: se utilizan agentes que atacan la pared celular, como el etanol, ter de
petrleo, isopentanol, etc.
5. e)Homogeneizacin por deshidratacin: se basa en la precipitacin de protenas por solventes orgnicos.
En la preparacin del "polvo acetnico" se utiliza acetona en fro.

IMPORTANCIA DE LOCALIZACIN DE LA
ENZIMA
Las enzimas pueden localizarse dentro de los siguientes grupos:
I.Enzimas en solucin verdadera en el citoplasma. Permanecen en el
sobrenadante luego de la eliminacin de los componentes particulados. La ruptura
de las clulas en un buffer adecuado libera tales enzimas al medio.
II.Enzimas asociadas a estructuras celulares(membranas, mitocondrias,
etc.). Pueden encontrarse a) en solucin dentro de una membrana y pueden ser
extradas despus de la destruccin de la misma; b) asociadas a material
lipoprotico insoluble. Para pasarlas a solucin debe disociarse el complejo.
El conocimiento de la localizacin intracelular y solubilidad relativa de las enzimas
ha permitido desarrollar procedimientos de extraccin diferencial que facilitan la
purificacin.