INGENIERA GENTICA

La ingeniera gentica intenta dar respuesta a preguntas

como:
puede un gen funcional expresarse en una especie
completamente distinta?
se puede aislar y manipular el ADN?

DEFINICIN: La ingeniera gentica es

una rama de la gentica que se centra
en el estudio de ADN. Ms
concretamente la podemos definir como
la biotecnologa de la manipulacin y
transferencia de ADN de un organismo a
otro.

INGENIERA GENTICA
Con el fin:
fabricacin de numerosos compuestos
la manipulacin gentica de individuos con un fin
predeterminado: creacin de nuevas especies,
la correccin de defectos genticos
1973: genes de una especie se introducen en organismos de
otra especie y funcionan correctamente.
1978: se clona el gen de la insulina humana.
1996: se completa la secuencia del genoma de un organismo
eucaritico, la levadura cervecera "Saccharomyces
cerevisiae".
1997: Clonacin del primer mamfero, una oveja llamada
"Dolly".

TECNOLOGA DEL DNA

RECOMBINANTE

Corte especfico del ADN:

Insercin de los fragmentos de ADN:

- por plsmidos
- por bacterifagos

TECNOLOGA DEL DNA

RECOMBINANTE
Mtodos de introduccin del vector:
-

Transformacin
Transduccin

Clonado del ADN.

REACCIN EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
PCR:
Es una tcnica que permite duplicar un
nmero ilimitado de veces un fragmento de
ADN en un tubo de ensayo. Mediante esta
tcnica pueden generarse millones de
molculas idnticas, a partir de una
molcula de ADN.

REACCIN EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
APLICACIONES DE LA PCR:
Secuenciacin
Estudios evolutivos
Huellas dactilares del ADN.

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERA GENTICA
Aislar, secuenciar y sintetizar
Digestin con enzimas de
restriccin
Replicacin del DNA y la reaccin
en cadena de la polimerasa
Conjugacin
Transduccin
Transformacin
Transcripcin
Transcripcin inversa
Traduccin

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERIA GENETICA
Aislar, secuenciar y sintetizar DNA

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO DE
INGENIERA GENTICA
Digestin con
enzimas de
restriccin

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERA GENTICA
Replicacin del DNA y la
reaccin en cadena de la
polimerasa

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERA GENTICA
Conjugacin,
Transduccin y
Transformacin

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERA GENTICA
Transcripcin

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO
DE INGENIERA GENTICA
Transcripcin inversa

ETAPAS EN UN EXPERIMENTO DE
INGENIERA GENTICA
Traduccin

ALGUNAS TCNICAS DE
MODIFICACIN GENTICA

INSERCION DE DNA EXTRAO EN LAS

CELULAS

Existen varias maneras de introducir el DNA en las clulas.

transformacin: mtodo por el cual una clula es capaz
de tomar un fragmento de ADN del medio extracelular y
expresar los genes en l contenidos.
ELECTROPORACION: utiliza una corriente elctrica para
formar poros microscpicos en las membranas de las
clulas. Aplicable a todas las clulas.
Fusin de protoplastos:
1. Las paredes celulares bacterianas se digieren por
mtodos enzimticos y se producen protoplastos;
2. En solucin, los protoplastos se tratan con
polietilenglicol;
3. Los protoplastos se fusionan;
4. Se recombinan segmentos de los cromosomas;
5. La clula recombinante forma nueva pared celular. Este
mtodo es especialmente valioso en la manipulacin
gentica de las clulas de las plantas y las algas.
microinyeccin.

ALGUNAS TCNICAS DE
MODIFICACIN GENTICA
OBTENCION DEL DNA
Cmo hacen los bilogos
para obtener los genes
que les interesan? Hay
dos fuentes principales
de genes:
GENOTECAS que
contienen copias
naturales de genes o
copias de cDNA de
genes formados a partir
del mRNA.
2) DNA sinttico.

ALGUNAS TCNICAS DE
MODIFICACIN GENTICA

SELECCIN DE UN CLON En clonacin es necesario seleccionar la clula particular que

contiene el gen especfico de inters. Existe un

procedimiento de seleccin conocido como seleccin
de azul y blanco.
Se utilizan los dos genes, denominados genes marcadores,
de modo que pueda determinarse la insercin de DNA
del plsmido en la bacteria husped.
Tanto el DNA del plsmido como el DNA extrao son cortados
por la misma enzima de restriccin.
El DNA extrao se inserta en el plsmido, donde inactiva al
gen lacZ.
El plsmido recombinante se introduce en una bacteria, que
se convierte en resistente a la ampicilina.
Todas las bacterias tratadas se siembran en una placa con
agar nutritivo que contiene ampicilina y el X-gal, que es
el sustrato -galactosidasa, y se incuban.
Las colonias blancas que aparecen deben contener el DNA
extrao. Las colonias azules no contienen el DNA
extrao.
Con el procedimiento descrito se han aislado colonias blancas
que se sabe que contienen DNA extrao pero an no
se sabe si este es el fragmento de DNA extrao
deseado. Por ello se necesita un segundo
procedimiento: la hibridacin de la colonia

ALGUNAS TCNICAS DE
MODIFICACIN GENTICA
FORMACIN DE UN
PRODUCTO GNICO

En casi todos los trabajos iniciales sobre

modificacin gentica se utiliz E. coli para
sintetizar los productos gnicos. E. coli crece
con facilidad y los investigadores estn muy
familiarizados con esta bacteria y su gentica.
Sin embrago, E. coli tambin tiene varias
desventajas. Sin embargo, existen ms
probabilidades de que las bacterias Gram
positivas, como Bacillus subtilis, segreguen sus
productos y por esa razn a menudo se las
prefiere al nivel industrial. Otro microbio que se
utiliza como vehculo para la expresin de
genes por ingeniera gentica es la levadura del
pan, Saccharomyces cerevisiae.
Las clulas de mamferos son ms convenientes
para sintetizar productos proteicos de uso
mdico porque segregan sus productos y hay
un riesgo bajo de formacin de toxinas o
alergenos.
Las clulas vegetales tambin se desarrollan en
cultivos, alterados por tcnicas de DNA
recombinante, y luego se utilizan para generar
plantas modificadas genticamente.

LA TERAPIA GNICA

Aportacin de un gen funcional a las clulas que carecen de

esta funcin, con el fin de corregir una alteracin gentica o
enfermedad adquirida.

La terapia gnica se divide en dos categoras:

Alteracin de clulas germinales

Terapia somtica celular

LA TERAPIA GNICA
Dentro de la terapia gnica tenemos:

Fabricacin de pptidos de inters sanitario

Xenotansplantes
Diagnstico y tratamiento de enfermedades
hereditarias
Fabricacin de vacunas transgnicas
Fabricacin de antibiticos

LA TERAPIA GNICA
Fabricacin de pptidos de inters sanitario

La insulina es el primer caso de protena por ingeniera gentica aprobada para uso en
humanos.
El defecto de su sntesis conduce a la diabetes

La hormona de crecimiento es un pptido de 191 aminocidos producido por la hipfisis

(glndula pituitaria), que estimula el crecimiento normal

La DNasa-I para el tratamiento de la fibrosis qustica. La DNasa-I, administrada como aerosol,

puede romper el componente ADN del moco acumulado en los pulmones del enfermo

Activador tisular del plasmingeno, cataliza la conversin del plasmingeno en plasmina,

que a su vez disuelve la fibrina de los cogulos sanguneos.

LA TERAPIA GNICA

Xenotrasplantes
Trasplantes de tejidos y rganos de animales a humanos,
aunque estos procedimientos aun estn en fase de
experimentacin.
Diagnstico y tratamiento de enfermedades
hereditarias;
Se realiza a travs de sondas de ADN y anticuerpos
monoclonados. O otra tcnica de diagnstico de
enfermedades genticas que son las tcnicas de bandeo
cromosmico
Fabricacin de vacunas transgnicas
Nuevas vacunas atenuadas
La actual vacuna de la hepatitis B, es una vacuna
transgnica y se trabaja en vacunas para la malaria,
encefalitis y el SIDA.

LA TERAPIA GNICA

Fabricacin de antibiticos
La ingeniera gentica para producir antibiticos
modificados, alterando las enzimas que los fabrican.

Obtencin de anticuerpos monoclonales.

Utilizados en la obtencin del interfern .
Se usan en las enfermedades infecciosas

BIOTECNOLOGA
La biotecnologa consiste en la
utilizacin de bacterias, levaduras y
clulas animales en cultivo para la
fabricacin de sustancias
especficas. Permiten, gracias a la
aplicacin integrada de los
conocimientos y tcnicas de la
bioqumica, la microbiologa y la
ingeniera qumica aprovechar en el
plano tecnolgico las propiedades
de los microorganismos y los
cultivos celulares. Permiten producir
a partir de recursos renovables y
disponibles en abundancia gran
nmero de sustancias y
compuestos.

BIOTECNOLOGA
Aplicaciones ms comunes

Industria alimentaria

Industria farmacetica

Alimentos transgnicos animales

Obtencin de protenas de mamferos

Alimentos transgnicos vegetales

Enzimas recombinantes alimentarias

Obtencin de vacunas recombinantes

Industria qumica
Aminocidos
Colorantes
Melaninas

BIOTECNOLOGA

Industria alimentaria
Obtencin de la hembra
del cerdo transgnico
Un gen hbrido que contiene el gen
humano que codifica la sntesis de una
protena de inters biolgico junto con el
promotor del gen que codifica una
protena de la leche de rata, se
introducen por microinyeccin en un
vulo de cerda fecundado. El desarrollo
de ese vulo da lugar a un animal
transgnico que tiene en todas sus
clulas el gen hbrido. Debido al
promotor elegido, ese gen solamente se
expresa en la glndula mamaria de la
hembra de cerdo induciendo la
produccin de la protena humana en la

BIOTECNOLOGA
Alimentos transgnicos vegetales
Cultivos transgnicos

1.Arroz dorado:
Es un producto resultado de
desarrollar variedades de arroz
que produzcan provitaminas A
para sofocar la carencia de
retinol o vitamina A en la
alimentacin de las personas
pobres y desfavorecidas de los
pases en vas de desarrollo.
Proceso:
Insertando en el genoma del
arroz dos genes del narciso y otro
de la bacteria Erwinia uredovora,
que producan enzimas para
convertir el GGDP en provitamina
A.Cuando el organismo humano
ingiere este arroz divide la

BIOTECNOLOGA
2.Tomate :
Se estn investigando tcnicas para
producir variedades con un mayor
contenido de licopeno, un componente
natural del tomate relacionado con la
vitamina A. Tambin suscita inters la
maduracin tarda, pues as los tomates
pueden permanecer en la mata por ms
tiempo y adquieren mejor sabor, a
diferencia de las variedades que se
comercializan que se cosechan cuando
aun estn verdes.
3.Soja :
Se utiliza en un 40-60 % de los alimentos
siguientes: aceite, margarina, alimentos
dietticos e infantiles, cerveza, etc. A este
producto trasgnico, se le ha transferido
un gen que produce resistencia al
glifosato, que es el elemento activo del

BIOTECNOLOGA
4.El maz transgnico:
El maz transgnico que se cultiva en Espaa lleva genes de
bacteria que le permiten producir una sustancia insecticida.
La diferencia fundamental con las tcnicas tradicionales de mejora
gentica es que permiten franquear las barreras entre especies para
crear seres vivos que no existan en la naturaleza. Se trata de un
experimento a gran escala basado en un modelo cientfico que est
en entredicho.
El maz transgnico adquiere capacidades como :
a) Resistencia al uso de herbicidas.
b) La propia planta adquiere la propiedad de matar insectos que la
atacan.
c) Sus semillas pierden la capacidad de reproducirse naturalmente.

BIOTECNOLOGA
Enzimas recombinantes alimentarias
Las enzimas microbianas se emplean sobre todo en la obtencin de jarabes
de glucosa y fructosa, en detergentes y en textiles
Suelen ser enzimas que hidrolizan polmeros, como protenas y
polisacridos.
De la produccin industrial de enzimas ,el 70% se debe a los productos del
gnero Bacillus.
Para usar un microorganismo que produzca enzimas de consumo humano,
se deben de cumplir una serie de requisitos legales, que se centran en que
tal microorganismo debe figurar en la llamada lista "GRAS", es decir, que
haya demostrado una larga historia de seguridad. Existen unos 50
microorganismos GRAS aprobados para la industria alimentaria, de los
cuales citamos los siguientes:
Bacillus, como p. ej. B. subtilis y B. licheniformis.
Saccharomyces cerevisiae (levadura de panadera).
Aspergillus niger y A. oryzae.
Lactobacillus y estreptococos lcticos.

BIOTECNOLOGA
Industria Farmacetica

Obtencin de vacunas recombinantes :

El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos
patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial.
Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por IG. Como la
mayora de los factores antignicos son protenas lo que se hace es clonar el gen de
la protena correspondiente.

Obtencin de protenas de mamferos :

Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de
coagulacin, etc. tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la
obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de
tejidos o fluidos corporales.
En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes
de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin
comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la
levadura Sacharomces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina humana.

BIOTECNOLOGA
Industria qumica

Aminocidos
Aditivos mejoradores del sabor
Suplementos de dieta
En industria qumica y cosmtica

Melaninas
Las melaninas, usadas para bronceadores, protectores solares de plsticos,
etc., se suelen obtener de modo qumico o por procedimientos ineficientes de
extraccin de organismos. Se han localizado y aislado los genes de sntesis de
melanina en la bacteria del suelo Streptomyces antibioticus, y se han transferido
a otras bacterias ms fciles de manejar, logrndose en ellas su expresin.

Colorantes
Se ha desarrollado un sistema para producir colorantes de modo limpio en
bacterias manipuladas genticamente (no se requieren sustancias qumicas
peligrosas como anilinas, formaldehido, cianuro, etc).