DESCUBRIMIENTO, SNTESIS Y

EVALUACIN BIOLGICA DE LAS

TIAZOLOQUINAZOLINAS COMO
POTENTES INHIBIDORES DE CD38
Sergio vila B.
Gregory Daz A.
Daniela Mardones V.

INTRODUCCIN
NAD

Nicotinamida adenina dinucleotido es sintetizada a partir del triptfano

y/o de la nicotinamida ms niacina; determina el estado redox
mitocondrial y citosolico y participa en el monitoreo del estado
metabolico de la celula.
Adems es sustrato de diversas enzimas, donde se consume, en el
proceso de donacin de ADP-ribosa a molculas aceptoras

INTRODUCCIN
CD38

Cundo se necesita inhibir

CD38?

En algunas enfermedades las cuales tengan disminuidos los niveles de

NAD como en la obesidad, o en el envejecimiento. Y en aquellas que
tengan una sobreexpresin del CD38
CD38 o ADP ribosil ciclasa cataliza la ruptura de NAD.
La inhibicin de esta traera como consecuencia aumentar los niveles
de NAD

Adems hay un ligamiento gentico entre el gen que contiene CD38 y

el sndrome metabolico que sugiere que las enfermedades relacionadas
con el sndrome metabolico pueden ser objetivos de los inhibidores de
CD38

INHIBIDORES DE CD38
En literatura se encuentran
varios informes de pequeas
molculas inhibidoras de
CD38. Sin embargo, muchos
de estos compuestos poseen
actividad
inhibidora
moderada a dbil contra la
enzima (IC50> 1 M) y/o
tienen selectividad limitada.

Se logr descubrir el compuesto 1 con un IC50 = 1,21 uM:

CD38 tiazol screening hit

Compuesto 1 (IC50:
1,21uM)

NUEVOS
INHIBIDORES CD38

Compuesto 2 (IC50:
298nM)

El trabajo de sntesis fue dirigido

inicialmente hacia el ncleo
bicclico y la sustitucin en la
posicin 4 del compuesto 1. Los
estudios de modelos sugieren
que la carboxamida en la
posicin 3 era perjudicial para la
potencia debido a las pobres
interacciones con el residuo

Tiazoloquinolina

Compuesto 3b (IC50:
1,20 uM)

Tiazoloquinazolina

QUMICA
A pesar de que el anillo
quinolina es 4 veces mas
potente que el compuesto 1, los
autores deciden por facilidad y
rapidez de sntesis trabajar el
SAR de las quinazolinas

a) RNH2, rt, CH3CN

1trabajo de sntesis fue de tiazoquinazolinas 4- amino sustituidas a

partir de 6-bromo-4-cloroquinazolina

b) PdCl2dppfCH2Cl2, 5-tributylstannyl thiazole,

DMF a 100-140C

QUMICA
Se ampli la investigacin a
anlogos de quinazolin(on)as
C8 y C2 sustituidas.
La
sntesis
de
ambos
compuestos tiene dos pasos
fundamentales:
1. La formacin de la
quinazolina
2. La formacin de la 6tiazoquinazolina
4-amino
sustituida

SNTESIS QUINAZOLINAS C8
SUSTITUIDAS

d) HCONH2, 165C

f) R2NH2, rt, CH3CN

g)
PdCl2dppfCH2Cl2
,
5-tributylstannyl
thiazole,
DMF a 100-140C

e) SOCl2, DMF

(cat)

SNTESIS 2-QUINAZOLINONA

a) urea, melt

Para la posicin C2 se
encontr
que
la
incorporacin de un grupo
amino entrega una potente
inhibicin a CD38, pero la
mayora de los compuestos
tienen una baja solubilidad
y/o permeabilidad. Un grupo
funcional ms productivo
result
ser
el
residuo
hidroxilo, que por equilibrio
ceto-enlico queda como
cetona en la posicin 2.

b) POCl3, 105C
b

c) iPr2NEt, R2NH2, iPrOH

e) CuI, K2CO3, PdCl2dppfCH2Cl2,
5-tributylstannyl thiazole,
DMF a 100-140C

RESULTADOS Y DISCUSIN
Fue construido un modelo de unin
utilizando una estructura cristalina
hCD38
con
E226Q
proteina
mutante, unido a nicotinamida
mononucleotido (NMN)
Por
remocin
del
anillo
de
nicotinamida
el
sustrato
intermediario
de
ribosa
fue
modelado dentro del sitio de unin
de hCD38 creando un modelo
hCD38/complejo
intermediario
ribosa.

HCD38
Hay evidencia en compuestos
similares a esta serie de que el
nitrgeno del anillo del tiazol puede
estar envuelto en una reaccin
cataltica reversible y de corta
duracin
con
sustratos
intermediarios producidos por CD38.
El Anillo tiazol est pre-orientado en
el sitio catalitico hCD38 de tal forma
que el nitrgeno quede cerca de la
posicin 1 del intermediario ribosa
5 fosfato

HCD38 COMPUESTO 3B
Mayoria de la afinidad de enlace puede
ser debido a interacciones pi-pi entre el
anillo tiazolfenil del nucleo biciclico y el
indol de W189
Aunque no hay evidencia en este
modelo, T221 puede formar puentes de
hidrogeno con el nitrgeno 4-amino
proporcionando una afinidad de enlace
adicional, aquellos sin hidrogeno del 4amino
fueron menos activos siendo
oxigeno y heteroatomos de azufre unos
de ellos.
Filtrado
inicial:
inhibidores
con
IC50<0.1uM. Aunque si tenan menor
potencia y buenas propiedades para
estudios in vivo se consideraban.

SAR PARA
C4

Aminas
Anilinas
alifaticas
R

IC50 humanos
humanos
IC50
(uM)
(uM)
0.049
0.46

IC50 ratones
(uM)
0.012
0.026

4- CONH2-fenil
Trans-4-CONH2ciclohexil

0.56
0.078

0.024
0.009

2-Me-fenil

12.8

0.065

4-piperidinil

>30.2

0.275

Comp. 1

1.21

0.205

Comp. 3b
Comp. 1

1.20
1.21

0.032
0.205

Cis-24-(1-imidazol)metilciclohexil
fenil

R1

R2

SAR PARA C2 Y C8

Tiene la potencia necesaria para

las enzimas humanas como de
ratones, pero sus propiedades
fisicoquimicas son pobres en
solubilidad y permeabilidad para
realizar un estudio in vivo.
As, se incorporarn sustituyentes
que
mantengan
la
potencia
mientras mejoran las propiedades
fisicoqumicas
necesarias
para

R3

IC50
huma
no
(uM)

IC50 Permeabil
raton idad
es
(nm/s)
(uM)

CH3

Trans-4-MeOciclohexil

OH

0.026

0.001

CH3

3-Cl-4-F-fenil

OH

0.028

0.004

CH3

3-Cl-4-F-fenil

0.206

0.010

Trans-4-MeOciclohexil

OH

NM
e

0.053

0.008

47

Trans-4OH
OCH2CH2OCH
3-ciclohexil

NM
e

0.064

0.008

30

4.71

0.009

OCH 3-Cl-4-F-fenil
3

ND

EN RESUMEN SAR:
Sustitucin C4

Sustitucin C2 y C8

Amina aliftica>amina aromatica

Sustitucin para>meta>orto

C2 con carbonilo>CH3>H

Alifticos estereoqumica trans>cis PERO si est sustituido en 2 y es

hidrofbico no aplica

C8 con CH3CF3>OCH3>H

QUINOLINAS
R1

R2

R3

IC50
humano
(uM)

IC50 ratones
(uM)

Permeabili
dad (nm/s)

Trans-4-CONHMeciclohexil

0.0034

0.0009

<3.0

Me

Trans-4-CONHMeciclohexil

0.0048

0.0011

9.9

Me

Me

Trans-4-CONHMeciclohexil

0.0053

0.00078

21

Me

4-piranil

0.089

0.015

200

Me

Me

Trans-4-OCH3-ciclohexil

0.015

0.0014

300

Et

Trans-4-OCH2CH2OMeciclohexil

0.054

0.0052

R2: CH3 mejor

propiedad
farmacoqumi
ca
R2: CH2CH3
reduce
potencia
de enzima
humana

MODELO ACOPLAMIENTO
Compuesto con R-amino(C4): ter. La
fraccion
4-metoxietoxil
puede
incrementar
las
interacciones
hidrofobicas entre ste grupo y W176.
El residuo C2 (C=O) que podria formar
puentes de hidrogenos con N183 es
incapaz de esto por la distancia
inadecuada y el bajo Angulo y el grupo
amida de N183 esta formando puentes
de hidrogeno en una critica loopestabilizacion con un residuo de
cadena principal (C180), por lo que no
esta disponible para interactuar con el
inhibidor.

PROPIEDADES
FISICOQUMICAS Y
FARMACOCINETICAS

Compuesto
(quinolinas)

Permeabilidad
(>100 nm/s)

Solubilidad
(>100 uM)

Criterio ChromLogD
(<4.0)

78b

200

350

2.37

78c

162

>364

3.22

79c

195

>323

3.54

79d
Comp.

300
Va

Dosis
(mg/Kg)

>340
3.47
Clearence (mL/min/Kg) Vd
T1/2 (h)
(L/Kg)

78b

30

v.o

44.7

1.2

ND

78c

30

v.o

21

1.3

3.5

i.V

10

v.O

i.V

30

v.O

79c
79d

5.3
8.9

0.32

1.3
0.46

33.4

1.1

3.2

ESTUDIO IN VIVO
Para maximizar la absorcin oral
se ocup una mezcla de
5%solutol:95%vehculo la cual
increment
15
veces
la
absorcin del compuesto 78c.
Se utilizaron ratones con una
dieta alta en grasas (obesos), ya
que este modelo demostr
tener bajos niveles de NAD al
comparar con uno control.

NIVELES DE NAD CON

INHIBIDOR CD38
Se administr el compuesto 78c y
se observaron los cambios de NAD
en
hgado
y
msculo
(gastrocnemio)
Estudios validaron la hiptesis que
la inhibicin de CD38 modulan los
niveles de NAD elevndolos in vivo.

CONCLUSION
Los investigadores fueron
capaces de identificar series de
quinazolinas inhibidoras de
cd38 que hasta ahora no haban
tenido precedentes de la
potencia detallada partir del
SAR del compuesto 1

La molcula 78c fue encontrada no solo un muy buen potente

inhibidor si no que tambin posea buenas propiedades
fisicoqumicas, fue capaz de elevar el NAD en hgado y gastrocnemio
(gemelos) cuando fue administrado oralmente en ratones obesos.

CONCLUSION
La identificacin y desarrollo de este pequeo potente inhibidor
permitir establecer un detallado anlisis de como elevar las
concentraciones de NAD cuando se encuentra en estados de dficit,
que afecta a toda la fisiologa del cuerpo, adems estos estudios
ayudan en la aproximacin para encontrar un tratamiento para la
terapia de dficit de NAD.

SECCIN EXPERIMENTAL
- Todos los productos qumicos y disolventes comerciales fueron de
grado reactivo y fueron usados sin purificacin adicional a menos
que se especificara lo contrario.
- Todas las reacciones excepto aquellas en medios acuosos se
llevaron a cabo con el uso de tcnicas estndar para la exclusin
de humedad
- Las reacciones se controlaron mediante cromatografa en capa
fina (TLC)
- Los compuestos finales fueron normalmente purificados por
cromatografa flash en gel de slice
- La pureza analtica se evalu por cromatografa lquida
UltraPerformance de fase inversa (RP-UPLC)

SECCIN EXPERIMENTAL
4-(((1r,4r)-4-(2-Metoxietoxi)ciclohexil)amino)-1-metil-6-(tiazol-5il)quinolin-2(1H)-ona (78c)
4-cloro-1-metil-6-(tiazol-5-il) quinolin-2 (1H) -ona 73 (0,14 g, 0,506 mmol),
(1R, 4R) -4-(2-metoxietoxi) ciclohexanamina (0,175 g, 1,01 mmol), y iPr2NEt (0,25 ml, 1,43
mmol) en CH3CN (1,0 ml) y NMP (1 ml) fueron calentados a 180 C durante 10 h. La
solucin se diluy con EtOAc y se lav con agua (2 veces) y salmuera.
Los extractos orgnicos combinados se secaron sobre sulfato sdico, se filtraron, y se
concentraron bajo
presin reducida. El residuo se cromatografi eluyendo con un gradiente de 2 a 10% de MeOH
/ DCM.
Se recuper un aceite de color marrn como 4 (((1R, 4R) -4- (2-metoxietoxi) ciclohexil)
amino) -1-metil-6- (tiazol-5-il) quinolin-2 (1H) -ona (87,3 mg, 0,201 mmol).