Inhibicin de la

molcula BRDT
para la
anticoncepcin
masculina

Small-Molecule Inhibition of BRDT for Male Contraception

Martin M. Matzuk, Michael R. McKeown, Panagis Filippakopoulos, Qinglei Li, Lang Ma, Julio E.
Agno, Madeleine E. Lemieux, Sarah Picaud, Richard N. Yu, Jun Qi, Stefan Knapp, James E.
Bradner

Cell
Volume150,Issue4,Pages673-684

BRDT

Es una protena que est involucrada en el

proceso de remodelacin de la cromatina durante
la generacin de espermatozoides en los
testculos.

Se localiza en el ncleo y reorganiza las histonas

hiperacetiladas a travs de mdulos de
reconocimiento-acetil lisina gemelas o
bromodomains.

En la espermatognesis est mediada por la

primera bromodomain, la cual se une a la cola
amino-terminal de tetra-acetilada de la histona 4
(H4Kac4) con una potencia moderada

IDEAS PARA APUNTAR LA BRDT PARA

UN EFECTO ANTICONCEPTIVO.

Los estudios genticos de BRDT han demostrado

que la supresin selectiva de la regin que
codifica la BRDT es suficiente para conferir la
esterilidad de los ratones machos, y un estudio
de asociacin del genoma recientemente
publicado de la infertilidad masculina idioptica
identificado polimorfismos de un solo nucletido
de BRDT como asociado significativamente con
oligozoospermia o azoospermia en los hombres
europeos.

Inicio del estudio

El estudio inicio con un inhibidor potente de

tienodiazepina de la protena coactivadora de la
familia BET BRD4, la cual est implicada en la
patognesis del cncer a travs de control de la
transcripcin del oncogn MYC.

La inhibicin directa de BRDT por un inhibidor de

molcula pequea bromodomain ejerce un efecto
inhibidor de la dosis y dependiente del tiempo
sobre la espermatognesis.

Examen de Biodisponibilidad de JQ1

Para probar la capacidad de JQ1

para llegar a sus clulas diana
anticonceptivos, la
biodisponibilidad testicular de JQ1
se evalu por anlisis de suero y
farmacocintica tejido.

Despus de una dosis nica

intraperitoneal (ip) de JQ1 (50 mg /
kg) en ratones machos, se hicieron
mediciones de la concentracin en
el suero JQ1, testculos y el cerebro.

En general, JQ1 exhibe una biodisponibilidad

testicular excelente (AUCtestis / AUCplasma =
259%), lo que sugiere la distribucin preferencial
en este compartimiento de tejido con la rpida
(Tmax = 0,25 h) y pronunciado exposicin (Cmax
= 34 g / ml).

Corroborando la barrera de permeabilidad por JQ1

casi uniforme, se observ despus de una sola
dosis estudios farmacocinticos (AUCbrain /
AUCplasma = 98%).

JQ1 Deteriora la cantidad de espermatozoides y

la motilidad

Para determinar las posibles consecuencias para

bloquear la funcin BRDT in vivo, se probaron los
efectos de espermatognesis de JQ1 administradas
a ratones machos. Se les administraron inyecciones
de JQ1 a ratones machos jvenes o adultos (50
mg / kg una vez al da)

Despus de dicho tratamiento, los ratones se

aparearon con las hembras, pero se les sigui
administrando JQ1.

Todos las ratas tratadas con JQ1 tuvieron una

reduccin significativa en el volumen de testculo.

El tratamiento ms largo con JQ1 tiene el efecto

ms prominente en el volumen testicular.

Con inyecciones diarias de 50 mg / kg, JQ1 machos tratados a

partir de 3-6 semanas de edad mostraron una reduccin de 75,4%
del control, los machos tratados, de 6-9 semanas de edad
mostraron una reduccin de 54,7%, y los machos tratados durante
6 semanas con JQ1 (6-12 semanas de edad) mostraron una
reduccin de 40,6% .

Para examinar el efecto en la produccin de esperma, recuento de

espermatozoides se determinaron despus de JQ1 o vehculo
tratamiento. Nmero de espermatozoides del epiddimo se redujo
a 28% de control despus de 3 semanas de 50 mg / kg de
exposicin diaria (3-6 semanas de edad) y 11% de control
despus de 6 semanas de tratamiento (6-12 semanas de edad).

El anlisis de la motilidad del esperma despus de 3 semanas de

JQ1 (50 mg / kg QD) revel una reduccin significativa, 4,5 veces
en la motilidad de los espermatozoides (16,0% para el JQ1tratada frente a 72,4% para el control.

Despus de 6 semanas de administrarse JQ1

diariamente, slo el 5% de los
espermatozoides demostr la motilidad
progresiva en comparacin con el 85% de
los espermatozoides de los controles. Por lo
tanto, la exposicin diaria a JQ1 reduce
cuantitativamente el nmero de
espermatozoides y su motilidad.

Administracin dos veces al

da de JQ1

Se inform de la tolerabilidad de la
administracin dos veces al da de
JQ1 en un estudio de confirmacin
de JQ1 en malignidades
hematolgicas.

En el estudio farmacocintico de dos

veces al da JQ1 (50 mg / kg), se
confirm una excelente penetracin
de la sangre: testculo barrera y
demostr un marcado aumento en la
exposicin al frmaco en el testculo
(AUC0-24h = 96.640 h * ng / ml,
acompaado por la aparente
particin en este compartimiento
(AUCtestis / AUCplasma = 236%).

Con inyecciones BID de JQ1 (JQ1 50 mg / kg), los machos

adultos tratados durante 3 semanas (9-12 semanas)
mostraron una reduccin en peso de los testculos al 63,3%
de los controles.

El tratamiento dos veces

al da result en una
reduccin en el esperma
en el epiddimo caudal al
35,6% del control, una
dramtica reduccin de
5,8 veces en la motilidad
de los espermatozoides.
(11,2% para JQ1-tratados
frente a 64,5% para los
controles), estableciendo
firmemente el efecto
tolerabilidad y
antiespermatognico del
JQ1 en ratones.

JQ1 se dirige selectivamente a las clulas

germinales masculinas sin afectar los niveles
hormonales

Sobre la base de la inhibicin

observada de la
espermatognesis, se
realizaron ms estudios de
inhibicin de BRDT.

Se not la reduccin en el
volumen de los testculos, el
rea de seccin transversal de
los tbulos seminferos de los
testculos de los machos
tratados diariamente a partir de
3-6 semanas con JQ1 eran
84,9% de los controles, los
machos tratados de 6-12
semanas con JQ1 eran 56,4%, y
los machos tratados de 9-12
semanas con BID JQ1 eran
65,0% de los controles.

El anlisis de
epiddimo
de
machos
JQ1
tratados
tambin
mostr
un
hallazgo similar
en el que se
observaron
menos
espermatozoid
es en el lumen
del epiddimo
en
comparacin
con
su

El anlisis microscpico detallado de los testculos de los

ratones tratados con JQ1 revel la degeneracin de los tbulos
seminferos, desprendimiento de las clulas germinales.
Por lo tanto, el tratamiento JQ1 causa un bloqueo en la
espermatognesis y una reduccin resultante en la produccin
testicular de espermatozoides.

Se midieron los niveles sricos de la hormona estimulante del

folculo (FSH), la hormona luteinizante (LH), y testosterona despus
del tratamiento con JQ1.
Las diferencias en los niveles de FSH, LH y testosterona no fueron
estadsticamente significativas entre el control y los machos JQ1
tratadas. Por lo tanto, los efectos JQ1 son especficos de las clulas
germinales y no alteran los procesos dependientes de hormonas.

BRDT Inhibicin confiere un efecto anticonceptivo reversible en los hombres

Para determinar los efectos de los regmenes de

tratamiento alternativos JQ1 sobre la fertilidad de
ratones macho, JQ1 (50 mg / kg / da) y el control
fueron entregados a cada uno de 10 ratones
macho de 6 semanas.

Para asegurar que JQ1 y control estaban teniendo

efectos propios, tres ratones de cada grupo
fueron sacrificados y se muestran haber reducido
tamao de los testculos

Despus de este perodo de pretratamiento, los

siete ratones JQ1 tratados y siete de control
restantes fueron acoplados permanentemente a
dos hembras adultas por macho mientras
continuaron recibiendo JQ1.

Despus del primer mes de la cra, los siete

ratones de control haban engendrado 14
camadas de cras. Sin embargo, slo cuatro de los
siete ratones JQ1 tratados descendencia deseada
(slo seis camadas de cras y un nmero reducido
de cras).

Para los tres ratones JQ1 tratados que an no haban

engendrado descendencia, estos ratones mostraron
un comportamiento normal de apareamiento. Por lo
tanto, incluso a una dosis baja de JQ1, hay un efecto
anticonceptivo parcial.

Para evaluar la reversibilidad del efecto

anticonceptivo inducida JQ1-, se examin si la
fertilidad regres despus de que se detuvo el
tratamiento JQ1. Entre los tres ratones infrtiles
tratados con el rgimen de dosis baja, la
infertilidad se mantuvo completa en 1 mes de la
recuperacin (mes de apareamiento 3), lo que
indica un efecto duradero de JQ1 sobre la
espermatognesis.
Sin embargo, en el mes de acoplamiento 4, los
tres machos engendraron descendencia con un
nmero estadsticamente similar de cras por
hembra que se observan para los controles.

Para determinar con mayor precisin la integridad

y la funcin de los testculos y espermatozoides
despus de la retirada de la terapia JQ1, se
realizaron dos experimentos independientes
adicionales. En el primer experimento, los ratones
machos adultos JQ1 tratados se examinaron al
final de las 6 semanas de tratamiento (50 mg / kg
/ da) o despus de 2 o 4 meses despus del cese
de la terapia.

Despus de 2 meses, se incrementaron el peso

de los testculos y el nmero de espermatozoides
y su motilidad, y despus de 4 meses, los pesos y
los parmetros del esperma se acercaron a los
niveles normales.