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CICLO CELULAR
R. Restriccin
G. Gap
S. Sntesis
VER FIG 10-3
PROCARIOTAS
EUCARIOTAS
Uracilo
El DNA es replicado por DNA polimerasas, esta utilizan una hebra como templado,
sobre la cual realizan la sntesis de la hebra complementaria utilizando los
desoxinucletidos trifosfatos adecuados. La cadena de DNA naciente siempre crece
en sentido 53, es decir, el nucletido que se agrega une su a-fosfato al grupo 3OH libre de la cadena en sntesis, este enlace ocurre entre las pentosas que
componen los nucletidos.
Estructuras formadas para la Replicacin del DNA
OJO DE REPLICACION:
FRAGMENTOS DE OKAZAKI:
Ver modelo
Watson y Crick
Transcripcin
El RNA COMO MENSAJERO
Tipos de RNA
Mensajero (RNAm)
Transferencia (RNAt)
Ribosmico (RNAr)
en eucariotas (splicing)
Polipeptidos
Extractos celulares
Mensajero sinttico (AG)n
AGA GAG AGA GAG
AA* uno por reaccin
Extractos celulares
Mensajero sinttico (AGC)n
AGC AGC AGC AGC AGC
AA* uno por reaccin
Serina ser-ser-ser
El Cdigo gentico
Esquema general
Traduccin:
Sntesis de protenas
Iniciacin
Elongacin
Un segundo tRNA, con su aminocido unido, se coloca en el sitio A y su anticodn se acopla con el mRNA. Se
forma un enlace peptdico entre los dos aminocidos reunidos en el ribosoma. Al mismo tiempo, se rompe el
enlace entre el primer aminocido y su tRNA. El ribosoma se mueve a lo largo de la cadena de mRNA en una
direccin 5' a 3', y el segundo tRNA, con el dipptido unido, se mueve desde el sitio A al sitio P, a medida que el
primer tRNA se desprende del ribosoma. Un tercer aminoacil-tRNA se coloca en el sitio A y se forma otro enlace
peptdico. La cadena peptdica naciente siempre est unida al tRNA que se est moviendo del sitio A al sitio P y
el tRNA entrante que lleva el siguiente aminocido siempre ocupa el sitio A. Este paso se repite una y otra vez
hasta que se completa el polipptido
Terminacin
Cuando el ribosoma alcanza un codn de terminacin (en este ejemplo UGA), el polipptido se
escinde del ltimo tRNA y el tRNA se desprende del sitio P. El sitio A es ocupado por un factor de
liberacin que produce la disociacin de las dos subunidades del ribosoma
REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN
En los sistemas inducibles, como el opern lac, la molcula del represor es activa,
hasta que se combina con el inductor (en este caso, alolactosa).
Control positivo del Opern Lac.
SISTEMA CAP-AMPc
CAP (Proteina activadora de los genes catabolicos) + AMPc
El complejo se une a la regin promotora la transcripcin es mxima
En presencia de Glucosa E. coli no usa lactosa como fuente de C.
Cuando los niveles de Glu disminuyen, aumentan los niveles de AMPc que
forman mas complejos CAP-AMPc que se unen a la region promotora activando
la transcripcion y comienza a degradarse lactosa.
En los sistemas represibles, como el opern trp, el represor se activa slo cuando
se combina con el correpresor . Fig 15-8
CONJUGACION
CONJUGACION
- El DNA viral puede entrar a la clula y comenzar una infeccin (ciclo ltico); o
- el DNA viral puede incorporarse al cromosoma bacteriano, replicarse con l y ser transferido a las
clulas hijas (ciclo lisognico).
Las bacterias que albergan a estos virus se conocen como lisognicas porque, de cuando en cuando, los
profagos se activan y establecen un nuevo ciclo ltico.
Herramienta bsica:
Endonucleasas (enzimas) de restriccin -> Enzimas de bacterias
que reconocen secuencias de DNA especficas y lo cortan por el
esqueleto azcar-fosfato.
Tipo I y III: cortan el DNA en puntos distintos al de
reconocimiento (al azar)
Tipo II: cortan justo en los puntos que reconocen, que son
repeticiones invertidas o palndromes
5-GGATCC- 3
3-CCTAGG- 5
EcoRI: E. Coli
BamHI: Bacillus amyloliquefaciens
Corte plano:
extremos romos
Corte escalonado:
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http://www.arrakis.es/~ibrabida/iggifanim.html
Clonacin del
DNA
DNA forneo (secuencia que
se desea clonar)
Vector
hbrido
Vector de clonacin
(vehculo)
Organismo husped (E. Coli)
Seleccin de vectores
Vectores
hbridos
(quimera)
Fragmentos de
distintas procedencias
que se unen in vitro
tras cortarse con la
misma enzima de
restriccin. Ligasa
sella zona hbrida
Vectores de
clonacin
Clonacin y secuenciacin del DNA
49
Husped: E. coli
Insercin del vector hbrido en el husped:
Plsmido: transformacin (solucin diluida
cloruro de calcio) y replicacin autnoma
CLONADO
Se necesitan Endonucleasas de restriccin
Ligasa
Vector de clonado
Bacterias a ser transformadas
Sistema de seleccin
Mtodos transformacin
Electroporacin: se usa corriente elctrica para
introducir DNA (para bacterias y protoplastos)
Liposomas: DNA se encapsula en liposomas (vesculas de
membrana artificial, para cel animales ppalmente)
Biolstica : disparo de proyectiles de tungsteno u oro
recubiertos por DNA (para bacterias y cel vegetales9
Plsmidos (Ti de Agrobacterium tumefaciens y A
rhizogenes para plantas)
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Clonacin del
DNA
DNA forneo (secuencia que
se desea clonar)
Vector
hbrido
Vector de clonacin
(vehculo)
Organismo husped (E. Coli)
Seleccin de vectores
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Separacin fragmentos
Reptacin
de los
fragmentos
a travs del
gel de
agarosa
Clonacin y secuenciacin del DNA
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DNA teido
con bromuro
de etidio
emite
fluorescencia
con luz UV
62
ELECTROFORESIS
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Transferencia en
Southern
(esquema resumen)
65
La reaccin
en cadena
de la
polimerasa
(PCR)
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68