Metabolismo de cidos Nucleicos

Generalidad
es

Los ribonuclesidos, desoxirribonuclesidos,

y los derivados de los mismos, unidos al
cido fosfrico, son los nucletidos,
compuestos esenciales en la clula.
Sin ellos no existiran ADN, ARN ni tampoco
la sntesis proteica.
Los nucletidos por si solos, son
componentes de muchas vas metablicas,
en las que sirven como coenzimas
Las bases pricas y pirimidnicas, pueden
reusarse o sintetizarse de novo.

Estructura de un nucletido...
Nucletido

Los nucletidos estn

formados por una base Ac.fosfrico
nitrogenada, una
pentosa y uno, dos o
Base nitrogenada
tres grupos fosfato.
La base nitrogenada
Purina
puede ser prica o
pirimidnica.

Nuclesido
Pentosa
Pirimidina

Las purinas
y
pirimidinas

Tanto el ADN como el ARN contienen las mismas

purinas: Adenina(A) y Guanina(G)
Tanto el ADN como el ARN contienen la pirimidina
Citosina(C) pero difieren en la otra pirimidina.
El ADN contiene Timina (T) y el ARN Uracilo(U)

Los
nuclesidos.
..

La unin de una base nitrogenada y un azcar

(pentosa), genera un nuclesido.
Los nuclesidos de las bases A,G,T,C y U son:
adenosina, guanosina, timidina, citidina y
uridina.
El azcar puede ser ribosa (ribonuclesido) y
2-desoxirribosa (desoxirribonuclesido)

Los nucletidos...
Los nucletidos son steres
mono, di y trifosfricos de los
nuclesidos.
El nuclesido adenosina, se une
al cido fosfrico para formar:
Nuclesido monofosfato: AMP
Nuclesido difosfato: ADP
Nuclesido trifosfato: ATP

Base
P ~ P ~ P ~OH2C

O
OH

Nuclesido monofosfato
Nuclesido difosfato
Nuclesido trifosfato

Sntesis de nucletidos de las purinas

Glicina

CO2

El proceso genera AMP y GMP.

Los diversos carbonos del nucleo aspartato
purina derivan de distintos
aminocidos, del CO2 y del
N
tetrahidrofolato.

N
C
C

El proceso tiene tres etapas:

Sntesis de fosforribosil amina
Sntesis de inosina monofosfato
Sntesis de AMP y GMP

C
N

Formil
tetrahidrofolato
Glutamina

Transformacin
de nucletidos
monofosfato
en di y tri fosfato

Adenilato quinasa
Guanilato quinasa

Los nuclesidos di fosfato son sintetizados a partir de

los monofosfato mediante nuclesido monofosfato
quinasas. Igual si se trata de ribo o desoxirribo
nuclesidos. El ATP es la fuente de fosfato

AMP ATP 2 ADP

GMP ATP GDP ADP

Los nuclesidos tri fosfato se forman a partir de los di

fosfato mediante una nuclesido di fosfato quinasa y
ATP.
Nuclesido difosfato
quinasa

GDP ATP GTP ADP

CDP ATP CTP ADP

Degradacin de Purinas

Deficiencia en adenosina deaminasa:

inmunodeficiencia; clulas T y B
Deficiencia en purina nuclesido fosforilasa: dao
en la funcin de las clulas T. Menor formacin de
c.rico
Gota: hiperuricemia;artritis aguda por depsito
de cristales de cido rico.
Primaria:mayor produccin de c.rico
Secundaria: cncer insuficiencia renal

Adenosina

AMP
5 nucleotidasa
H2O

Adenosina
deaminasa

H2O

Pi

Pi

Pi
Purina nuclesido
fosforilasa

NH3

Guanosina

GMP

Inosina

Ribosa 1fosfato

Hipoxantina
O2+H2O

Purina nuclesido
H
fosforilasa

Xantino oxidasa

Ribosa 1fosfato

O
Aminohidrolasa
2
Guanina

H2O2
Xantina

H2O

O2+H2O

NH3

Xantino oxidasa
H2O2

cido Urico

Sntesis de nucletidos
de las pirimidinas
A diferencia
de los nucletidos de las
purinas, donde las bases se sintetizan
ya unidas a la pentosa, en el caso de
las pirimidinas primero se sintetizan
las bases y luego se unen a la
pentosa.
Las fuentes de carbono y nitrgeno de
las pirimidinas son la glutamina, el
CO2 y el cido asprtico.
El paso inicial es la sntesis de
carbamil fosfato

Sntesis de carbamil fosfato

La glutamina y el CO2 en presencia de la carbamil fosfato sintetasa II y dos

molculas de ATP produce carbamil fosfato. Esta enzima no requiere biotina
como otras carboxilantes.
El proceso es semejante al que da inicio a la sntesis de urea, catalizado por
la carbamil fosfato sintetasa I .
La sntesis de urea se produce en la mitocondria y las de las pirimidinas en el
citosol. La fuente de nitrgeno en el primer caso es el amonio mientras que
en el segundo es la glutamina
Carbamil fosfato sintetasa II

2 ATP CO2 Gluta min a NH 2 CO O PO3

Carbamil fosfato

Conversin de
ribonucletidos a
desoxirribonuclet
idos

La sntesis de purinas y pirimidinas

genera ribonucletidos, pero se
necesitan desoxiribonucletidos para la
sntesis de ADN.

Ribonuclesido difosfato

Desoxirribonuclesido difosfato

Ribonucletido reductasa
Tiorredoxina(reducida)

Tiorredoxina(oxidada)

Tiorredoxin reductasa
NADP

NADPH+H

Digestin y
aprovechamiento
de cidos nucleicos en el
intestino

ADN+ARN

pH cido desnaturaliza
cidos nucleicos
cidos nucleicos
desnaturalizados
Nucleasas

Ribonucleasas y
desoxirribonucleasas del jugo
pancretico hidrolizan ARN y ADN.

oligonucletidos

Los oligonucletidos son

hidrolizados por las
fosfodiesterasas pancreticas
Nucleotidasas y nucleosidasas
liberan purinas y pirimidinas que
son degradadas en la clula
intestinal y excretadas por la
orina, como en el caso del
c.rico.

mononucletidos
Fosfodiesterasas
Nuclesidos
Nucleotidasas
cido
rico
Orina

Nucleosidasas
Bases
nitrogenadas

Nanotecnologa
Dra. Carolina Cucho Espinoza
Mdico Patlogo Clnico

Nanotecnolo
ga en la
sociedad!!!

REAS

Cuidado mdico y
salud

Aplicaciones

APLICACIONES
Nanodispositivos para monitorear, reparar, construir y
controlar el sistema biolgico humano, distribucin
especfica de medicamentos, reemplazo de partes daadas
(clulas cancerosas, vasos sanguneos, piel, huesos)

Tecnologa
informtica y
computacin

Dispositivos computacionales miniaturizados con mayor

eficacia para el almacenamiento de datos (multitera)

Energa y medio
ambiente

Control de la contaminacin del aire y el agua a travs de

filtros nanoporosos, nanofiltracin para separacin de
isotopos, almacenamiento y conservacin de energa

Tecnologa
metalrgica y
qumica

Materiales con mayor resistencia, menos corrosin,

resistencia al calor, para vehculos espaciales y
automviles.
Diseo
y
sntesis
de
molculas
multifuncionales, procesos qumicos para el ahorro de
energa utilizando sistemas nanocatalticos

Defensa

Equipamiento militar inteligente (ropa, armaduras, armas)

mejorando el peso, la fortaleza de plataformas militares,
sensores qumicos y biolgicos. Detectores de vigilancia en
miniatura

FUENTE: Nanotechnology and Nanomaterials in the Treatment of Life-threatening Diseases, 2014

Definicin

Diseo, caracterizacin, produccin y aplicacin de

estructuras, materiales, dispositivos y sistemas
complejos mediante el control de la forma, el tamao
y las propiedades de la materia a escala nanomtrica
( 1 a 100 nm).
El trmino nanotecnologa fue usado por primera
vez en 1974 por Norio Taniguchi, un investigador de
la Universidad de Tokio, quien sealaba as la
capacidad
de
manejar
materiales
a
nivel
nanomtrico.

Los problemas del rea de la fsica, qumica y

biologa podan ser resueltos si furamos
capaces de ver lo que estamos haciendo a nivel
Richard Freyman,
atmico

1959

Nanotecnologa consiste en procesar, separar,

consolidar y deformar materiales por un tomo
o molcula.

Norio Taniguchi , 1974

10

-9

Milmillonsima
parte de un metro.

Las medidas
en
nanotecnolog
a

Nanomateria
les usados y
aprobados
por FDA

 Los dendrmeros, son nanoestructuras ramificadas;

cada terminal contiene grupos funcionales (reactivos
qumicos) que permiten la adicin de ms monmeros
para aumentar su tamao.

Nanomateria
les

Las nanopartculas de oro, partculas de metal slido

que estn recubiertas con molculas de frmacos,
protenas u oligonucletidos.
Los puntos cunticos consisten en una estructura de
ncleo y superficie (por ejemplo, CdSe recubierto con
zinc y sulfuro con una molcula de estabilizacin y
una capa de polmero recubierto con una protena.
Nanotubos de carbono, slo tienen enlaces carbonocarbono.

Cantilevers

Nanotubos de
carbn
Dendrmeros

Nanomaterial
es

Nanocristales

Nanopartculas
Nanocpsulas

Nanocables

Puntos
cunticos

Kim, Betty Y.S; Rutka, James T. Chan, Warren C.W. Nanomedicine. N Engl J Med 2010;363:2434-43

Kim, Betty Y.S; Rutka, James T. Chan, Warren C.W. Nanomedicine. N Engl J Med 2010;363:2434-43

NANOMEDICI
NA

Imgenes en vivo

Espectroscopa
Imagenologa nuclear
Microscopa de electrones
Ultrasonido

Larga vida media

Disminuye toxicidad

Diagnstico in vitro

Microbiochips de
genes, clulas.
Nanobiosensores

Biomateriales

Clulas madre

En contraste con la medicina convencional que reacciona a los sntomas fsicos cuando
ya han producido un dao irreversible, la nanomedicina ofrece la posibilidad de tratar,
as como prevenir una enfermedad a un nivel celular.

protenas,

 Los puntos cunticos estn fabricados de material

semiconductor y contienen slo unos cientos de
tomos y cuando son excitados emiten luz en
diferentes longitudes de onda dependiendo de su
tamao.

Puntos
cunticos

Utilidad: localizacin de tumores en los primeros

estadios, por lo que se puede proceder a su
extirpacin inmediata.
Su superficie est recubierta con molculas biolgicas
que tienen afinidad hacia un compuesto especfico,
asociado con un tipo de cncer en particular. Cuando
los puntos cunticos se acercan a una muestra que
contiene dicha protena, ambos se unen y se podra
detectar la interaccin iluminando los nanocristales
con luz ultravioleta y observando su emisin
caracterstica.

Puntos
cunticos

Nanopartculas de oro que

varan en tamao desde 13
hasta 20 nanmetros (nm) de
dimetro.

Nanopartcul
as de oro

Cada nanopartcula puede

fijar 200 oligonucletidos de
secuencia especfica
Desarroll el mtodo que
permite la fijacin estable de
grupos funcionales
a las
nanopartculas,
incluyendo
oligonucletidos (DNA, RNA) o
anticuerpos (protenas).

Microarray
Es unahibridacinde una muestra de cido
nucleico
con un conjunto de sondas
oligonucletidos, que se unen a un soporte
slido, para determinar la secuencia o para
detectar variaciones en un gen o secuencia de
expresin o para el mapeo de genes.

El micro-arreglo de Verigene

Label

El cartucho contiene un micro-arreglo altamente multiplexado con 360 spots de 150

micras.

10

20

30

40

45

Sntesis de
oligonucletid
os en un chip

Proceso de
hibridacin

Anlisis de los resultados

Anlisis de los resultados (anlisis de matriz), se produce a travs de una tcnica de dispersin
de luz que ilumina el porta-objetos (slide) internamente con luz blanca. Los sitios donde la
plata amplifica la presencia de nanopartculas de oro son detectados y traducidos en una
"seal.

Ejemplo de la "seal" a partir del anlisis

de una diapositiva. Nuestros ojos no son
suficientemente sensibles para
interpretar las diferencias mesurables en
la intensidad de la seal

Fuente
de Luz

Nanobiosenso
res

Kim, Betty Y.S; Rutka, James T. Chan, Warren C.W. Nanomedicine. N Engl J Med 2010;363:2434-43

Deteccin
de genes

A travs de nanopartculas que ofrecen sensibilidad,

especificidad y bajo costo para la deteccin de genes
mutados
asociados
con la enfermedad humana
Utilizan muestras de ADN sin amplificar para
demostrar todas las formas posibles. Ejm: trastornos
de la coagulacin.

 Se colocan en la dermis.

Monitoreo
de glucosa

Nanotubos de carbn contienen glucosa oxidasa.

Ferrocianuro es colocado en la superficie y atrae
electrones al nanotubo.
Glucosa presente se oxida y hay produccin de
perxido de hidrgeno que se une con el ferrocianuro.
Mayor glucosa, mayor fluorescencia.

 Los dendrmeros, de 1 a 10 nm, polmeros esfricos

de
uniforme
peso molecular, a partir de monmeros ramificados.

Medicin de
hormonas

Pueden servir como plataformas de nanoescala

verstiles
en
la
creacin
de
dispositivos
multifuncionales capaces de detectar una serie de
protenas que son detectados actualmente por
prueba individual ELISA por ejemplo: perfil de tiroides,
panel de hormonas esteroides, Panel de las citoquinas
inflamatorias

Cantilevers

Mtodos de prueba para Virus Respiratorios

Flujo de trabajo convencional para PCR

Collect NP swab
specimen and store in
transport medium

~50 mins

~15 mins

~20 mins

Prepare samples and

negative control

Prepare sample prep instrument

and software: load reagents and
consumables, set up protocol;
load samples and controls

100 mins

Begin sample prep run

~10 mins

~5 mins

Dispose of
consumables;
store eluted
nucleic acid on
ice

~25 mins

RESULTADOS
Trabajo en la tcnica:
~1:15 hs
Tiempo total de la
prueba: ~3:45 hs

Run real-time RTPCR on analyzer

Create run on realtime PCR instrument;

enter sample IDs, lot
numbers, etc.; load
samples and controls

Dilute positive
controls; prepare
RT-PCR mastermix

Cartucho

Cartucho de prueba

Reactivos

Micro-arreglo

Cartucho del microarreglo

Paquete de reactivos

Micro-arreglo

Laboratorio
en un chip

Describe el desarrollo de plataformas integradas y

miniaturizadas donde
tienen
lugar complejas
reacciones qumicas y bioqumicas.
Un
simple
microsistema
con
nanosensores
incorporados ofrecen un diagnstico completo a partir
de una gota de sangre mediante la identificacin de
cambios moleculares. Esto implica que los anlisis
podran hacerse a domicilio. Cuando empecemos a
reemplazar los caros y lentos anlisis de laboratorio
por estos anlisis de microchips ms baratos, rpidos
y cmodos, el impacto en organizaciones sanitarias y
sus pacientes ser tremendo.

 Nanopartculas y nanotubos de carbn.

Laboratorio
en un chip

Kim, Betty Y.S; Rutka, James T. Chan, Warren C.W. Nanomedicine. N Engl J Med 2010;363:2434-43

En
enfermedad
es que
amenazan
la vida

Prevencin
Deteccin temprana
Mejora en tratamiento

Limitaciones

Principal limitacin

Falta de estudios de investigacin

A largo plazo
Poca informacin de efectos adversos
Nanoestructuras
Biodegradables o no

Respuestas toxicas

E
L
T
A
M
A

Aparicin de radicales libres

Perjudicial

Pasaje a travs de la barrera placentaria

Modificacin de genes y daos neuronales

El Futuro de la
Nanotecnologa

Nanotecnologa
Enfocada en 4 aspectos

Desarrollo de nanoparticulas multifuncionales

Desarrollo de nanoparticulas biocompatibles

Creacin de nanoparticulas con menor toxicidad

Integracin de nanotecnologa con otras ramas de estudio

Blanco
Medicamento
Diagnostico
Identificacin
Excrecin renal o
hepatobiliar
Robtica

Mas efectivo
Nanotecnologa

Enfocada al cncer

Menos invasivo
Econmicamente accesible
Tratamiento a mediano plazo

Desarrolla

Reparacin

Nanomedicina
regenerativa

Encargada de
Regeneracin

rganos y tejidos
daados

Clulas
A travs del control de nanoestructuras
Matriz extracelular

Gracias!!!