TEMA II

ESPECTROMETRA DE ABSORCIN MOLECULAR

EN LA REGIN VISIBLE Y ULTRAVIOLETA.

Fenmenos involucrados en el proceso de absorcin.

Anlisis cualitativo. Anlisis cuantitativo: ley de Lambert-Beer,
limitaciones propias, desviaciones instrumentales y del
sistema qumico. Interferencias espectrales y qumicas.
Espectrofotmetros: esquema y componentes de equipos de
simple haz y de doble haz. Control y evaluacin de las
caractersticas de un espectrofotmetro. Ruido instrumental,
error fotomtrico y sensibilidad. Espectrometra diferencial.
Aplicaciones.

1er clase

El espectro electromagntico

Se define longitud de onda, , como la distancia entre dos puntos

equivalente de una onda; segn la porcin del espectro
electromagntico que se quiera caracterizar, puede ser medida en
metros, cm o nanometros (10-9 m). La frecuencia es el nmero de
veces que una longitud de onda pasa por un punto fijo en la unidad de
tiempo, y est dada en ciclos/seg. o hertz (Hz).

Luz
blanca

Altas
frecuencias

Bajas
frecuencias

Rojo
800
nm
Anaranjado
720 nm

Violeta
400 nm
Espectroscopa Ultravioleta-Visible:
Cuando la materia absorbe radiacin electromagntica
de longitud de onda comprendida entre 200 y 800 nm , la
relativamente alta energa involucrada en el proceso
causa excitacin electrnica .
El ojo humano funciona como un detector sensible que
analiza la luz reflejada por la superficie de un slido o la
que es transmitida a travs de un lquido. La luz blanca
emitida por el sol est compuesta por un amplio mbito
longitudes de onda en la regin del ultravioleta (UV),
visible (V) y el infrarrojo (IR).

Amarillo
640 nm

Azul
480 nm
Verde
560 nm

Fenmenos involucrados en el proceso de absorcin

Las energas (frecuencias) observadas son suficientes para promover o excitar un electrn
perteneciente a un enlace molecular o a un electrn no enlazante localizado en alguno de los
tomos de la unin. Consecuentemente, la espectroscopa de absorcin molecular en esta
regin del espectro es conocida como espectroscopa electrnica. El diagrama de la
izquierda muestra las distintas posibilidades de excitacin electrnica que pueden ocurrir en
molculas orgnicas: de las 6 transiciones posibles, slo las dos de menor energa (n * y
* ) son posibles para las longitudes de ondas comprendidas entre 200 to 800 nm. Como
regla, la promocin de un electrn se ver energticamente favorecida cuando la misma
ocurra desde el orbital molecular ocupado de mayor energa (highest occupied molecular
orbital , HOMO) al orbital molecular desocupado de menor energa (lowest unoccupied
molecular orbital, LUMO), y la especie resultante se dice que est en un estado excitado.

Diagrama de Orbitales moleculares para

formaldehdo (CH2O)

H
4*

H
s=

p=
n=

Reglas de seleccin
Dado que todas las transiciones posibles no son igualmente probables, los
espectroscopistas derivaron reglas de seleccin que contemplan los factores que
influyen en la probabilidad de una transicin. Obviamente, uno de estos factores es el
solapamiento de los orbitales involucrados en la excitacin electrnica. Por ejemplo,
para el grupo carbonilo (>C=O), existen dos posibles transiciones:

n *
*

transicin de menor energa

transicin a mayor energa

(max=290 nm)
(max=180 nm),

pero la probabilidad de absorcin para la transicin n * es mil veces menor que para
*. La distribucin espacial de los orbitales, mostrada en el diagrama, explica lo
observado: el orbital n no se solapa tan efectivamente con el orbital * orbital, de modo
que la probabilidad de este modo de excitacin es pequea. La transicin * , en
cambio, involucra orbitales con solapamiento significativo, y la probabilidad de la
transicin electrnica es cercana al 100%.

Reglas de seleccin en la espectroscopia electrnica

Se utiliza la mecnica cuntica para identificar las reglas de seleccin, reglas que surgen para explicar la aparicin
de bandas de absorcin en las tcnicas espectroscopias. Tales reglas proporcionan informacin de la probabilidad
de una transicin electrnica dada, que adems determina la intensidad de la banda.
1.- Una transicin es permitida slo si implica un cambio en el nmero cuntico de orbital
(especficamente, |l| = 1).
As, s p y d p son ejemplos de transiciones permitidas, pero p p y d d son prohibidas. Esto explica
algunos fenmenos qumicos familiares como la gran intensidad del color amarillo-naranja que se produce cuando
un material conteniendo sodio se pone en una llama; la transicin permitida 3s 3p tiene lugar a 590 mn, en la
regin visible.
En contraposicin, los colores menos intensos de muchas sales de metales de transicin que proceden de
absorciones d d de baja probabilidad (prohibidas) desde el punto de vista de la variacin del momento angular.
.
2.- Slo estn permitidas las transiciones de un electrn. As, para el magnesio la transicin 3s2 3s1-3p1
est permitida, pero la 3s2 3p2 est prohibida.
3.- La multiplicidad de spin se mantiene para una transicin permitida (S = 0). Es decir, un electrn no puede
invertir su spin mientras tiene lugar la excitacin. Debido a esta regla, los nicos estados excitados accesibles
desde un estado fundamental doblete son tambin estados dobletes, y mientras que en una transicin singlete
triplete, observada algunas veces, la intensidad de su banda es baja.
4.- Para especies que tienen un centro de inversin, la paridad cambia durante una transicin permitida.
Es decir, g u y u g son transiciones permitidas, mientras que g g y u u son transiciones prohibidas. Esta
regla se llama regla de Laporte.
Una consecuencia prctica es que especies altamente simtricas normalmente absorben menos que especies
similares menos simtricas. Por ejemplo, las bandas de absorcin d d del complejo octadrico [Ni(NH3)6]2+ son
doblemente prohibidas (por las reglas de orbital y de paridad), y son, por lo tanto, bastante dbiles. La sustitucin
de un grupo NH3 por un ligando diferente para dar [Ni(NH3)5L]n+ da lugar a un complejo sin centro de inversin y por
lo tanto, la intensidad de sus bandas son normalmente superiores.

Magnitud de las Absortividades Molares

= 8.7x1019 P A

0 a 105 en el mbito UV/Vis

P es la probabilidad de la transicin
Transiciones prohibidas
Transiciones permitidas

< 0.1;
entre 0.1 y 1

A es la seccin transversal del rea de la molcula

blanco (en cm2); alredeor de 10-15 cm2
Como consecuencia, y combinando ambos factores,

Bandas fuertes
Bandas dbiles

= 104 - 105
< 103

Como una norma muy general, cada violacin de una regla de seleccin reduce la intensidad de la
banda en un factor de 101 - 102.
Una transicin completamente permitida tiene una absortividad molar de 104 L/mol.cm o mayor.
Un valor alrededor de 102 es ms tpico de una transicin d d, salvo, que sta est tambin prohibida
por spin y/o por la regla de la simetra; en este caso, la absortividad puede caer hasta 10 L/mol.cm o
menor.

La importancia de la conjugacin
Chromophore Ejemplo
Example Excitacin
Excitation
Cromforo

max, ,nm
nm
mx

Solvent
Solvente

C=C

Ethene

__

> *

171

15,000

hexane

CC

1-Hexyne

__

> *

180

10,000

hexane

Ethanal

__

C=O

> *
> *

290
180

15
10,000

hexane
hexane

Nitromethane

__

N=O

> *
> *

275
200

17
5,000

ethanol
ethanol

C-X X=Br
X=I

Methyl bromide
Methyl Iodide

n
n

__

> *
> *

205
255

200
360

hexane
hexane

__

__

__

Las geometras moleculares capaces de absorber luz (200 nm<< 800 nm ) son los grupos
funcionales con electrones y heterotomos con electrones en orbitales n, no ligantes. A
tales grupos absorbentes se los conoce con el nombre de cromforos.
Las transiciones n * de alcoholes y teres ocurren a mx < 160 nm => pueden ser
utilizados como solventes transparentes en estudios espectroscpicos.
Instrumentalmente es impracticable determinar datos de absorcin de radiacin a < 200 nm.
Sin embargo, la conjugacin de grupos cromforos produce un corrimiento a mayores
longitudes de onda de los mximos de absorcin (corrimiento batocrmico), de manera que
la absorcin UV se vuelve apropiada para la identificacin de este tipo de estructuras.

>10.000 para cromforos fuertemente absorbentes; muy pequeos (10 a 100) si la absorcin de radiacin es dbil.
La magnitud de refleja tanto el tamao del cromforo como la probabilidad de que luz de una determinada longitud de
onda sea absorbida por el mismo.

Terminologa para corrimientos espectroscpicos

Naturaleza del
corrimiento

Trmino

A mayor

Batocrmico

A menor

Hipsocrmico

A mayor
absorbancia

Hipercrmico

A menor
Absorbancia

Hipocrmico

Los 4 orbitales atmicos p de dos dobles enlaces

conjugados se combinan para formar 4 orbitales ,
dos ligantes y dos antiligantes; tres dobles enlaces
de un trieno conjugado crea 6 orbitales , la mitad
enlazantes y la mitad antienlazantes. La transicin
ms favorable energticamente * ocurre
desde el orbital molecular ocupado de mayor
energa (HOMO) al orbital molecular antiligante
de menor energa (LUMO).
El aumento de la conjugacin acerca los orbitales HOMO y LUMO, de manera que la energa requerida (E)
para la excitacin electrnica es menor, y por lo tanto, aumenta ( = h c/E ).

Grupos Auxocromos
Provocan un efecto hipercrmico

Determinadas agrupaciones atmicas que por s mismas

no comunican color a la molcula que pertenecen, pero
son capaces de reforzar la accin de un cromforo.
Suelen contener grupos funcionales con electrones en
orbitales no enlazantes y que, en consecuencia, pueden
absorber nicamente en el ultravioleta lejano,
contribuyen a la estabilizacin de los orbitales .

Efecto del solvente

Corrimiento Hipsocrmico (n- p*): corrimiento al azul
polaridad del solvente >solvatacin
de los pares de electrones n y E(n)
los picos se corren hacia el azul
(ms energticos)
El corrimiento es del orden de 30 nm
(similar a la energa de puente H)

Corrimiento Batocrmico (p p*; C+-O-): corrimiento al rojo

polaridad del solvente polarizacin de la especie excitada y por tanto la
fuerza de atraccin entre solvente y especie absorbente, -E del estado
fundamental y excitado, esta ltima en mayor proporcin los picos se corren
hacia el rojo (5 nm)

Transiciones electrnicas
en molculas orgnicas
Transiciones n * y *
La mayora de las absorciones en molculas orgnicas se
deben a estas dos transiciones ubicadas en el mbito 200-700
nm.
Ambas aparecen en molculas con dobles enlaces
correspondientes a orbitales ocupados.

Transiciones *
Corresponde a una transicin
electrnica en un enlace nico de
simetra esfrica de tan alta energa
que ocurre solamente en el mbito del
UV de vaco.
El enlace C-H en metano absorbe a
125 nm.
El etano presenta una absorcin
adicional a 135 nm, atribuida a la
transicin en un enlace C-C, de
menor energa.
Las bandas de absorcin
correspondientes a las transiciones
* no son apreciables en el
cercano UV y no generalmente no
tienen utilidad prctica.

n *
- Bajas absortividades
- Corrimiento a mayores energas (menores s) en solventes
polares (corrimiento hipsocrmico o azul): debido a la mejor
solvatacin, el nivel n se estabiliza y la transicin requiere una
mayor E.
-El corrimiento pude ser del orden de 30 nm en agua, debido al
enlace puente de H. La energa del el extremo superior de la
transicin, *, no se ve afectada.

*
-Altas absortividades.
-A veces (pero no siempre) ocurre corrimiento a menores
energas (mayores s) en solventes polares (corrimiento
batocrmico o rojo), de mucho menor significacin, de alrededor
de 5 nm.
Los electrones en orbitales y * estn apenas solvatados,
siendo ms favorable la solvatacin en * (<E (*), de manera
que el E resulta menor cuando se aumenta la polaridad del
solvente.

Iones de elementos de transicin interna (3d y 4d)

Orbitales d

Teora del campo cristalino/campo

ligando
dxy, dxz y dyz tienen geometra similares, y estn
orientados entre los ejes que indican su nomenclatura.
dx2-y2 y dz2 estn orientados en coincidencia con los
ejes.

Teora del campo cristalino/campo ligando

En ausencia de un campo elctrico o magntico

externo, todos los orbitales d tiene igual energa (5d
degenerados). Los electrones se mueven libremente
entre los distintos orbitales, no siendo necesaria la
absorcin de radiacin para promover un electrn de
un orbital a otro.

El enlace coordinado se debe a la interaccin electrosttica del in central con los grupos ligando
Los grupos ligando se comportan como cargas negativas: el campo electrosttico creado en torno al
in central da lugar a un efecto de enlace adicional (energa de estabilizacin del campo ligando)

La magnitud de la interaccin del ligando con los orbitales d depende de:

Densidad de carga del ligando: a mayor densidad de carga, mayor separacin del campo.

Disponibilidad de pares libres: un solo par electrnico distorsiona ms que dos (un solo par se orienta
mejor para formar el enlace).

Capacidad de formar uniones : a mayor capacidad para formar uniones , mayor separacin.

Los orbitales d ms afectados sern los dx2-y2 y los dz2.

Ejemplo:
En ausencia de campo externo, los cinco orbitales 3d
del Fe3+ son todos de igual energa

Cuando estos orbitales se encuentran en presencia

del campo electrosttico de los ligandos, dejan de tener
la misma energa

La proximidad de los tomos dadores (cargas

puntuales) al tomo central produce un campo
elctrico que elimina la degeneracin existente en el
grupo de orbitales d y los divide en dos grupos,
los t2g de energa inferior y los eg con energa
superior.

Entorno
esfrico

En campo
octadrico

x
y

Se desestabilizan

dz2
dx2-y2

Se estabilizan
dxy
dxz
dyz

Entorno
esfrico

En campo
tetradrico

Se estabilizan
dz2 dx2-y2

Se desestabilizan
dxy
dxz
dyz

Cuadrado-plano
Octadrico
x2-y2, z2
Do

xy, xz, yz

Se estabilizan los orbitales

que tienen componente z
dxz dyz dz2

Se desestabilizan los orbitales

que tienen componentes x e y
dxy dx2-y2

Campo octadrico, tetradrico y cuadrado plano

Acuo-complejos de elementos de transicin interna (3d y 4d)

Ti3+

Fe2+

V3+

Co2+

Cr3+

Ni2+
Cr2+

Mn2+

Cu2+

Complejos de transferencia de carga

Fe+3 SCNFe+3 Fenol

Fe+2 0-fenantrolina
I3- (complejo de I2 en exceso de I-))

Caracterstica: >10000 deteccin y cuantificacin sensible

Condiciones:

* un grupo debe ser un e- -aceptor fuerte,

generalmente un metal (cido de Lewis)
* el otro debe ser un e- -donor fuerte (base de Lewis)

Como consecuencia de esta transferencia de electrones se origina

un estado excitado que es el resultado de un proceso de
xido-reduccin interna.
La transicin involucra el movimientos de un e- desde el donor hacia
el aceptor, desde un tomo al otro, y no entre orbitales moleculares.
Usualmente, el e- regresa rpidamente a su estado original;
si el complejo se disocia antes,
ocurre una reaccin rdox fotoqumica.

2da clase

Interaccin de la luz con la muestra

Luz dispersada

Luz incidente

Luz transmitida

reflexin en las interfases

Absorcin de luz

cmo se deducen propiedades de absorcin a travs del estudio de luz transmitida?

cmo se tratan la reflexin y la dispersin?

Tratamiento instrumental de la dispersin

La dispersin es despreciable en solucin, en donde las molculas
estn homogneamente distribuidas
La dispersin es considerable en coloides y slidos cuando el
tamao de la partcula es del orden de la longitud de onda utilizada

La dispersin se reduce suspendiendo las partculas en

un medio con ndice de reflexin similar (KBr en pastillas e
inmersin en Nujol para IR

Tratamiento instrumental de la reflexin

Luz incidente

Luz transmitida

reflexin en las interfases

La fraccin de luz reflejada
puede ser compensada midiendo
simultneamente con iguales
materiales (cubeta y solvente)

Luz incidente

Luz transmitida

reflexin en las interfases

La fraccin de luz reflejada puede

ser minimizada aumentando el espesor
de la muestra: el nmero de interfases
permanece constante

Transmitancia
T
muestra

Si la luminiscencia y la dispersin son despreciables

1=+T+

= absorbancia
T = transmitancia
= reflectancia

Si se elimina o minimiza la reflexin,

1=+T
En estas condiciones, la absorcin puede ser calculada a travs de la luz
transmitida.

Luz transmitida y absorcin

T

muestra

dI: disminucin de I en un espesor infinitesimal dl

c: concentracin molar de la especie absorbente [mol/m3]
: coeficiente neperiano de extincin molar [m2/mol]
reordenando e integrando en el ancho de la muestra

Ley de Lambert-Beer
Absorbancia neperiana
Absorbancia (base 10)

TODAS ESTAS MAGNITUDES

SON ADIMENSIONALES

Ley de Lambert-Beer
Transmitancia (T)
P = potencia transmitida
P0 = potencia incidente

Absorbancia (A)
A = -logT
A = 2 log T%

INSTRUMENTACIN
Interruptor
Fuente
luminosa

P0

Cubeta

Lectura

Detector

PT
Amplificador

Sistema
dispersor de luz

p0

Adquisicin digital
de datos
Fuentes continuas
(D2 y W)
Prismas
Redes de difraccin

Fotomultiplicador
Fotodiodos

Cuarzo (UV)
Vidrio ptico (visible)
Plstico (descartables)

28

FUENTES CONTINUAS
Espectro de emisin de una lmpara de arco de D2 y filamento de tungsteno

Bulbo de cuarzo o vidrio que contiene al

filamento de tungsteno

29

Fuentes continuas
Lmparas de Hidrgeno y Deuterio (160 375 nm)

D2 + Ee D2* D + D + h
Bulbo de cuarzo relleno con
deuterio; contiene un par de
electrodos.
Molcula excitada de deuterio
con energa cuantizada
(discreta)

Disociacin en dos tomos

de deuterio con diferentes
energas cinticas

Ee = ED2* = ED + ED + hv

Ee es la energa elctrica absorbida por la molcula. ED2* es la energa cuantizada

de D2*, y ED y ED son las energas cinticas de ambos tomos de deuterio 30

Fuentes continuas
Lmparas de Tungsteno (350-2500 nm)
Emisin de cuerpo negro (dependiente de la temperatura)
Se le agrega I2
W + I2 WI2
ayuda a conservar el filamento

aumenta la vida til de la lmpara

mejora su eficiencia luminosa
reduce el tamao del filamento
mayor temperatura de color
poca o ninguna depreciacin luminosa
reproduccin del color excelente.
Apariencia de color: blanco
Temperatura de color: 29000 K
Vida til: 2000 - 5000 h
31
Ley de Planck para emisin de un cuerpo negro

DISPERSIN DE LUZ
Difraccin por un prisma

El giro del prisma

permite seleccionar
diferentes -s.
Ranura

El ancho de ranura
define el mbito de
longitud de onda

D (dispersin angular) = d/d = d/d * d/d

d/d es mxima para = 60
R = (medio) /

no es lineal, pues depende de d/d

32

DISPERSIN DE LUZ
Difraccin por redes de difraccin
Por transmisin (transparentes)
Por reflexin (placas de plstico, moldeadas sobre red primaria, cubiertas de Al)
Interferencia positiva slo si

CB + BD = n
CB = dsen i
DB = dsen
n = d( sen i + sen )

Ecuacin de la red

Haz de luz colimada y coherente

d = 1 mm/1000
D (dispersin angular) = d/d = n/ d*cos ~ n/d
D (dispersin lineal) = dy/d = F*d/d ~ F*n/d

33

DISPERSIN ANGULAR Y LINEAL DE UNA RED DE DIFRACCIN

D (dispersin angular) = d/d

n = d (sen i + sen r )

sen i = cte

d = cte

d
n d = d cos r dr

cos r 1

n = cte

d
dr
n
= = cte
D=
d d

D (dispersin lineal) = dy/d

d
d
dsen r
cos r dr
dr
n
=F
F = F = cte
Dlineal = F
d
d
d
d
34

DIAGRAMA DE DISPERSIN POR UNA RED DE DIFRACCIN

n = d( sen i + sen )

35

COMPARACIN DE PRISMAS Y RED DE DIFRACCIN

36

EQUIPOS CON PRISMA Y CON RED DE DIFRACCIN

Con prisma de Littrow

30 espejado (evitar birrefringencia)
Con espejo de Littrow

Con red de difraccin

37

MONTAJE TIPO EBERT

38

MONTAJE DE CZERNY - TURNER

Monocromador Fastie-Ebert:
es similar al Czerny-Turner pero usa un
nico espejo de enfoque/colimador.
39

3ra clase

EFECTO DEL ANCHO DE BANDA ESPECTRAL

Ancho de banda: desplazamiento del monocromador (en unidades de ) necesario para barrer
la ranura de salida con la imagen de la ranura de entrada

()

w =

2ancho de banda efectivo =

ancho espectral de la ranura

w = 1/2

40

EFECTO DEL ANCHO DE BANDA ESPECTRAL

SOBRE EL ESPECTRO DEL CITOCROMO C

41

EFECTO DEL ANCHO DE RANURA

Rendijas angostas
mayor estructura fina en los espectros
se obtienen absorbancias mayores

Rendijas angostas
disminuye la intensidad luminosa
disminuye la relacin S/R

(ver exactitud fotomtrica)

Situacin de compromiso
reducir el ancho de la rendija lo suficiente como
para resolver estructura fina sin prdida de seal

42

ELECCIN DEL ANCHO DE RANURA

La funcin principal del monocromador es proveer un haz de energa radiante de
longitud de onda y ancho de banda espectral dados.
La funcin secundaria es el ajuste de la
potencia luminosa: la luz emergente de
la ranura de salida puede ser controlada
por ajuste del ancho de la rendija.

Rendijas anchas
Bandas anchas y
desviacin de la ley de Beer

Rendijas angostas
Bajo rendimiento lumnico y
disminucin de S/R

43

SISTEMAS DE DETECCIN
Diagrama de un fotomultiplicador
La seal se amplifica en cada dinodo, que est
aproximadamente 90 V ms positivo que el
dinodo anterior.
Eventualmente, los electrones se recogen en
el nodo. En este momento, se han producido
106 - 107 electrones por cada fotn incidente;
la corriente resultante es amplificada y
medida.

44

Requisitos a cumplir:

Responder a una amplia regin de de Eradiante

Ser sensibles a bajos niveles de Eradiante
La respuesta debe ser rpida
La seal elctrica producida debe ser fcilmente amplificable
Debe tener un nivel bajo de ruido
La seal elctrica generada debe ser directa y linealmente
proporcional a la potencia del haz incidente sobre el detector
G = k + kP
G = i, R, V
k = corriente negra
A = log Po/P = log (kGo/kG) =
k= sensibilidad
= log (Go/G)
45

RESPUESTA ESPECTRAL
DE SUPERFICIES FOTOSENSORAS

46

SISTEMAS DE DETECCIN
Fotodiodo
El diodo ideal es un componente discreto que permite la circulacin de corriente entre sus
terminales en un determinado sentido, mientras que la bloquea en el sentido contrario.

Estn constituidos de una capa de Si tipo-p

(dopado con In, B Ga) sobre un soporte de
Si tipo-n (dopado con As, P o Sb) , creando un
diodo de unin p-n cubierto por una ventana
de SiO2 a modo de proteccin.
Cuando se polariza inversamente, los
electrones y huecos se alejan de la zona de
unin, formando una zona de deplecin que
acta como un capacitor, con cargas
acumuladas a ambos lados de la interfase.
47

Se observa que en la zona de deplecin

no hay prcticamente electrones ni
huecos libres. En esencia, el dispositivo
se asemeja a un condensador en el que
la regin intermedia sirve de dielctrico y
las zonas dopadas actan como placas
cargadas de un condensador.
El campo electrosttico principal existe
dentro de la regin de deplecin y
cualquier par electrn-hueco tender a
separarse (en direcciones opuestas)
atrado por la tensin en la zona de
deplecin y la tensin de polarizacin
inversa aplicada.
La generacin de pares ocurrir a varias
profundidades, dependiendo de la
energa de los fotones y de la naturaleza
y grosor de los materiales.
Si se producen pares electrn-hueco fuera de
la zona de deplecin, tendrn una elevada
probabilidad de recombinacin, en cuyo caso no
habr fotocorriente disponible.

48

La medicin de corriente, o funcionamiento a tensin constante mientras el diodo detecta

la fotocorriente, es generalmente el mejor modo de funcionamiento.
La corriente del fotodiodo es en este caso lineal en varias dcadas, y es igual a:

Ifoto = q r Jr AD

q = carga del electrn (1,6 X 10-19 C).

r = rendimiento cuntico, electrones/fotn.
Jr= flujo de radiacin de la fuente,
fotones/(seg) (cm2).
AD= rea del detector, en cm2.

Caractersticas:
el espesor de la capa p superior debe ser tan delgada como sea posible y la
zona de deplecin efectiva tan ancha como sea posible, para llevar al mximo el
rendimiento cuntico.
La zona de deplecin puede ensancharse aumentando la polarizacin inversa
del diodo.
Aumentando la polarizacin inversa tambin disminuye el tiempo de trnsito que
tardan los electrones y los huecos en alcanzar los extremos.

49

ARREGLO DE FOTODIODOS

( unin p-n )

10 pF
Tamao real
5V

Al principio de cada medida, el diodo est

completamente cargado. Cuando incide la
radiacin, los electrones libres y huecos
creados migran a la regin de carga
opuesta, descargando parcialmente el
capacitor, siendo la carga remanente
inversamente proporcional a la potencia
radiante. La descarga del capacitor al final
de la medida es determinada por medicin
de la corriente requerida para cargar
nuevamente el capacitor.
50

INSTRUMENTACIN
Clasificacin segn arreglo ptico

Clasificacin segn monocromador

Mono haz
Doble haz en el espacio
Doble haz en el tiempo
Multicanal

Fotmetros
Espectrofotmetros

Fotmetros: son instrumentos ms simples que utilizan

filtros como elemento monocromador. Slo detectan una
nica longitud de onda por vez, tienen una relacin S/R
alta debido a la simpleza de la ptica y son poco
costosos.
Espectrofotmetros: son instrumentos que contienen
elementos dispersivos (redes o prismas) como
monocromadores, algunos permitiendo el barrido
simultneo de varias longitudes de onda. Son ms caros,
y usualmente tienen una relacin S/R menos favorable
debido a la complejidad de la ptica.

51

TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos mono haz
Pueden ser de lectura nica o de barrido digital (almacenado en memoria)
Diseo instrumental simple
Sensible a: 1.- fluctuaciones o parpadeo de la fuente
2.- deriva o parpadeo del detector

0% T se fija con el obturador en el paso de luz

100%T se ajusta con la solucin en la cubeta
Se toman las dems medidas colocadas en forma sucesiva en la cubeta
Se calcula A = log P0/PT
52

EQUIPO SIMPLE HAZ

Espectrmetro Bausch & Lomb (Spectronic 20)
Bajo costo (U$S 500 a 3000)
380 nm < < 800 nm
Resolucin 8 20 nm

53

TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos doble haz en el espacio

Solucin blanco y analito se leen simultneamente

y la seal de referencia es restada de la seal de la muestra
La mayor desventaja es la necesidad de 2 detectores (apareados),
que hace al instrumento ms caro
54

TIPOS DE INSTRUMENTAL
Instrumentos doble haz en el tiempo

Es el tipo doble haz comercialmente ms utilizado

Ventajas respecto a un simple haz:
compensacin por variacin de la intensidad de la de fuente
compensacin por deriva del detector y amplificador
compensacin por variacin en la intensidad como funcin de
La seal de salida peridica permite filtros basados en frecuencia
55

EQUIPO DOBLE HAZ MANUAL

56

EQUIPO DOBLE HAZ CON UNA CUBETA

57

EQUIPO DOBLE HAZ CON DOS CUBETAS

58

TIPOS DE INSTRUMENTAL
Mono haz

Doble haz

Simple haz

Doble haz

W/I2 - D2

W/I2 - D2

Rango

200 900 nm

200 900 nm

Costo

U$S 3000 -U$S 8000

U$S 4000 -U$S 15000

Resolucin

0,5 to 8 nm

0,1 to 3 nm

Exactitud

0,05 nm

0,03 nm

Lmparas

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EQUIPO DOBLE HAZ CON DISPERSIN DOBLE

La luz pasa dos veces a travs del monocromador aumentando

grandemente la resolucin
Ancho de banda: 0,07 nm
Luz espuria: 0,0008%
Caro (> U$S 10000)

60

TIPOS DE INSTRUMENTAL
Espectrofotmetro con arreglo de diodos (multicanal)

Capacidad de barrer (registrar) el espectro en 0,1 seg.

Promedia la seal durante 1 seg. o ms para aumentar la relacin S/R
Posee alto rendimiento de energa radiante debido a la ptica escasa
Resolucin 0,2 nm
Bajo costo
Interferencia por difraccin de segundo orden
Fluorescencia de la muestra
La resolucin depende de la red y del arreglo de diodos
Ruido del detector
61

EQUIPO MULTICANAL DE DOBLE HAZ

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 Tamao compacto
Barrido rpido ( 0,1 seg.)
Rango: 200 800 nm
Ancho de banda: 2 nm
Costo: U$S 3000 U$S 10000

63

4ta clase

Ley de Lambert-Beer

Transmitancia (T)
P = potencia transmitida
P0 = potencia incidente

Absorbancia (A)
A = -logT
A = 2 log T%

Limitaciones reales (fundamentales) de la Ley de Beer

La radiacin incidente debe ser monocromtica.

Los centros absorbentes deben actuar independientemente, libres de interaccciones
electrostticas mutuas, en el momento de la absorcin [analito] < 0,01 M
La seccin transversal (x*y) del volumen donde ocurre la absorcin debe
permanecer constante a lo largo del paso ptico.

Limitaciones aparentes de la Ley de Beer

Limitaciones instrumentales

Limitaciones del sistema qumico

Falta de monocromaticidad
Luz espuria
Relacin seal a ruido

Equilibrios: disociacin, pH,

formacin de complejos
Interaccin por concentracin o
puente de H
Cambio en el ndice de refraccin
Fluorescencia o fosforescencia

Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: radiacin policromtica

Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: luz espuria

PS = stray light
T =

P + PS
P0 + PS

A = log T
P + PS

A = log
P0 + PS
A = abc = kc
La luz espuria limita el lmite superior instrumental de lectura de Absorbancia:
Si Ps = 1%

A = log[(P0+0,01P0)/(0+0,01P0)] = log(1,01/0,01) ~ 2

El lmite inferior de absorbancia lo fija el ruido instrumental

Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: relacin seal a ruido

Definicin: es la mnima concentracin o masa

de analito que se puede detectar con un nivel
de significacin dado.
Depende de las fluctuaciones de la seal del
blanco.

Limitaciones instrumentales de la Ley de Beer: ruido instrumental

A: - Corriente negra o ruido del amplificador : proviene

de la agitacin trmica (aleatoria) de los electrones.

Ocurre fundamentalmente en resistencias,
condensadores, detectores de radiacin y
dems elementos resistivos.
Depende de la temperatura, del ancho de banda y es
independiente de la frecuencia de trabajo.
Mnimo para 0,1 < A <1

B : - Ruido de disparo: proviene del movimiento de

electrones o fotones en los nodos o uniones. Es
aleatorio. Depende del valor de la corriente, del ancho de
banda y es independiente de la frecuencia de trabajo.
Importante si A < 0,02
C: - Ruido de parpadeo: es proporcional a la magnitud
de la seal; depende de la construccin y ensamblado
de resistencias y detectores de fotones. Otra causa es la
variacin de alimentacin de la lmpara , o dispersin.
Rango ptimo: 0,2 < A < 0,9

c
0.434
=
T
c
T log T

Precisin fotomtrica: curva de Twyman-Lothian

Suposiciones:
T es independiente de T
incertidumbre en b: se evita por cubetas apareadas
incertidumbre en : se minimiza por regresin lineal

Etapas:
Ajuste de 0%T
Ajuste de 100%T
Medida de %T
(10 a 20 veces)

c 0.434 D
=
c
log T * T

y ya que estamos Exactitud fotomtrica

Exactitud fotomtrica: est basada en la relacin
entre la transmitancia medida y el cambio
en la potencia radiante.

T
muestra

Parmetros afectan la exactitud fotomtrica :

w
W

ancho de rendija respecto al ancho de la banda

w < 10% ancho de banda (Cuidado! S/R puede disminuir!)
barrido del espectro muy rpido respecto de w: los mximos
se corren en la direccin de barrido y aparecen achatados.
inexactitud en fijar
luz espuria (importante para IT bajas o en zonas de baja
sensibilidad del detector)

Limitaciones del sistema qumico de la Ley de Beer:

equilibrio cido base

Limitaciones del sistema qumico de la Ley de Beer:

Interaccin por concentracin/puente H
Limitaciones del sistema qumico de la Ley de Beer:
formacin de complejos
Cuando la especie absorbente es un ion complejo, la concentracin del ligando libre
debe ser constante y en exceso (~100 veces) respecto a la del analito

Limitaciones del sistema qumico de la Ley de Beer:

disociacin/asociacin
Limitaciones del sistema qumico de la Ley de Beer:
Cambio del ndice de refraccin por concentracin

= (verd )

C < 10-3 M, constante

Para altas concentraciones, vara considerablemente
y por lo tanto tambin, causando desviacin
de la ley de Beer

( 2 + 2) 2

Interferencias espectrales

Incluir caso Fig. 3.24

pag 80 Hernndez
Hernndez
Las interferencias
espectrales
son siempre
positivas (aditivas)

Interferencias
B.- Interferencias qumicas

generalmente negativas
proporcionales a la concentracin de interferente

Se considera interferente todo aquello que altera el equilibrio qumico,

influyendo sobra la concentracin de la especie absorbente y la concentracin
total del analito.
Ejemplo:
pH
presencia de otros ligantes
sustancias que compiten por el ligante

Una vez detectadas las interferencias, stas se deben eliminar o corregir.

Si no es posible, se debe recurrir a la separacin del analito u otros mtodos
de cuantificacin que contemplen la presencia del interferente.

Espectrometra derivativa
Si un espectro se representa
como la absorbancia A como
funcin de la longitud de onda ,
los espectros derivados son:

W =1

W =0.53

W =0.34

El nmero de bandas que aparecen

es igual a n+1

bipolar

aparecen lneas satlites

La funcin es 0 a mx

mx coinciden

Obtencin de espectros derivados

Una forma matemtica de obtener espectros derivados
es digitalizando con intervalos de apropiados al ancho
de banda natural del analito y al ancho de banda espectral
del instrumento.

n=1

n=2
O bien por ajuste de un polinomio :

A = a0 +a11+a22+all
Cuantificacin
Si se asume que un espectro de orden cero cumple con la
ley de Beer, debe existir una relacin lineal similar entre la
concentracin y la amplitud de la banda para los rdenes
superiores.
Tomando la diferencia entre el mnimo menor y el mayor
mximo se logra la mejor relacin S/R, pero es ms
sensible a errores por interferencia de otros componentes

Ventajas y Aplicaciones
Identificacin y caracterizacin
mayor resolucin (ver Fig.1)
resolucin de interferencia mutua
eliminacin del fondo:
en el barrido espectral, el fondo es constante
y por lo tanto su derivada es cero)

Ventajas y Aplicaciones

mejora la exactitud en la cuantificacin de

Interferencia por adicin

de luz dispersada (aprox. 10%) y su
eliminacin por derivatizacin

componentes con ancho de banda

pequeo frente a otro componente (fondo o
dispersin) con ancho de banda mucho mayor.

160 nm NBW
1A

40 nm NBW
1A

-NBW
A

40 nm NBW
0.01A

supresin de matriz
mayor sensibilidad
Anlisis de trazas