OBTENCION DEL MATERIAL DE

SIEMBRA. BIORREACTORES

Saccharomyces cerevisiae

cido lctico

Lactobacillus delbrueckii

Lactobacillus helveticus

Lactobacillus casei

Bifidobacterium longum

Acetobacter aceti

Aspergillus nigeer

Propionibacterium shermanii

Corynebacterium glaucum

Pseudomonas

Utilizacin de microorganismos en la industria

A excepcin de algunos productos de la industria alimentaria, donde se usan cepas silvestres, en la

mayora de casos, es necesario buscar microorganismos y despus mejorarlos. Esto se realiza en 3 etapas
: prospeccin , seleccin y mejora.
Caractersticas generales.
Una cepa econmicamente rentable deber cumplir lo siguiente:
1.-Tiene que estar disponible en cultivo puro libre de otros microorganismos.
2.-Tiene que ser capaz de producir fcilmente clulas vegetativas.
3.-Tiene que crecer vigorosamente en el fermentador, es difcil que los microorganismos crezcan en
grandes volmenes de sustrato.
4.-Tiene que formar productos fcilmente recuperables en ausencia de productos colaterales txicos.
5.- Tiene que producir la sustancia en corto tiempo.
6.- Es mejor si crece a pH elevados o a temperaturas elevadas esto lo proteger.
7.- Que se pueda conservar.
8.- Geneticamente estable pero mejorable mediante agentes mutagnicos.
Aislamiento de Cepas
De la naturaleza de los suelos, lodos, lagos y ros . Al buscar se encuentran cepas salvajes, de las cuales
unas pueden tener inters y otras no. Se les reconocer segn formen halos o cambien el color del medio
. Se aslan en agares medios slidos. Se estudia luego su productividad en medios lquidos en las
condiciones que habr en el fermentador para determinar la cepa que producir ms , y se estudiar la
forma de separar el producto.
Conservacin de cepas
El problema de trabajar con microorganismos es su corto tiempo de vida, ya que para poder trabajar con
ellos son necesarias sucesivas generaciones del organismo que se mantengan idnticas entre s. La
conservacin de cepas de produccin a lo largo del tiempo es un requerimiento bsico para la
fermentacin industrial. El objetivo es:
-La supervivencia del microorganismo y que ste mantenga su capacidad de produccin despus de la
conservacin.

Tipos:
1.- Sub-cultivos:
Los microorganismos se mantienen como cultivo por picadura en agar o en un cultivo lquido en nevera.
Inconvenientes: costo alto.
Riesgo de contaminacin y mutacin .
Las mutaciones se pueden realizar en 8 -16 semanas o un ao. Incluso pueden morir todas las clulas al
haber tardado en hacer un nuevo repique.
2.-Esporulacin:
Slo se puede utilizar en microorganismos esporulante. Slo es necesario inducir la esporulacin. Las
esporas se almacenan en un medio mineral estril y seco, para que no germinen. Esto permite mantener
los microorganismos dcadas . Los microorganismos que producen esporas son fciles de conservar.
3.- Almacenamiento por congelacin3:
Un descenso de la temperatura de 10C supone un descenso de la velocidad de crecimiento del 50% . A
temperaturas de ultracongelacin el metabolismo ser totalmente frenado. -18C, -80C,196C(congelacin en N lquido duran 15 aos).
La congelacin ha de ser rpida pero gradual, y se debe considerar la siguiente:
-Los microorganismos deben estar en un medio rico y lquido , donde crecern en la fase exponencial
hasta llegar a su N max, justo antes de llegar a la fase estacionaria.
-La concentracin de microorganismos ha de ser elevada.
-Adicin de crioprotectores para evitar la formacin de cristales dentro de la clula se usan glicoles a 520%.
-Congelar rpidamente.
-Hacer control de calidad: a los 15 das, una vez que se haya estabilizado la congelacin , se cultivar una
muestra. El nmero de microorganismos viables no ha de ser menor de 70-80% del nmero de viables
original.
4.- Liofilizacin:
Es el mejor mtodo de conservacin. Es ms barato y seguro , no es necesario la conservacin a bajas
temperaturas. Primero se congela y despus se pasa al vaco provocando la sublimaicin. Como se
crioprotectores se usan azcares o leche ,glutamato de Na , peptonas. Se congela a -50C o menos y se
elimina el agua al crear vaco en la muestra. Una vez deshidratado se envasa y sella. La temperatura
ptima de conservacin es de 0 a 18 C y en la oscuridad.
1 gr = 5000x106

Difusores de aire

Biorreactor tipo Tanque agitado

Biorreactor con agitador de turbina

con palas

Biorreactor de tanque agitado

Es el ms utilizado. La obtencin del producto final del metabolismo en el fermentador de

produccin viene a ser la principal y frecuentemente la etapa ms larga de todo el ciclo
tecnolgico de crecimiento. Una de las principales exigencias, la cual se da en el fermentador
es la conservacin de la esterilidad con un intensiva aireacin del medio nutritivo durante
todo el periodo de cultivo. El biorreactor es un recipiente hermtico cilndrico con tapa
esfrica y fondo, donde se lleva a cabo una transformacin por el biocatalizador. El volumen
del fermentador puede ser de 0,01 hasta 100 metros cbicos. La altura del fermentador es
de 2 a 2,5 veces mayor que su dimetro. El material de construccin es acero inoxidable. El
biorreactor est suministrado de instrumentos que controlan la temperatura, agitacin,
aireacin y pH del medio, posee un sistema para llenado del medio nutritivo, agua, vapor,
etc. El calor que desprenden los microorganismos en el periodo de crecimiento se extrae
con ayuda de intercambiadores de calor. Estos son internos: espirales, tubulares, serpentines
. Con ayuda de los serpentines se esterilizan tambin los fermentadores, dejando pasar vapor
en lugar de agua fra. Para estabilizar una temperatura durante el proceso de cultivo
tecnolgicamente lo ms apropiado es utilizar materiales aislantes de calor. La introduccin
en el fermentador de serpentines adicionales dificultan su esterilizacin y lavado. El cultivo
industrial se realiza en condiciones estriles . Antes de llenar el fermentador con el medio de
cultivo ste es lavado, se prueba su hermeticidad y se esteriliza. Al mismo tiempo se
esteriliza todo el sistema de tuberas con vapor. Al biorreactor lleno de medio nutritivo estril
( su volumen debe ser no mayor del 70% del volumen total del biorreactor) , se agrega el
material de siembra.

Previamente los valores de la temperatura y pH del medio de cultivo deben alcanzar los
valores ptimos para el crecimiento del microorganismo productor. La etapa de cultivo
industrial para la mayora de microorganismos es de 48 a 72 horas. Para cultivos bacteriales,
la duracin de esta etapa no es ms de 24 horas, la duracin de cultivos de algunos
actinomicetos y hongos es de 12 das. En el transcurso de todo este proceso el cultivo en
crecimiento sumergido es necesario suministrarle oxgeno. Los microorganismos pueden
utilizar slo oxgeno disuelto. La saturacin con oxgeno del medio de cultivo se realiza
mediante aireacin que garantiza el contacto entre las fases lquida y de gases. El ms
difundido en la industria microbiolgica es la aireacin a travs de un difusor.
Para que el cultivo industrial se desarrolle con xito, gran significado tiene el control de la
formacin de espuma. Todos los fermentadores estn suministrados con instalaciones para
la extraccin de gases de la espuma y el control de la altura de la espuma en el biorreactor.
Para la disminucin de la formacin de espuma se utiliza medios de disminucin de espuma
qumicos ( grasas vegetales y animales) y mecnicos ( ciclones, paletas giratorias en la parte
superior del fermentador). El uso de agentes antiespuma no altera el crecimiento aerbico
de microorganismos.
La calidad de los quita espumas suministrados y la periodicidad de suministro al fermentador
debe ser controlado . La adicin en exceso del quitaespuma o el exceso de suministro al final
de la etapa de cultivo puede volver complejo el proceso de extraccin del producto final y
llegar al mnimo de extraccin.
En el proceso de cultivo se da un control constante del estado del cultivo y la acumulacin de
los productos de biosntesis, se fijan el uso de los principales componentes del medio ( C, N,
P) se controla el pH de lquido de cultivo.

Biorreactor tipo torre

Biorreactor Air - lift

Biorreactor Airlift

El diseo bsico de un biorreactor airlift consta de un recipiente cilndrico que tiene

generalmente una relacin de altura a dimetro entre tres y diez, est equipado con un
difusor de aire en el fondo y tiene partes que forman una zona de flujo ascendente y una
zona de flujo descendente, conectadas en sus parte superior e inferior. En este tipo de
biorreactor al introducir aire en el fondo de la zona de flujo ascendente, el lquido es
arrastrado por el movimiento ascendente de aire. En la parte superior, el aire se separa del
lquido que pasa a la zona de flujo descendente. En consecuencia, la densidad de la
dispersin gas-lquido en la zona de flujo descendente es mayor que la densidad en la zona
de flujo ascendente. Esta diferencia de densidades es la que ocasiona el movimiento
circulatorio del lquido.
En el biorreactor airlift, dependiendo de la velocidad de flujo del gas, se pueden distnguir dos
tipos de regmenes de flujo : homogneo y heterogneo . El flujo homogneo se caracteriza
por tener un tamao casi uniforme de burbujas, adems, la unin de burbujas para formar
una ms grande, que es el fenmeno conocido como coalescencia, prcticamente no se
presenta y el perfil de la fraccin de gas retenido es uniforme, especialmente en la direccin
radial. Este flujo ocurre slo a bajas velocidades superficiales del gas y cuando el difusor
tiene orificios uniformemente distribuidos. En este caso todas las burbujas se elevan con la
misma velocidad de ascenso y el mezclado se origina del lquido arrastrado en la estela de
cada burbuja. No se presentan flujos de lquido circulatorios y la fase gaseosa se puede
considerar como de flujo pistn.
El flujo heterogneo es aquel que ocurre con un difusor de gas cuyos orificios no estn
uniformemente distribuidos. Sin embargo, incluso habiendo una distribucin uniforme, al
aumentar la velocidad del gas, empieza a ocurrir una distribucin desigual de las burbujas de
manera aleatoria ocasionando flujos circulatorios de lquido.

Biorreactores para substratos slidos

Biorreactor tambor horizontal

Biorreactor columna charola

Biorreactor de lecho fluidizado