Interacciones entre el

proceso inflamatorio y
nutricin de hierro en
sujetos obesos y/o
diabticos tipo 2
Mnica Andrews, Miguel Arredondo.
Laboratorio de Micronutrientes. INTA. Universidad de Chile
Financiamiento: Beca Ciencias Bsicas SOCHED 2010
FONDECYT: 1085173
Factores Ambientales
Factores No Modificables
Factores Genticos
pO
2
Hipoxia
Inflamacin
Trayhurn et al, 2004. Br J Nutr. 92:347-355
Hintze KJ et al, 2010. Biol Trace Elemn Res.
INFLAMACIN
HIPOXIA
NF-kB
TNF-
IL-6
Aumento protenas
fase aguda
Resistencia perifrica a
la insulina
Disminucin
adiponectina
Resistencia a la insulina
heptica
Redistribucin del hierro corporal
1) Trayhurn et al, 2004. Br J Nutr. 92:347-355
2) Hintze KJ et al, 2010. Biol Trace Elemn Res.
3) Aso Y et al, 2010.Diabetes Res Clin Pract. 90(3):250-5
OBESIDAD
FERRITINA
Sun et al, 2008. Endocrinol Metab.
Elevados niveles de ferritina se asociaron a mayor riesgo de desarrollo de DMT2 en
poblacin China de mediana edad, independiente de la presencia de obesidad.

Fumeron et al, 2006. Diabetes Care.
Niveles de ferritina srica fue un factor predictivo independiente del incremento de los
niveles de insulina plasmtica en 3 aos en poblacin francesa.

Ford et al, 1999. Diabetes Care.
Datos NHANES reportaron una asociacin positiva entre IMC y los niveles de ferritina
srica en hombres y mujeres.
HEPCIDINA
Fernndez-Real et al, 2009. J Clin Endocrinol Metab.
Report niveles aumentados de hepcidina y prohepcidina en sujetos
con intolerancia a la glucosa.

Jiang et al. 2011. Diabetes Research.
Encontr altos niveles de hepcidina en pacientes DMT2, los que se
correlacionaban positivamente con los niveles de ferritina e IL-6.

HEPCIDINA
Alteracin de la movilizacin del Hierro:
Enterocito
Macrfagos
Disminucin de la captacin del Hierro
Estado Proinflamatorio Crnico
Anemia de la
Inflamacin
Ferritina
Saturacin de transferrina
Hipoferremia
Sobrecarga de hierro en
macrfagos
Nemeth et al, 2006. Annu Rev Nutr. 26:323-342
Ganz et al, 2009 Semin Hematol. 46(4):387-393
IL-6
TNF-
IL-1
Hep
Hep
Hep
Hep
Ft
Ft
Ft
Ft
Ferroportina
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+

Fe
2+

Fe
2+

Fe
2+

Fe
2+

Fe
2+
Fe
2+

Fe
Ferritina
Toledano et al. 2009 Am J Emerg Med. 27:761-764
Zafn et al, 2010. Obes rev. 11(4):322-328
Nemeth et al, 2006. Annu Rev Nutr. 26:323-342
IL-1
Hep
IL-6
IL-6
IL-6
TNF- TNF-
Entonces
pO
2
pO
2
pO
2
pO
2
pO
2
pO
2
pO
2
pO
2
HIF-1
TNF-
MIF
IL-6
Angiogenesis
IRS Tir
Ser
Glut-4
Fos tir
GK
Hep
Ft
Hepcidina
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+
Fe
2+
ROS
Glucosa
Mfn2
Mfn2
ROS
pO
2
TNF-
IL-6
NF-kB
Caracterizar el metabolismo del hierro, del estado
proinflamatorio y de la actividad mitocondrial en Clulas
Mononucleares Perifricas (CMPs) de sujetos obesos con
y sin diabetes tipo 2 con inflamacin crnica leve.
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVO ESPECFICOS
Caracterizar a sujetos obesos y diabticos tipo 2 con
parmetros bioqumicos (glicemia, perfil lipdico, PCR) y de
nutricin de hierro (hierro srico, ferritina srica, receptor de
transferrina).
Determinar el contenido de hierro intracelular en CMPs de
sujetos obesos con y sin diabetes tipo 2 desafiadas con
distintas concentraciones de Fe y/o glucosa.
Medir la abundancia relativa de los RNAm de los genes de HIF-1,
Hepcidina, NFkB, Mitofusina 2, IL-6 y TNF de CMPs de sujetos
obesos con y sin diabetes tipo 2.
MATERIALES
Y
MTODOS
Metodologa: Estudio Clnico
30 Controles (CN)
30 Obesos (OB)
30 Obesos diabticos
(DMOB)
Tamao muestral:
Frecuencia de obesidad y diabetes
Poder de 80%
= 0.05
Criterios de Inclusin
Individuos de sexo masculino, > 40 aos, sin ingesta de suplementos de hierro.
IMC < 28 kg/mt
2
Circunferencia Abdominal < 100 cm,
Glicemias en ayunas < 100 mg/dl
IMC mayor a 30 kg/mt
2
Circunferencia Abdominal > 102 cm
Obesos: glicemia en ayunas < a 126 mg/dl
Criterios de exclusin
Sujetos vegetarianos, bajo tratamiento farmacolgico para
disminuir de peso, tratamiento con IECAs o bloqueadores de
los canales de calcio o aspirina, poseer ms de 3 criterios de
sndrome metablico segn ATP III, y PCRhs > 3 mg/l
Diabticos: Uso de insulina
Diabticos y Obesos: Uso de IECAs, bloqueadores de los
canales de calcio o aspirina. Poseer antecedentes de IAM,
angina pectoris o by pass coronario.
En ambos grupos ser vegetarianos
30 ml de sangre
Parmetros Bioqumicos
y nutricin de hierro
(12 ml )
Cultivos de
CMPs
(18 ml)
Glicemia
Insulina
Perfil lipdico:
VLDL, LDL,
HDL, TG
PCR Fe srico
Ft srica
RTf
Actividad Hem oxigenasa
RNA
Contenido de hierro
Gradiente de Ficoll
Medio RPMI por 20 horas
Hierro
5 M
Hierro
40 M
Glu 20 mM +
Fe 5 M
Determinacin
de Fe
RNA
Obtencin de CMPs
Resultados
Controles
n= 30
Obesos
n= 30
Diabticos
n= 30
P
Edad (aos) 51.6 8.7 52.7 8.1 54.7 5.9 NS
Peso (Kg) 72.7 5.7 99.1 17.3 ** 92.3 6.7 ** p< 0.0001
IMC (Kg/mt
2
) 25.8 1.6 34.2 4.5 ** 31.9 1.8 ** p< 0.01
Cir. Abdominal (cm) 91.6 4.3 110.9 11.7** 106.6 6.9** p< 0.0001
Presin sistlica (mmHg) 128.4 16.6 132.8 17.2 148.1 27.5 * p< 0.05
Presin diastlica (mmHg) 84.3 15.9 83.0 8.5 84.5 10.2 NS
Glicemia basal (mg/dl) 85.2 9.8 99.9 13.9 183.4 85.6 ** p< 0.01
Glicemia pp (mg/dl) 87.7 26.9 129.4 65.1 p<0.01
Insulina basal (ng/dl) 6.5 2.9 20.2 30.4** 20.8 10.9** p< 0.01
Colesterol Total (mg/dl) 183.5 34.6 189.9 35.7 198.3 51.8 NS
HDL (mg/dl) 33.9 9.7 30.9 5.9 31.1 9.2 NS
LDL (mg/dl) 116.7 24.8 120.7 23.9 124.9 54.8 NS
Triglicridos (mg/dl)* 164.7 (59.9-
356.0)
191.1
(55.9-856.7)
243.6
(86.7-968.9)
NS
Tabla N1
Caractersticas generales de la poblacin estudiada.
ANOVA de una va * p< 0.05; ** p<0.01
Objetivo 1: Caracterizar a sujetos obesos y diabticos tipo 2 con parmetros bioqumicos (glicemia,
perfil lipdico, PCR) y de nutricin de hierro (hierro srico, ferritina srica, receptor de transferrina).
*
Datos expresados como promedio geomtrico, entre parntesis los rangos
Controles
n= 30
Obesos
N= 30
Diabticos
n= 30
P
Hemoglobina (g/dl) 16.3 1.0 16.1 1.0 15.0 1.8 NS
Hematocrito (%) 45.7 2.3 46.6 2.5 41.8 6.6 NS
Ferritina srica (g/L)
1
42.8
(10.7-102.2)
67.5
(35.6-111.7)
95.5
(45.8-150.3)**
p<0.01
Fe total (g/dl) 99.7.0 26.7 108.0 25.0 80.2 31.1 NS
TIBC (g/dl) 327.4 42.1 332.5 42.3 343.9 54.9 NS
Saturacin transferrina (%) 30.4 8.0 31.9 6.8 23.3 7.9 * p<0.05
Receptor Transferrina (g/dl) 2.7
(0.5-5.4)
3.1
(2.8-4.5)
4.1
(2.2-5.9)
NS
TBI (mg/Kg) 4.0 1.2 7.4 1.0** 7.4 0.5** p<0.01
PCR hs (g/dl)
1
1.1
( 0.0 6.1)
3.0
(0.0-11.8)
4.1
(2.2-11.9) **
p<0.01
Tabla N2
Caracterizacin de la nutricin de hierro y del estado pro-inflamatorio de
controles, DMOB y obesos.
ANOVA de una va * p<0.05; ** p<0.01.
1
Datos expresados como promedio geomtrico, entre parntesis los rangos
Figura N 1
Concentracin de hierro intracelular de CMPs de controles, pacientes DMT2 y obesos, expuestas
a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa.
A) Controles; B) Pacientes obesos; C) Pacientes DMOB.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05. **P<0.01)
Objetivo 2: Determinar el contenido de hierro intracelular en CMPs de sujetos obesos con y sin diabetes
tipo 2 desafiadas con distintas concentraciones de Fe y/o glucosa.
Figura N 2: Expresin del RNAm de HIF en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos basales;
H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 3: Expresin del RNAm de Hepcidina en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos
basales; H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 4: Expresin del RNAm de NF-kB en CMPs
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos basales;
H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 5: Expresin del RNAm de IL-6 en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos basales;
H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 6: Expresin del RNAm de TNF- en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos
basales; H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 7: Expresin del RNAm de Mfn-2 en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos
basales; H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 8: Expresin del RNAm de TLR-2 en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos basales;
H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 9: Expresin del RNAm de TLR-4 en CMPs.
A) controles; B) Obesos; C) Diabticos expuestas a distintas concentraciones de hierro y/o glucosa;
D) condiciones basales; E) CMPs con 40 M Fe; F) CMPs con 20 mM Gluc; G) Db Anmicos basales;
H) Db Anmicos 40 M Fe; I) Db Anmicos 20 mM Gluc.
(ANOVA de una va, *denotan diferencias significativas p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0001);
T test para diferencias entre DM anmicos y no anmicos
A B C
D E F
G H I
Figura N 10
Correlacin entre los niveles plasmticos de PCR (g/dl) y ferritina (g/L)
A) diabticos, B) Obesos, C) Controles
Figura N 11
Correlacin entre IMC (Kg/mt
2
) y niveles plasmticos de ferritina (g/L)
A) diabticos, B) Obesos, C) Controles
Figura N 12
Correlacin entre HOMA y ferritina (g/L) en sujetos obesos
Tabla N3
Correlacin entre IMC, PCR y Ferritina y la abundancia relativa de los RNAm de
Hepcidina, Nf-Kb, IL-6 y Mfn-2 de sujetos DMT2
Tabla N4
Correlacin entre IMC, PCR y Ferritina y la abundancia relativa de los RNAm de
Hepcidina, Nf-Kb, IL-6 y Mfn-2 de sujetos Obesos
TLR-2
TLR-4
IL-6
IL-1
TNF-
Nf-Kb
Diabetes
H de C
AGS
ROS
IL-6
TNF-
Hepcidina
Fe
Fe
Fe
Fe
Fe
NFkB
ROS
P
Fe
Fe
Mfn-2
Mfn-2
Mfn-2
Mfn-2
ROS AGEs
Inflamacin
Fosforilacin
Oxidativa
1. En los pacientes diabticos obesos se observ un perfil
inflamatorio dado por PCRus mayor que en los obesos y en
controles. Esto fue reafirmado por la mayor expresin de
genes asociados a la inflamacin.
2. Tanto el estmulo con Fe como con glucosa produjo una
mayor expresin de Nf-Kb y de TLR-2 en diabticos obesos
y en obesos, lo que indujo a una mayor abundancia que
genes efectores como IL-6, TNF- y Hepcidina.
3. Tanto en diabticos obesos como en obesos se encontr
una disminuida expresin de Mfn-2, lo que podra sugerir
alteraciones en la actividad mitocondrial de estos sujetos
Conclusiones
GRACIAS