PRODUCCIN DE GLUCOSA ISOMERASA INMOVILIZADA Y GLUCOSA OXIDASA

PRODUCCIN DE GLUCOSA ISOMERASA

INMOVILIZADA Y GLUCOSA OXIDASA

AUTORES:
CHRISTIAN ARIAS MUOZ JACKELINE VALENCIA GIL

Enzimas

Las enzimas son biocatalizadores especficos que aceleran, retardan o inhiben una reaccin.
Gracias a los avances en biotecnologa, el uso de las enzimas en la industria aumentan cada vez mas. Sin embargo no son productoras de enzimas. muchas las empresas

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Enzimas microbianas

Enzimas extracelulares

Enzimas secretadas al medio.

Enzimas intracelulares Enzimas que para ser secretadas al medio es necesario realizar un rompimiento o lisis celular.

Solubles Inmovilizadas

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Glucosa Isomerasa Inmovilizada

Isomerasas: Enzimas que isomerizacin. catalizan diversos tipos de

Inmovilizacin: Tcnica en la que se une la enzima a un soporte por mtodos qumicos. Aumenta la estabilidad.

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Estructura De La Glucosa Isomerasa

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Glucosa Isomerasa

Es la enzima comercial intracelular ms utilizada en la industria alimentara para convertir la glucosa en fructosa.

A partir del almidn de maz, se produce jarabe de glucosa y posteriormente mediante la glucosa isomerasa se produce fructosa.

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Isomerizacin De La Glucosa

O
OH HO OH isomerasa OH CH2OH

CH2OH O

glucosa

HO OH OH CH2OH

D - GLUCOSA

D - FRUCTOSA

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Sustrato - Glucosa
Azcar monosacrido, la cual se forma en la hidrlisis de numerosos hidratos de carbono, como la sacarosa, maltosa, celulosa, almidn y glucgenos.

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Especies Productoras
Para la produccin de glucosa isomerasa se conoce un gran nmero de bacterias y algunas levaduras.

Bacillus coagulans

Streptomyces rubiginosus
Streptomyces phaeohromogenes Strepmyces olivaceus Streptomyces lividans Athrobacter sp Actinoplanes missouriensis

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Bacillus coagulans

Gram positivas

Endosporas

Medio: Caldo Nutritivo

Aerobio facultativo

Termfilos y acidfilos

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Streptomyces rubiginosus
Gram positiva Medio crecimiento Glucose 4.0 g Yeast extract 4.0 g Malt extract 10.0 g Distilled water 1000. ml Adjust pH to 7.2 with KOH Mesfilo

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Proceso de Obtencin de la Enzima Isomerasa Inmovilizada

Actividad y concentracin

CULTIVO MICROBIANO

ROMPIMIENTO DEL MICROORGANISMO

SOLUBILIZACIN

Actividad y concentracin Actividad y concentracin

PURIFICACIN

DILISIS

ENZIMA

INMOVILIZACIN

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Cultimo microbiano

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Rompimiento Bacteriano y Obtencin del Extracto Crudo

CULTIVO MICROBIANO

LISOZIMA

SONICACIN

CENTRIFUGACIN

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Contenido de Protena en el Extracto

Ecuacin de Schleif - Wensink

[ Protena ] (mg/mL) = (1.55 A280 0.76 A 260) x Factor dilucin

Ecuacin que se basa en la longitud de onda a la cual absorben las protenas.

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Inmovilizacin de la Enzima

Unin Unin Covalente Absorcin

Captura
Dentro de un polmetro Entrecruzamiento Microencapsulacion Membranas semipermeables

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Unin
Unin covalente a soportes

Consiste en por lo menos dos etapas: la activacin del soporte y la reaccin de acoplamiento especifica.

Adsorcin

Se aprovechan un amplio rango de fuerzas ligantes (interacciones electrostticas o hidrofobicas).

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Captura
Dentro de un polmero

Las enzimas se pueden inmovilizar dentro de una red de polmetro mediante adicin de l enzima a los monmeros antes de la formacin de gel.

Entrecruzamiento las enzimas se pueden inmovilizar entrecruzando sus molculas entre si para formar partculas.

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Inmovilizacin

En z

Enz

Enz

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Jarabe Rico En Fructosa

Constituye el principal enfoque a nivel industrial de la enzima

Los jarabes de alta fructosa han encontrado una amplia utilizacin en el mercado de edulcorantes.

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Proceso De Obtencin De Jarabe De Fructosa

PASTA DE ALMIDN

ALMIDN GELATINIZADO

JARABE SACARIFICADO

JARABE RICO FRUCTOSA

JARABE DE GLUCOSA

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Glucosa Oxidasa

Oxidasa: Esta enzima es una protena globular, que contiene dos molculas de FAD, tiene cerca de 0.3 gramos de agua asociada con cada gramo de peso seco de protena.

GLUCOSA + O2

ACIDO GLUCONICO + PEROXIDO DE HIDROGENO

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Proceso De Reaccin De La Glucosa Oxidasa

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Especies Productoras
Para la produccin de glucosa oxidasa en la industria, se utilizan algunos hongos

Aspergillus niger

Penicillum chrysogenum

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Condiciones De Crecimiento De Aspergillus niger

pH ptimo: 5.5 Temperaturas: 24 C Medio de crecimiento: Papa dextrosa Suministro elevado de oxigeno. Medio:
Trozos de papa -------------------------------- 300.00 g Glucosa ------------------------------------------ 20.0 g Agua destilada---------------------------------1.0 l

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Condiciones De Crecimiento De Penicillum chrysogenum

pH ptimo: 7.2 Temperaturas: 24 C
Medio de crecimiento:

Extracto de malta -------------------------------- 20.00 g Glucosa --------------------------------------------- 20.0 g Peptona---------------------------------------------- 1.0 g Agua destilada------------------------------------- 1.0 l

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Proceso De Obtencin De la enzima Oxidasa

Actividad y concentracin

CULTIVO MICROBIANO

ROMPIMIENTO DEL MICROORGANISMO

SOLUBILIZACIN

Actividad y concentracin

PURIFICACIN

DILISIS

ENZIMA

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Rompimiento Fngico y Obtencin del Extracto Crudo

CULTIVO MICROBIANO

DETERGENTE

CENTRIFUGACIN

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Centrifugacin
Es el mtodo ms comn de separacin, el tubo de centrfuga se llena con el extracto crudo. Tras la centrifugacin se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene restos celulares y un sobrenadante con el contenido enzimtico y minerales.

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Determinacin Actividad Enzimtica

Medidas espectrofotometras del cambio de absorbancia del azul de metileno

Mezcla de reaccin Azul de metileno 0, 25 mM (20 uL) Enzimas catalasa (10 uL) Glucosa 2 mM (50 uL) Extracto enzimtico (200 uL) Buffer fosfato pH 7 (1720 uL)

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Cambio de Estado del Azul de Metileno

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Absorbancia del Azul de Metileno

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Determinacin Actividad Enzimtica

mol =

A = Ainicial - Afinal * Vensayo

*L

= 0.0708 cm/ mol

La actividad enzimtica para el extracto crudo esta dada por:

Actividad Enzimtica = mol de azul de metileno Tiempo (minutos)

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Electroforesis Poliacrilamida
M 270 250 230 170 150 120
Gel de electroforesis en condiciones no desnaturalizante

1 2

3 4

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Purificacin

Ultrafiltracin:

Sistema de purificacin de protenas utilizando diferencias existentes entre los pesos moleculares de la protena deseada y de las no deseadas.

Hay dos tipos de membrana de ultrafiltracin Ultrafiltro microporoso Ultrafiltro de difusin

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cido Glucnico

Es sumamente soluble en agua y se comercializa en forma de soluciones acuosas al 50%.

Se utiliza en la industria Lctea para retardar la sedimentacin en leche. Su mayor uso es en forma de sales. Gluconato de calcio y hierro son usados para tratar pacientes anmicos o con deficiencias de calcio.

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GRACIAS POR SU ATENCIN

SALIR INICIO

ROMPIMIENTO BACTERIANO Y OBTENCION DEL EXTRACTO CRUDO

200 mL Cultivo Centrifugacin 2000 g, 15 min Sedimento resuspendido 5 mL buffer fosfato pH 7

Sonicacin
Frecuencia de Vibracin 20% Amplitud de vibracin 7

lisozima (37 C, 15 horas)

Conteo celular

Tiempo 10 minutos

Conteo celular

Alicuotas 1 ml a 4C