Cintica enzimtica

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son catalizadas por las enzimas. El estudio de la cintica y de la dinmica qumica de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo cataltico, su papel en el metabolismo , etc.

OBJETIVO
MODELAMIENTO DE LA CINTICA DE HIDRLISIS ENZIMTICA DE PROTENAS DEL PLASMA BOVINO.

Resumen del articulo:

Se utiliz un modelo cintico para estudiar la velocidad de reaccin en

la hidrlisis de protenas de plasma de bovino con alcalasa 2,4 L en un reactor batch. Se estudi la influencia de variables como la concentracin inicial de sustrato y enzima sobre el grado de hidrlisis y se determinaron los parmetros cinticos de la ecuacin de velocidad, analizando su relacin con las variables de trabajo. Se ajust un modelo cintico de orden cero y desactivacin enzimtica por

sustrato, de segundo orden, as como la relacin directa entre la

fraccin enzima- -sustrato y la tasa de formacin de productos de hidrlisis.

Metodo de analisis

El mtodo empleado para la determinacin del grado de hidrlisis Consiste en mantener constante el pH del medio de reaccin con adicin de una solucin bsica (hidrxido de sodio 0,1 N), pues a medida que la hidrlisis avanza en medio alcalino, el grupo carboxilo terminal se disocia por completo y los protones formados se reparten de acuerdo con el equilibrio de protonacin de los grupos -amino liberados. La base agregada para mantener

constante el pH neutraliza nicamente los protones que son

sustituidos por el catin de la base (Guadix, 2002).

Condiciones del experimento

El producto inicial para el experimento tenia un contenido proteico de 6,5 %. A este se le realizaron controles microbiolgicos de mohos y levaduras, coliformes totales y mesfilos, en el momento de la recepcin. Para la hidrlisis de protenas, se utiliz alcalasa 2,4 L grado alimenticio (actividad especfica de 2,45 0,07 AU/g), cuya actividad se verific conel mtodo de Takami, Akiba y Horikoshi (1989) modificado;es una enzima proteoltica producida por fermentacin sumergida de una cepa seleccionada de Bacillus licheniformis. El componente principal de la enzima, subtilisina A (subtilisina Carlsberg), es una endoproteasa.

En la hidrlisis de un enlace amida a pH alcalino, se siguen las siguientes etapas (Guadix, 2002):

El grupo carboxilo terminal se disocia por completo. La base agregada neutraliza los protones:

Luego este consumo de base puede relacionarse con el GH segn la ecuacin 1. Donde B = volumen consumido de base (en litros), Mp = masa de la protena (en kg), NB = normalidad de la base (eqv/L). En 1b, es el grado de disociacin de los grupos NH2 (grupos aminos liberados en la reaccin).

En la tabla 1, se muestran los valores del grado de disociacin de protenas en funcin del pH y la temperatura de reaccin

Se propuso un modelo matemtico basado en el mecanismo de accin enzimtica, que establece una relacin exponencial entre la velocidad de la reaccin, la concentracin inicial de sustrato (S0) y de enzima (e0) con dos parmetros de ajuste a y b, la cual resuelve problemas de ajuste de datos de curvas no lineales.

Modelo cintico

El GH de la reaccin aumenta cuando se trabaja a concentraciones iniciales ms altas de enzima (figura 1), lo cual es un comportamiento tpico en cintica enzimtica de protenas , debido a que la reaccin de hidrlisis est ligada a la formacin del complejo enzima-sustrato, que a su vez depende de la concentracin de la enzima activa.

En la hidrlisis enzimtica de protenas, cuando se tienen curvas de declinacin exponencial de la dGH/dt en funcin del tiempo, se puede ajustar un modelo de la forma de la ecuacin 2 para el estudio cintico de la reaccin, tal como se muestra en la figura 3, donde se pone en evidencia la disminucin exponencial de la velocidad de la reaccin (d(GH)/dt ) con el GH.

CONCLUSIN
Se evalu y valid un modelo matemtico que puede usarse para simular la reaccin de hidrlisis enzimtica de plasma bovino con alcalasa 2,4L.
Las condiciones ptimas para alcalasa 2,4 L son temperaturas entre 55 C y 70 C,dependiendo del tipo de sustrato, y valores de pH entre 6,5 y 8,5. Debido al uso potencial de plasma de bovino y otras proteinas de la sangre,existe hoy en dia gran interes de modelar el comportamiento de sistemas que involucran reacciones de hidrolisis enzimatica.

BIBLIOGRAFA
Revista EIA, ISSN 1794-1237 Nmero 17, p. 71-84. Julio 2012 Escuela de Ingeniera de Antioquia, Medelln (Colombia) Omar Alfredo Figueroa* Jos dgar Zapata** Gail Albeiro Gutirrez***