1

CALIBRACION
EN ANALISIS INSTRUMENTAL
CURVA DE CALI BRACI ON:
GRAFICA DE SEAL ANALI TI CA versus CANTI DAD DE ANALI TO
(USUALMENTE CONCENTRACION)

PROCEDI MI ENTO GENERAL:

SE PREPARA UNA SERIE DE MUESTRAS (n>3) EN LAS CUALES SE CONOCE
LA CONCENTRACION DEL ANALITO (MUESTRAS ESTANDARES)
SE MIDE EN EL INSTRUMENTO LA PROPIEDAD DE INTERES (SEAL
ANALITICA) PARA CADA MUESTRA ESTANDAR BAJO LAS MISMAS
CONDICIONES QUE SE UTILIZARAN EN LAS MUESTRAS DESCONOCIDAS
SE GRAFICA LA CURVA DE CALIBRACION, SIEMPRE CON LA RESPUESTA
INSTRUMENTAL SOBRE EL EJE VERTICAL (y) Y LAS CONCENTRACIONES
ESTANDARES SOBRE EL HORIZONTAL (x)

2
CURVAS DE CALIBRACION
I MPLEMENTACI ON
LA CONCENTRACION DE LA MUESTRA
DESCONOCIDAS SE OBTIENE POR
INTERPOLACION

EN GENERAL, ES ESENCIAL QUE LOS ESTANDARES
CUBRAN EL RANGO COMPLETO DE CONCENTRACION
REQUERIDO POR LAS MUESTRAS

SIEMPRE SE INCLUYE UN BLANCO
(UN BLANCO PROCEDIMENTAL)


3
PUNTOS DE CALIBRACION
MUESTRA DESCONOCIDA
CALIBRACION EN ANALISIS INSTRUMENTAL
4
CALIBRACION

TRES ASUNCIONES BASICAS
LOS ERRORES ALEATORIOS EN EL EXPERIMENTO DE
CALIBRACION OCURREN SOLAMENTE EN LOS VALORES y
(RECORDAR QUE LA CURVA DE CALIBRACION SE CONSTRUYE CON LA
RESPUESTA ANALITICA SOBRE LAS y Y LAS CONCENTRACIONES
ESTANDARES SOBRE LAS x)

LA MAGNITUD DEL ERROR ALEATORIO EN y ES
INDEPENDIENTE DE LA CONCENTRACION DEL ANALITO
(HOMOCEDASTI CI DAD)

EL ERROR ALEATORIO EN y SIGUE UNA DISTRI BUCI ON
NORMAL


5
PREGUNTAS ESTADISTICAS IMPORTANTES
ACERCA DE LAS CURVAS DE CALIBRACION
LA CURVA DE CALIBRACION ES LINEAL? SI NO LO ES, CUAL ES LA FORMA
(ECUACION) DE LA CURVA?

TENIENDO EN CUENTA QUE CADA UNO DE LOS PUNTOS DE LA GRAFICA
ESTA SOMETIDO A ERROR ALEATORIO, CUAL ES LA MEJ OR LI NEA RECTA
(O CURVA) A TRAVES DE ESTOS PUNTOS?

ASUMIENDO QUE LA GRAFICA ES EN VERDAD LINEAL, CUALES SON LOS
ERRORES ALEATORIOS ESTIMADOS Y LOS LIMITES DE CONFIANZA DE LA
PENDIENTE Y EL INTERCEPTO DE LA LINEA RECTA?

CUANDO SE UTILIZA LA CURVA DE CALIBRACION EN UNA MUESTRA
DESCONOCIDA, CUAL ES EL ERROR ALEATORIO Y LOS LIMITES DE
CONFIANZA DE LA CONCENTRACION ENCONTRADA?

CUAL ES EL LI MI TE DE DETECCI ON DEL METODO? ES DECIR, CUAL ES LA
MINIMA CONCENTRACION DEL ANALITO QUE SE PUEDE DETECTAR CON UN
NIVEL PREDETERMINADO DE CONFIANZA?
6
EL BLANCO
LA MUESTRA EN BLANCO NO CONTI ENE ANALI TO (QUE
HAYA SI DO AADI DO DELI BERADAMENTE), PERO CONTIENE
LOS MISMOS REACTIVOS, SOLVENTES, ETC. QUE LAS OTRAS
MUESTRAS BAJO PRUEBA Y SE SOMETE A LA MISMA
SECUENCIA DE PROCEDIMIENTOS ANALITICOS QUE ESTAS

LA SEAL INSTRUMENTAL PROVENIENTE DEL BLANCO ES A
MENUDO DIFERENTE DE ZERO

AL IGUAL QUE TODAS LAS MUESTRAS ESTANDARES Y
DESCONOCIDAS, LA SEAL DEL BLANCO ESTA SOMETIDA A
ERROR ALEATORIO Y, EN GENERAL, NO TIENE SENTIDO
SUSTRAER EL VALOR DEL BLANCO DE LOS OTROS VALORES
ESTANDARES ANTES DE DIBUJAR LA CURVA DE CALIBRACION
7
EL COEFICIENTE DE CORRELACION MOMENTO-PRODUCTO
ES UNA MEDIDA DE LA ASOCIACION LINEAL ENTRE DOS VARIABLES
DADA UNA SERIE DE PAREJAS DE DATOS
(x
1
,y
1
), (x
2
,y
2
), (x
i
,y
i
), (x
n
,y
n
)
EL COEFICIENTE DE CORRELACION, r, ESTA DADO POR
yy xx
xy
S S
S
r =
DONDE

=
=
n
i
i i xy
y y x x S
1
) )( (
2
) (

= x x S
i xx
2
) (

= y y S
i yy
: LA MEDIA DE TODOS LOS VALORES DE x
: LA MEDIA DE TODOS LOS VALORES DE y
: EL CENTROI DE DE TODOS LOSPUNTOS

NUEVOS SIMBOLOS QUE SIMPLIFICAN
MUCHAS FORMULAS
NOTESE:
SUMA DE LOS CUADRADOS DE LAS DESVIACIONES
DE LOS DATOS CON RESPECTO A CADA MEDIA
y
( ) y x,
x
8
CALCULO DE r
EJ EMPLO. SE EXAMINA UNA SERIE DE SOLUCIONES ESTANDAR DE FLUORESCEINA EN UN
FLUORIMETRO, CON LOS SIGUIENTES RESULTADOS DE INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA (EN
UNIDADES ARBITRARIAS)

INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA: 2.1 5.0 9.0 12.6 17.3 21.0 24.7
CONCENTRACION, pg/mL: 0 2 4 6 8 10 12
9989 . 0
28 . 418 * 112
2 . 216
= = r
6 7 42 = = x 1 . 13 7 7 . 91 = = y
9
ACERCA DE LOS VALORES DE r
A MENUDO, UNA CURVA QUE NO LUCE MUY LINEAL
PRODUCE VALORES MUY ALTOS DE r

UN VALOR ALTO DE r PODRIA SER INTERPRETADO
ERRONEAMENTE COMO UNA RELACION LINEAL

LA CURVA DE CALIBRACION DEBE GRAFICARSE SIEMPRE

ES IMPORTANTE REPORTAR r CON EL NUMERO
ADECUADO DE CIFRAS SIGNIFICATIVAS
10
VALORES DEL COEFICIENTE DE CORRELACION r
-1 < r < +1
CURVAS ANALITICAS: r > 0.99 (AL MENOS DOS NUEVES)
11
INTERPRETACIONES ERRONEAS DEL
COEFICIENTE DE CORRELACION r
ESTA CURVA ES LO
SUFICIENTEMENTE SUAVE
COMO PARA PRODUCIR UN
VALOR DE r BASTANTE ALTO
(LA CALIBRACION SIEMPRE
DEBE GRAFICARSE)
ESTE EJEMPLO ES UN
RECORDATORIO DE QUE UN r
IGUAL A CERO NO NECESARIA-
MENTE SIGNIFICA QUE NO HAY
RELACION ENTRE x Y y
12
PRUEBA t PARA EVALUAR r
CASO DE UN VALOR BAJO DE r: ES SIGNIFICATIVO DE VERDAD?
USE PRUEBA t DE DOS COLAS
Ho: NO HAY CORRELACION ENTRE x Y y
2
1
2
r
n r
t
calc

=
t
crit
PARA (n-2) GRADOS DE LIBERTAD

SI t
calc
> t
crit
, SE RECHAZA Ho
13
LA LINEA DE REGRESION DE y SOBRE x
ASUNCION: HAY UNA FUERTE RELACION LINEAL ENTRE
LA SEAL ANALITICA (y) Y LA CONCENTRACION (x)

LA MEJOR LINEA QUE PASA POR LOS PUNTOS DE LA CURVA
DE CALIBRACION: y = a + bx

USE EL METODO DE LOS MINIMOS CUADRADOS PARA
HALLAR a Y b:
xx
xy
S
S
b = x b y a =
PENDIENTE
INTERCEPTO
14
EJEMPLO DE LINEA DE REGRESION
LA SERIE DE SOLUCIONES ESTANDAR DE FLUORESCEINA CON LOS SIGUIENTES
RESULTADOS DE INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA (EN UNIDADES ARBITRARIAS)

INTENS. DE FLUORESCENCIA: 2.1 5.0 9.0 12.6 17.3 21.0 24.7
CONCENTRACION, pg/mL: 0 2 4 6 8 10 12

CALCULAR LA PENDIENTE Y EL INTERCEPTO DE LA LINEA DE REGRESION
93 . 1
112
2 . 216
= = =
xx
xy
S
S
b
52 . 1 6 * 93 . 1 1 . 13 = = = x b y a
52 . 1 93 . 1 + = x y
LA LINEA DE REGRESION:
15
CURVA DE CALI BRACI ON
16
LOS RESIDUOS DE y EN UNA REGRESION LINEAL
RESIDUO
i
= VALOR MEDIDO - VALOR PREDICHO


i
y
i
y
i
bx a +
17
DESVI ACI ON ESTANDAR DE LOS RESI DUOS
( DESVIACION ESTANDAR DE LA REGRESION)
i i i
y y Residuo = xx yy i i
S b S y y RSS
2 2
) ( = =

SUMA DE LOS
CUADRADOS DE LOS
RESIDUOS
VARIANZA
RESIDUAL
2
=
n
RSS
DESVIACION
ESTANDAR RESIDUAL
2 2
2

= =
n
S b S
n
RSS
S
xx yy
R
FACILITA EL CALCULO DE RSS
LA LINEA DE REGRESION TIENE LA MI NI MA RSS
METODO DE
MINIMOS CUADRADOS
TAMBIEN CONOCIDA COMO:
DESVIACION ESTANDAR DE LA REGRESION
MUY UTIL COMO MEDIDA DE LA BONDAD DEL
AJUSTE DE LA LINEA A LOS PUNTOS
18
ERRORES EN LA PENDIENTE ( b ) Y
EL INTERCEPTO ( a ) DE LA LINEA DE REGRESION
xx
R
b
S
S
s =
b
ts b INTERVALO DE CONFIANZA:
xx
R a
S
x
n
S s
2
1
+ =
INTERVALO DE CONFIANZA:
a
ts a
EN AMBOS CASOS,
t CON (n-2) GRADOS DE LIBERTAD
19
EJ EMPLO: EN LA SERIE DE SOLUCIONES ESTANDAR DE FLUORESCEINA, CALCULAR LA
DESVIACION ESTANDAR Y LOS LIMITES DE CONFIANZA DE LA PENDIENTE Y EL
INTERCEPTO DE LA LINEA DE REGRESION
x
i
y
i
x
i
-x (x
i
-x)
2
y
i
-y (y
i
-y)
2
(x
i
-x)(y
i
-y)
0 2.1 -6 36 -11.0 121.00 66.0
2 5.0 -4 16 -8.1 65.61 32.4
4 9.0 -2 4 -4.1 16.81 8.2
6 12.6 0 0 -0.5 0.25 0
8 17.3 2 4 4.2 17.64 8.4
10 21.0 4 16 7.9 62.41 31.6
12 24.7 6 36 11.6 134.56 69.6
42 91.7 0 112 0 418.28 216.2


4672 . 0
5
112 * 93 . 1 28 . 418
2
2
2
=

=
n
S b S
S
xx yy
R
04415 . 0
112
4672 . 0
= = =
xx
R
b
S
S
s
11 . 0 93 . 1 04415 . 0 * 57 . 2 93 . 1 = =
b
ts b
318 . 0
112
6
7
1
4672 . 0
1
2
2
= + = + =
xx
R a
S
x
n
S s
81 . 0 52 . 1 3183 . 0 * 57 . 2 52 . 1 = =
a
ts a
7 = n
6 = x
52 . 1 = a
93 . 1 = b
112 =
xx
S
28 . 418 =
yy
S
) 5 %, 95 ( 57 . 2 = = f t
20
CALCULO DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA DESCONOCIDA
b
a y
x

=
0
0
y
o
ES EL VALOR EXPERIMENTAL DE y A PARTIR DEL CUAL SE CALCULA x
o
xx
R
x
S b
y y
n m b
S
s
1 1 1
2
0
0
|
.
|

\
|

+ + =
m ES EL NUMERO DE LECTURAS PARA OBTENER UN y
o
PROMEDIO
0
0 x
ts x
t CON (n-2) GRADOS DE LIBERTAD
INTERVALO DE CONFIANZA:
21
EJ EMPLO: EN LA SERIE DE SOLUCIONES STANDARD DE FLUORESCEINA, CALCULAR LA
CONCENTRACION Y LOS LIMITES DE CONFIANZA PARA SOLUCIONES CON INTENSIDADES DE 2.9, 13.5 Y
23.0 EN FLUORESCENCIA
INTERVALO DE
CONFIANZA:
(1) PARA y
o
= 2.9
73 . 0 72 . 0
112
1
93 . 1
1 . 13 9 . 2
7
1
1
1
93 . 1
4672 . 0
* 57 . 2
93 . 1
52 . 1 9 . 2
2
=
|
.
|

\
|
+ +

(2) PARA y
o
= 13.5
(3) PARA y
o
= 23.0
67 . 0 21 . 6
73 . 0 13 . 11
NOTESE QUE ESTOS
INTERVALOS SE HACEN MAS
ANCHOS A MEDIDA QUE y
o

SE ALEJA DE y
7 = n
52 . 1 = a
93 . 1 = b
4672 . 0 =
R
S
112 =
xx
S 1 . 13 = y
1 = m
xx
R
S b
y y
n m b
S
t
b
a y 1 1 1
2
0 0
|
.
|

\
|
+ +

22
FORMA GENERAL DE LOS LIMITES DE CONFIANZA
PARA LA CONCENTRACION DETERMINADA
UTILIZANDO UNA RECTA DE REGRESION
23
COMO REDUCIR LA INCERTIDUMBRE EN x
o

(Y ESTRECHAR SU I NTERVALO DE CONFI ANZA)
xx
R
S b
y y
n m b
S
t x
1 1 1
2
0
0
|
.
|

\
|

+ +
OBTENGA UNA SEAL ANALITICA DE LA MUESTRA
DESCONOCIDA QUE SE APROXIME AL CENTROIDE

LLEVE A CABO UN EXPERIMENTO DE CALIBRACION DE
MAYOR TAMAO

REALICE MAS DE UNA LECTURA DE LA MUESTRA
DESCONOCIDA Y UTILICE LA MEDIA DE ESTAS
DETERMINACIONES PARA CALCULAR LA CONCENTRACION
24
valor de t ancho int ervalo
n para (n-2) GdL de conf ianza 95%
3 12.71 14.68(S
R
/ b)
6 2.78 3.00(S
R
/ b)
12 2.23 2.32(S
R
/ b)
24 2.07 2.12(S
R
/ b)
48 2.01 2.03(S
R
/ b)
1.96 1.96(S
R
/ b)
UN EXPERIMENTO DE CALIBRACION
DE MAYOR TAMAO?
n=3
6
12
24
48

CONCENTRACION ESTIMADA
S
R
/b
-10 +10
INTERVALO DE CONFIANZA vs TAMAO DEL EXPERIMENTO

25
EJERCICIO.-TAMAO DEL EXPERI MENTO DE CALI BRACI ON
EL DR. ROSSO, UN CONSULTOR ANALTICO, HA SIDO LLAMADO URGENTEMENTE POR LA EMBAJADA
RUBOVIANA EN BOGOT PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE PLOMO EN UNA MUESTRA SUPER
SECRETA. EL EMBAJADOR EST MUY REACIO A DIVULGAR EL ORGEN DE LA MUESTRA, PERO LE
HACE SABER AL DR. ROSSO QUE SE TRATA DE UN LQUIDO VISCOSO ROJO OSCURO QUE PODRA SER
ANALIZADO POR AAX (UN MTODO EN EL QUE EL CONSULTOR ES UN EXPERTO). A L SE LE
ASEGURA QUE LA CONCENTRACIN ESPERADA DE PLOMO EN LA MUESTRA PROBLEMA EST ENTRE
0 Y 100 PPM, PERO EL DR. ROSSO SE LAS ARREGLA PARA SABER TAMBIN QUE SU VERDADERA
CONCENTRACIN EST MUY PRXIMA A 50 PPM. AL LLEGAR A LA EMBAJADA SE LE DICE QUE EL
RESULTADO SE REQUIERE CON EXTREMADA URGENCIA Y QUE HAY REACTIVO PARA SOLAMENTE
DIEZ MEDICIONES POR AAX.
CUAL DE LAS SIGUIENTES ESTRATEGIAS SE ESPERARA QUE LE DE AL DR. POSSO EL MAS ESTRECHO
INTERVALO DE CONFIANZA DE LA CONCENTRACIN DE PLOMO EN LA MUESTRA DESCONOCIDA?

A. USAR NUEVE ESTNDARES DE 0, 12.5, 25,..., Y 100 PPM EN UN EXPERIMENTO DE CALIBRACIN Y
LUEGO HACER UNA DETERMINACIN DE LA MUESTRA DESCONOCIDA.
B. USAR SEIS ESTNDARES DE 0, 20, 40, 60, 80 Y 100 PPM EN UN EXPERIMENTO DE CALIBRACIN Y
LUEGO HACER CUATRO DETERMINACIONES DE LA MUESTRA DESCONOCIDA.
C. USAR TRES ESTNDARES DE 0, 50 Y 100 PPM EN UN EXPERIMENTO DE CALIBRACIN Y LUEGO HACER
SIETE DETERMINACIONES DE LA MUESTRA DESCONOCIDA.
NOTA: J USTI FI QUE CUI DADOSAMENTE SU RESPUESTA MEDI ANTE CALCULOS Y/O ASUNCI ONES.
26
LIMITE DE DETECCION
LA MINIMA CONCENTRACION DEL ANALITO QUE UNO
PUEDE DETECTAR POR EL METODO CON UN CIERTO NIVEL
DE CONFIANZA
EN OTRAS PALABRAS
LA CONCENTRACION MINIMA DE ANALITO QUE PRODUCE UNA
SEAL QUE ES SIGNIFICATIVAMENTE DIFERENTE DEL BLANCO
DEFI NI CI ON DE LA I UPAC:
LA CONCENTRACION DEL ANALITO QUE PRODUCE UNA SEAL
IGUAL A LA DEL BLANCO MAS k VECES LA DESVIACION ESTANDAR
DEL BLANCO
i.e.: LA CONCENTRACION C
D
PARA LA CUAL
B B D
ks y y + =
27
COMO SE DETERMINA C
D
B B D
ks y y + = DE LA DEFINICION DE LA IUPAC
DE LA ECUACION DE REGRESION
D D
bC a y + =
D B B
bC a ks y + = +
ASUMIENDO TAMBIEN QUE
a y
B
~
D B
bC ks =
b
s
k C
B
D
=
ASUMIENDO QUE
R B
S s ~
b
S
k C
R
D
=
OJ O:
CADA PUNTO DE LA CURVA
DE CALIBRACION
(INCLUYENDO EL BLANCO)
TIENE UNA VARIACION
(NORMALMENTE
DISTRIBUIDA) SOBRE EL EJE
y QUE PUEDE ESTIMARSE
CON LA DESVIACION
ESTANDAR DE LOS
RESIDUOS S
R
28
LIMITE DE DETECCION
DOS PROBLEMAS
I.- UNO NO QUIERE RECLAMAR LA PRESENCIA
DEL ANALITO CUANDO EN REALIDAD ESTA
AUSENTE

PERO IGUALMENTE

II.- UNO NO DESEA REPORTAR QUE EL
ANALITO ESTA AUSENTE CUANDO EN VERDAD
ESTA PRESENTE


DEBE MINIMIZARSE LA POSIBILIDAD DE CADA UNO DE ESTOS
ERRORES UTILIZANDO UNA DEFINICION APROPIADA DE LA
CONCENTRACION LIMITE
29
CONCENTRACIONES LIMITE
PARA k = 3 (COMO SE MUESTRA AQUI) LA PROBABILIDAD (P) DE
CADA ERROR (I O II) ESTA ALREDEDOR DEL 7%
30
DETECCION Y CUANTIFICACION
RECUERDE SIEMPRE:

LAS DEFINICIONES SON BASTANTE ARBITRARIAS.- ES EL USUARIO
QUIEN ESCOJE k

CUANDO SE REPORTA UN LIMITE DE DETECCION, DEBE INCLUIRSE
INFORMACION (k) SOBRE LA DEFINICION UTILIZADA
0 C
D
C
C
CONCENTRACION
0 y
B
y
D
y
C
SEAL
y
B
+ 3s
B
y
B
+ 10s
B
ANALITO SIN
DETECTAR
REGION DE DETECCION REGION DE CUANTIFICACION
31
EJ EMPLO: EN LA SERIE DE SOLUCIONES STANDARD DE FLUORESCEINA, ESTIMAR LOS LIMITES DE
DETECCION (3o) Y CUANTIFICACION (10o)
93 . 1 = b 4672 . 0 =
R
S
7 . 0
93 . 1
4672 . 0
* 3 3 = = =
b
S
C
R
LD
4 . 2
93 . 1
4672 . 0
* 10 10 = = =
b
S
C
R
LC
32
EFECTOS DE MATRIZ

DISMINUCION O AUMENTO DE LA SEAL ANALITICA DEBIDO A LA
PRESENCIA DE OTROS COMPONENTES EN LA MUESTRA
METODO REGULAR DE CALIBRACION:

EL INSTRUMENTO SE CALIBRA CON SOLUCIONES ESTANDAR QUE
CONTIENEN SOLO EL ANALITO

EL METODO ES ACEPTABLE SOLAMENTE SI ESTA SOLUCION DEL
ANALITO PRODUCE LA MISMA SEAL INSTRUMENTAL QUE
SOLUCIONES DE LA MUESTRA QUE CONTENGA LA MISMA
CONCENTRACION DEL ANALITO

CUANDO SE UTILIZAN SOLUCIONES PURAS DEL ANALITO PARA
ESTABLECER LA GRAFICA DE CALIBRACION, SE ASUME QUE NO HAY
EFECTOS DE MATRIZ

CON FRECUENCIA, TAL ASUNCION NO ES ACEPTABLE EN MUCHAS
AREAS DE ANALISIS
33
EL PROBLEMA DE EFECTOS DE MATRIZ
POSIBLES SOLUCIONES:

PREPARAR ESTANDARES DE CALIBRACION QUE SEAN
IDENTICOS A LA MUESTRA PROBLEMA EN TODO ASPECTO
EXCEPTO EN LA CONCENTRACION DEL ANALITO (METODO DE
ESTANDAR CON AJUSTE DE MATRIZ)
ESTA ESTRATEGIA RARA VEZ RESULTA PRACTICABLE

PREPARAR ESTANDARES DE CALIBRACION QUE CONTENGAN LA
PROPIA MUESTRA EN UNA PROPORCION FIJA Y CONOCIDA
(METODO DE ADICIONES (DE) ESTANDAR)
34
METODO DE ADICION DE ESTANDAR
* IMPLEMENTACION *
SE TOMAN VOLUMENES IGUALES DE SOLUCION PROBLEMA

TODAS SALVO UNA SON TRATADAS (DOPADAS) POR
SEPARADO MEDIANTE LA ADICION DE CANTIDADES
CONOCIDAS E INCREMENTALES DEL ANALITO

TODAS SE DILUYEN AL MISMO VOLUMEN

SE MIDE LA SEAL INSTRUMENTAL PRODUCIDA POR
CADA UNA DE ESTAS SOLUCIONES

COMO DE COSTUMBRE, LA SEAL SE PRESENTA EN EL EJE
y, MIENTRAS QUE EN EL EJE x SE PRESENTA LA
CANTIDAD DE ANALITO AADIDA
35
METODO DE ADICION DE ESTANDAR
* CURVA Y CALCULOS *
b
a
x
E
=
xx
R
x
S b
y
n b
S
s
E
2
2
1
+ =
36
EJ EMPLO.- LA CONCENTRACION DE PLATA EN UNA MUESTRA DE DESHECHOS FOTOGRAFICOS SE
DETERMINO POR ESPECTROMETRIA DE ABSORCIO ATOMICA (EAA) CON EL METODO DE ADICIONES DE
ESTANDAR. SE OBTUVIERON LOS SIGUIENTES RESULTADOS:

Ag adicionada, g por mL
de solucion original 0 5 10 15 20 25 30
Absorbancia 0.32 0.41 0.52 0.60 0.70 0.77 0.89

DETERMINE LA CONCENTRACION DE PLATA EN LA MUESTRA Y LOS LIMITES DE CONFIANZA AL 95%
PARA ESTA CONCENTRACION

259 . 17
01864 . 0
3216 . 0
=

= =
b
a
x
E
700 01864 . 0
601 . 0
7
1
01864 . 0
01093 . 0 1
2
2
2
2

+ = + =
xx
R
x
S b
y
n b
S
s
E
0 . 2 3 . 17 =
E
x
g/mL
15 = x
601 . 0 = y
3216 . 0 = a
01864 . 0 = b
700 =
xx
S
01093 . 0 =
R
S
) 5 %, 95 ( 57 . 2 = = f t
37
METODO DE ADICION DE ESTANDAR
* DESVENTAJAS *
REQUIERE CANTIDADES DE MUESTRA MAS
GRANDES QUE EL METODO REGULAR DE
CALIBRACION

ESTADISTICAMENTE, SU PRINCIPAL
DESVENTAJA CONSISTE EN SER UN METODO
DE EXTRAPOLACI ON, POR LO TANTO MENOS
PRECI SO QUE LAS TECNICAS DE
INTERPOLACION
38
CALIBRACION vs ADICION DE ESTANDAR
UNO NO DEBE EMBARCARSE EN EL ESFUERZO EXTRA DE LAS
ADICIONES DE ESTANDAR A MENOS QUE SE TENGA EVIDENCIA
SOLIDA DE LA PRESENCIA DE EFECTOS DE MATRIZ
LA AUSENCIA DE EFECTOS DE MATRIZ CONLLEVA A PENDIENTES
(SENSIBILIDADES INSTRUMENTALES) ESTADISTICAMENTE IGUALES
POR AMBOS METODOS
CUALQUIER DIFERENCIA ENTRE LOS DOS METODOS PUEDE
CHEQUEARSE MEDIANTE UNA PRUEBA DE SIGNIFICACION:
Ho: LAS PENDIENTES DE LAS DOS LINEAS NO SON DIFERENTES
H
1
: LAS PENDIENTES DE LAS DOS LINEAS SON DIFERENTES
2 1
2 1
1 1
xx xx
R
calc
S S
S
b b
t
+

=
2 1
2
2 2
2
1 1
f f
S f S f
S
R R
R
+
+
=
2
1 1
= n f 2
2 2
= n f
t
crit
PARA (f
1
+f
2
) GRADOS DE LIBERTAD
2 1
b NO b =
2 1
b b =
39
EJERCICIO DE TALLER.-
METODO DE ADICION DE ESTANDAR
CALCULAR LA CONCENTRACIN DE BENCENO (EN mg POR L DE MUESTRA),
BASNDOSE EN LOS SIGUIENTES DATOS CROMATOGRFICOS LC (CORREGIDOS
POR EL MTODO DEL ESTNDAR INTERNO):

Volmenes utilizados, mL

Muestra 20.0 M benceno Fase mvil Area del pico,
(diluyente) corregida

20.0 0.00 30.0 41.4
20.0 5.00 25.0 57.6


Peso molecular del benceno: 78.11 g/mol

NOTA: OBSERVESE QUE EN ESTE CASO SOLO SE USA UN DOPAJE DE LA
MUESTRA CON SOLUCION ESTANDAR DE BENCENO. QUE HAY DE MALO EN ELLO?
kC A C A =
RECORDAR QUE
40
UN COMPUESTO ESTRUCTURALMENTE RELACIONADO CON EL ANALITO QUE SE
INCORPORA EN UNA CANTIDAD FIJA A LA MUESTRA Y A LOS ESTANDARES DE
TRABAJO.
LA SEAL ANALITICA ES EL COCIENTE DE LA ALTURA (O AREA) DEL PICO SOBRE
AQUELLA DEL ESTANDAR INTERNO

LA IDEA DETRAS DE UN ESTANDAR INTERNO ES QUE DURANTE EL ANALI SI S LAS
MOLECULAS DEL ESTANDAR I NTERNO SE COMPORTAN DE MANERA SI MI LAR A
AQUELLAS DEL ANALI TO

DE ESTA MANERA, SE REDUCEN LAS I NCERTI DUMBRES RELACIONADAS CON LA
PREPARACION DE LA MUESTRA Y SU INTRODUCCION EN EL INSTRUMENTO

EJEMPLO: EN MS, UN ANALOGO DEL ANALITO QUE SEA ESTABLE E
ISOTOPICAMENTE MARCADO
EL MARCAJE IMPLICA LA PREPARACION DE ANALITO EN LA QUE SE INCORPORA
UNO O MAS ATOMOS DE
2
H,
13
C O
15
N
SE ASUME QUE DURANTE EL ANALISIS MS LAS MOLECULAS MARCADAS REALIZAN EL
MISMO RECORRIDO QUE LAS MOLECULAS DEL ANALITO
Y QUE ES UN ESTANDAR INTERNO?
41
EJEMPLO: CALIBRACION REGULAR
DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO
conc., ppm abs., AU sample signal
10.0 0.145 0.610
20.0 0.435
30.0 0.814
40.0 1.152
50.0 1.419
SUMMARY OUTPUT
Regression Statistics
Multiple R 0.998482153
R Square 0.996966611
Adjusted R Square 0.995955481
Standard Error 0.032881099
Observations 5
ANOVA
df SS MS F Significance F
Regression 1 1.0660225 1.0660225 985.9927547 7.09703E-05
Residual 3 0.0032435 0.001081167
Total 4 1.069266
Coefficients Standard Error t Stat P-value Lower 95% Upper 95%
Intercept -0.1865 0.034485987 -5.40799361 0.012397364 -0.296249906 -0.076750094
X Variable 1 0.03265 0.001039792 31.40052157 7.09703E-05 0.029340916 0.035959084
RESIDUAL OUTPUT
Observation Predicted Y Residuals
1 0.14 0.005
2 0.4665 -0.0315
3 0.793 0.021
4 1.1195 0.0325
5 1.446 -0.027
X Variable 1 Residual Plot
-0.05
0
0.05
0.0 20.0 40.0 60.0
X Variable 1
R
e
s
i
d
u
a
l
s
X Variable 1 Line Fit Plot
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
0.0 20.0 40.0 60.0
X Variable 1
Y
42
EJEMPLO: ADICION DE ESTANDAR
DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO
added conc., ppm abs., AU
0.0 0.373
5.0 0.452
10.0 0.513
15.0 0.571
20.0 0.622
SUMMARY OUTPUT
Regression Statistics
Multiple R 0.996525837
R Square 0.993063744
Adjusted R Square 0.990751658
Standard Error 0.009414528
Observations 5
ANOVA
df SS MS F Significance F
Regression 1 0.0380689 0.0380689 429.5099662 0.000245687
Residual 3 0.0002659 8.86333E-05
Total 4 0.0383348
Coefficients Standard Error t Stat P-value Lower 95% Upper 95%
Intercept 0.3828 0.007292462 52.49256112 1.52269E-05 0.35959211 0.40600789
X Variable 1 0.01234 0.000595427 20.72462222 0.000245687 0.010445084 0.014234916
RESIDUAL OUTPUT
Observation Predicted Y Residuals
1 0.3828 -0.0098
2 0.4445 0.0075
3 0.5062 0.0068
4 0.5679 0.0031
5 0.6296 -0.0076
X Variable 1 Residual Plot
-0.02
-0.01
0
0.01
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0
X Variable 1
R
e
s
i
d
u
a
l
s
X Variable 1 Line Fit Plot
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.0 10.0 20.0 30.0
X Variable 1
Y
43
REG-CAL STD ADTN
n 5 5
r 0.998482 0.9965258
S
R
0.032881 0.0094145
mean x 30 10
mean y 0.793 0.5062
S
xx
1000 250
S
yy
1.069266 0.0383348
a -0.1865 0.3828
s
a
0.034486 0.0072925
b 0.03265 0.01234
s
b
0.00104 0.0005954
x
0
or x
E
24.4 31.0
s
x0
or s
xE
1.1 2.0
%RSD 4.6 6.5
SUMMARY STATISTICS
CALIBRACION vs ADICION DE ESTANDAR
44
USO DE REGRESION LINEAL PARA
COMPARAR DOS METODOS ANALITICOS
PARTE DE LA VALI DACI ON DE UN NUEVO METODO:
IDENTIFICAR ERROR(ES) SISTEMATICO(S)
PRODUCE EL NUEVO METODO RESULTADOS SIGNIFICATIVAMENTE MAS ALTOS
O MAS BAJOS QUE UN PROCEDIMIENTO BIEN ESTABLECIDO?

IMPLEMENTACION.- UTILICE UNA SERIE DE MUESTRAS ANALIZADAS POR
AMBOS METODOS

CALCULAR.- LA PENDIENTE (b), EL INTERCEPTO (a) Y EL COEFICIENTE DE
CORRELACION* (r)
SI CADA MUESTRA CONDUCE A UN RESULTADO IDENTICO
POR AMBOS METODOS,
a = 0 b = 1 r = 1
* EN LA PRACTICA, EL COEFICIENTE DE CORRELACION, r, TIENE UNA IMPORTANCIA MENOR
COMPARADO CON LOS LIMITES DE CONFIANZA PARA LA PENDIENTE Y EL INTERCEPTO
45
REGRESION PARA COMPARAR DOS METODOS ANALITICOS

CONDICIONES PARA OBTENER RESULTADOS CONFIABLES
LOS RESULTADOS DEL METODO MAS PRECISO SE PRESENTAN EN EL EJE x
(PUEDE UTILIZARSE LA PRUEBA F PARA COMPARAR LA PRECISION DE
LOS DOS METODOS)

DEBE INCLUIRSE UN NUMERO RAZONABLE DE PUNTOS (n > 10) PARA
CONSTRUIR LA GRAFICA DE COMPARACION
(RECORDAR QUE SE PIERDEN DOS GRADOS DE LIBERTAD AL EFECTUAR
LOS CALCULOS)

LOS PUNTOS (PAREJAS DE DATOS DE CONCENTRACION) DEBEN CUBRIR EL
RANGO DE INTERES CON UN DISTANCIAMIENTO UNIFORME
(A MENUDO, ALGO DIFICIL DE OBTENER EN LA PRACTICA)
46
REGRESION LINEAL PARA COMPARAR
DOS METODOS ANALITICOS
(a) PERFECTO ACUERDO ENTRE LOS DOS METODOS PARA TODAS LAS MUESTRAS
a = 0 Y b = 1

(b) LOS DOS METODOS DIFIEREN EN UNA CANTIDAD FIJA
a 0 PERO b = 1
SE DICE QUE HAY UN ERROR ABSOLUTO ENTRE LOS DOS METODOS

(c) LOS METODOS DIFIEREN EN UNA CANTIDAD QUE AUMENTA CON LA CONCENTRACION
a = 0 PERO b 1
SE DICE QUE HAY UN ERROR RELATI VO ENTRE LOS DOS METODOS

(d) EVIDENCIA DE ERRORES ABSOLUTO Y RELATIVO
a 0 Y b 1
47
SE DETERMINO EL NIVEL DE PLOMO EN DIEZ MUESTRAS DE JUGO DE FRUTAS
MEDIANTE UN NUEVO METODO POTENCIOMETRICO Y LOS RESULTADOS SE
COMPARARON CON AQUELLOS OBTENIDOS MEDIANTE ABSORCION ATOMICA
CON HORNO DE GRAFITO. SE OBTUVIERON LOS SIGUIENTES DATOS (TODOS
EN g/L):
EJEMPLO.- REGRESION LINEAL PARA COMPARAR DOS METODOS
ANALITICOS
MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
RESULTADO AAS 35 75 75 80 125 205 205 215 240 350
RESULTADO MET. POT. 35 70 80 80 120 200 220 200 250 330
EN LA PRACTICA, SI LOS INTERVALOS DE CONFIANZA PARA EL INTERCEPTO Y LA PENDIENTE
INCLUYEN LOS VALORES IDEALES DE 0 Y 1 RESPECTIVAMENTE, SE HABRA DEMOSTRADO,
MAS ALLA DE UNA DUDA RAZONABLE, QUE NO HAY EVIDENCIA DE ERRORES FIJO Y RELATIVO
87 . 3 = a
963 . 0 = b
9945 . 0 = r
56 . 10 =
R
S 64 . 6 =
a
s 0357 . 0 =
b
s
) 8 ( 31 . 2 = = f t
48
COMPARANDO DOS METODOS ANALITICOS
ES CLARO QUE EL INTERCEPTO Y LA PENDIENTE CALCULADOS NO DIFIEREN
SIGNIFICATIVAMENTE DE LOS VALORES IDEALES 0 Y 1 RESPECTIVAMENTE
34 . 15 87 . 3 = a 083 . 0 963 . 0 = b
ESTE INTERVALO INCLUYE A CERO
ESTE INTERVALO INCLUYE A UNO
49
ERROR SISTEMATICO
YA SABEMOS COMO DISTINGUIR ENTRE ERROR FIJO (ABSOLUTO) Y ERROR RELATIVO:

CUANDO UN OPERADOR O UN METODO EXHIBE UN ERROR FIJO, TODAS LAS
DETERMINACIONES EN UN LOTE SE VERAN AFECTADAS POR UN ERROR
SISTEMATICO DE MAGNITUD CONSTANTE

EN EL CASO DE ERROR RELATIVO, EL ERROR SISTEMATICO ES PROPORCIONAL
A LA CONCENTRACION MEDIDA, DE TAL MANERA QUE LAS
DETERMINACIONES SE VEN AFECTADAS POR UN PORCENTAJE DE ERROR
CONSTANTE

OJ O: EN AMBOS CASOS, EL ERROR SISTEMATICO ESTA SUPLEMENTADO Y A MENUDO
ENMASCARADO POR UN ERROR ALEATORIO QUE VARIA IMPREDECIBLEMENTE DE UNA
DETERMINACION A OTRA
50
ERRORES ABSOLUTO (FIJO)
Y RELATIVO (DEFI NI CI ONES)
ERROR ABSOLUTO:
A O = c
ERROR RELATIVO:
(PORCENTAJE DE ERROR)
100 %

=
A
A O
c
DONDE,

O : VALOR OBSERVADO (DETERMINACION EN LA MUESTRA
DESCONOCIDA)
A: VALOR VERDADERO O ACEPTADO COMO VERDADERO
(CONCENTRACION VERDADERA EN LA MUESTRA ESTANDAR)

OJO: EL ERROR (SISTEMATICO) TIENE SIGNO
51
COMO CORREJIR EL ERROR SISTEMATICO
LA CORRECCION DEL ERROR SISTEMATICO SE LLEVA A
CABO MEDIANTE UN CONTROL ANALITICO DE CALIDAD
CONSISTENTE EN LA INSERCION DE UN NUMERO DE
MUESTRAS ESTANDARES DE CONCENTRACION CONOCIDA
EN CIERTOS PUNTOS DE UNA SECUENCIA DE MUESTRAS
DESCONOCIDAS DE RUTINA

EL PRECIO QUE UNO PAGA POR ELIMINAR EL ERROR
SISTEMATICO ES UNA DISMINUCION EN LA PRECISION DEL
RESULTADO
52
CORRECCION DEL ERROR FIJO
O : OBSERVADO
A : VERDADERO
s : ESTANDAR
x : MUESTRA DESCONOCIDA
x s
c c =

s s x x
A O O A + =
x x s s
A O A O =

ERROR ABSOLUTO CONSTANTE

53
CORRECCION DEL ERROR FIJO
DETERMINACION
CORREGIDA
=
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
DESCONOCIDA
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
ESTANDAR
CONCENTRACION
VERDADERA
DE LA MUESTRA
ESTANDAR
+
EN PALABRAS:
DETERMINACIONES
A B C D E F MEDIA STDEV
MUESTRAS DESCONOCIDAS 20.6 20.5 20.7 20.6 20.8 21.0 20.7 0.179
MUESTRAS ESTANDARES (10.0 %w/w) 10.3 10.7 10.6 11.0 10.3 10.4 10.6 0.274
CORREGIDAS 20.3 19.8 20.1 19.6 20.5 20.6 20.2 0.394
MUESTRAS
EJEMPLO: DETERMINACION RUTINARIA DE AMONIACO CON EVIDENCIA DE
ERROR ABSOLUTO FIJO. SE INSERTA UN ESTANDAR (10.0% w/w) DESPUES DE CADA
DETERMINACION EN LA MUESTRA DESCONOCIDA
54
ERROR RELATIVO CONSTANTE
x s
c c % % =

x
x x
s
s s
A
A O
A
A O
=

x
x
s
s
A
O
A
O
=
s
s
x x
O
A
O A =
CORRECCION DEL ERROR RELATIVO

55
CORRECCION DEL ERROR RELATIVO
DETERMINACION
CORREGIDA
=
EN PALABRAS:
DETERMINACIONES
A B C D E F MEDIA STDEV
MUESTRAS DESCONOCIDAS 20.6 20.5 20.7 20.6 20.8 21.0 20.70 0.179
MUESTRAS ESTANDARES (10.0 %w/w) 10.3 10.7 10.6 11.0 10.3 10.4 10.55 0.274
CORREGIDAS 20.0 19.2 19.5 18.7 20.2 20.2 19.63 0.609
MUESTRAS
EJEMPLO: DETERMINACION RUTINARIA DE AMONIACO CON EVIDENCIA DE
ERROR RELATIVO CONSTANTE. SE INSERTA UN ESTANDAR (10.0% w/w) DESPUES
DE CADA DETERMINACION EN LA MUESTRA DESCONOCIDA
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
DESCONOCIDA
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
ESTANDAR

CONCENTRACION
VERDADERA
DE LA MUESTRA
ESTANDAR
56
DETERMINACION
CORREGIDA
=
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
DESCONOCIDA
DETERMINACION
EN LA MUESTRA
ESTANDAR

CONCENTRACION
VERDADERA
DE LA MUESTRA
ESTANDAR
CORRECCION SIMULTANEA DE ERRORES FIJO Y RELATIVO
DETERMINACION
EN EL BLANCO
DETERMINACION
EN EL BLANCO


B s
s B x
x
O O
A O O
A

=
) (
O SEA,
57
LIMITACIONES DE LA LINEA DE REGRESION NO PONDERADA
RECORDAR QUE...
UNA LINEA DE REGRESION NO SOLO ASUME QUE EL ERROR ALEATORIO EN
LOS VALORES DEL EJE x ES CERO, SINO TAMBIEN QUE EL ERROR ALEATORIO
EN LOS VALORES DE y ES CONSTANTE (HOMOCEDASTI CI DAD)

O SEA QUE
TODOS LOS PUNTOS DE LA RECTA TIENEN IGUAL PONDERACION CUANDO SE
CALCULAN LA PENDIENTE Y EL INTERCEPTO DE LA LINEA DE REGRESION


A MENUDO DICHAS ASUNCIONES NO SON VALIDAS EN LA PRACTICA

CON MUCHA FRECUENCIA ES LA DESVIACION ESTANDAR RELATIVA DE LA SEAL
INSTRUMENTAL LA QUE ES APROXIMADAMENTE CONSTANTE DENTRO DE UN
RANGO DE CONCENTRACION

A PESAR DE ESTAS OBJECIONES, LAS LINEAS DE REGRESION NO PONDERADAS
PROPORCIONAN INFORMACION UTIL EN MUCHISIMOS CASOS
58
ESTA LA PRECISION DEL METODO RELACIONADA CON LA CONCENTRACION?
PRECISION
ABSOLUTA
CONSTANTE
PRECISION
RELATI VA
CONSTANTE
te tan cons s
y
~ te tan cons
y
s
y
~
59
LA PONDERACION DE ERRORES ALEATORIOS
EN UN CALCULO DE REGRESION
LOS ERRORES EN LOS DIFERENTES PUNTOS DE LA GRAFICA SE REPRESENTAN
MEDIANTE BARRAS DE ERROR (LIMITES DE 1o) QUE SE ALARGAN A MEDIDA
QUE LA CONCENTRACION AUMENTA

ES CLARO QUE SE DEBERIA DAR UNA MAYOR PONDERACION A AQUELLOS PUNTOS
DONDE LAS BARRAS DE ERROR SON MAS CORTAS: ES MAS IMPORTANTE QUE LA
RECTA CALCULADA PASE MAS CERCA DE ESTOS PUNTOS
60
LINEAS DE REGRESION PONDERADAS
SE UTILIZAN CUANDO EL ERROR ALEATORIO EN LA RESPUESTA
INSTRUMENTAL ES UNA FUNCION (APROXIMADAMENTE LINEAL) DE
LA CONCENTRACION DEL ANALITO

LOS CALCULOS INVOLUCRADOS SON SOLO LIGERAMENTE MAS
COMPLICADOS QUE AQUELLOS DE LA REGRESION NO PONDERADA

REQUIERE I NFORMACI ON ADI CI ONAL DE LA PRECISION DE LA SEAL
A LOS DIFERENTES NIVELES DE CONCENTRACION O, AL MENOS, UNA
FORMULACION DE SUPOSICIONES ADICIONALES ACERCA DE TAL
PRECISION
(ESTO EXPLICA PORQUE LAS REGRESIONES PONDERADAS SE USAN
CON MENOS FRECUENCIA)

LAS LINEAS DE REGRESION PONDERADA SE USAN EXCLUSIVAMENTE
EN LA CALIBRACION DE INSTRUMENTOS (NO PARA COMPARAR DOS
METODOS ANALITICOS)
61
LINEAS DE REGRESION PONDERADA
PAREJAS DE DATOS: (x
1
,y
1
), (x
2
,y
2
), (x
i
,y
i
), (x
n
,y
n
)
CON DESVIACIONES ESTANDAR
s
1
s
2
s
i
s
n
Y PONDERACIONES
w
1
w
2
w
i
w
n

DAR A CADA PUNTO UNA PONDERACION, w
i
, INVERSAMENTE PROPORCIONAL
A LA VARIANZA CORRESPONDIENTE, s
i
2
2
1
i
i
s
w

=
2
1
2
i n
i
i
s
s
w
* PARA SIMPLIFICAR LOS CALCULOS SUBSIGUIENTES, LOS FACTORES DE
PONDERACION SE PONEN EN UNA ESCALA TAL QUE SU SUMA ES IGUAL AL
NUMERO DE PUNTOS DE LA CURVA (n):
ES CONVENIENTE
*
UTILIZAR

= n w
i
62
ECUACIONES * LINEA DE REGRESION PONDERADA

CENTROIDE PONDERADO (x
w
, y
w
) :

= =
i i
i
i i
w
x w
n w
x w
x
1
wxx
wxy
S
S
b =
w w
x b y a =

= =
w w i i i w i w i i wxy
y x n y x w y y x x w S ) )( (

= =
2 2
2
) (
w i i w i i wxx
x n x w x x w S
PENDIENTE
INTERCEPTO
DONDE

= =
i i
i
i i
w
y w
n w
y w
y
1

= =
2 2
2
) (
w i i w i i wyy
y n y w y y w S
63
LIMITES DE CONFIANZA PARA UNA CONCENTRACION
CALCULADA MEDIANTE UNA REGRESION LINEAL PONDERADA
wxx
w wR
x
S b
y y
n w b
S
S
w
2
2
0
0
) ( 1 1
0

+ + =
2
2

=
n
S b S
S
wxx wyy
wR
DONDE
MUCHO MAS CERCANO
AL ORIGEN QUE EL
CENTROIDE NO
PONDERADO
64
EJERCICIO DE TALLER
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
0.0 50.0 100.0
Fluorescencia
d
e
s
v

s
t
d
Concentracin, ng/mL:

0

10

20

30

40

50


Intensidad de fluorescencia:

4

22

44

60

75

104

(unidades arbitrarias)

3

20

46

63

81

109



4

21

45

60

79

107



5

22

44

63

78

101



4

21

44

63

77

105

La fluorescencia de una serie de soluciones cidas de quinina fue determinada 5 veces; los resultados se
muestran a continuacin:
Determine la pendiente y el intercepto de (a) la recta de regresin no ponderada y (b) la recta de
regresin ponderada. Calcule, utilizando ambas rectas de regresin, los lmites de confianza para la
concentracin de las disoluciones con intensidades de fluorescencia de 15 y 90 unidades.
0
20
40
60
80
100
120
0 20 40 60
Concentration, ppb
F
l
u
o
r
e
s
c
e
n
c
e
65
REGRESIONES NO LINEALES
ESTA ES LA QUE
MEJOR SE AJUSTA
Y CUAL ES LA ALTERNATIVA A ESA OBSECION DE AJUSTAR TODO
EL RANGO DE CONCENTRACIONES A UNA SOLA CURVA?
66
DETECTANDO CURVATURA
REGRESION LINEAL NO PONDERADA A TRAVES DE TODOS LOS PUNTOS
LOS 5 PRIMEROS PUNTOS, Y
LOS 4 PRIMEROS PUNTOS
CONC. INTENS.
g/mL FLUOR.
0 0.1
2 8.0
4 15.7
6 24.2
8 31.5
10 33.0

EJEMPLO: ANALIZAR EL INTERVALO DE CALIBRACION LINEAL DE LA SIGUIENTE
CALIBRACION DE FLUORESCENCIA:

67
-4.0
-3.0
-2.0
-1.0
0.0
1.0
2.0
3.0
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
Concentration, ppm
R
e
s
i
d
u
a
l
s
Todos
5 Primeros
4 Primeros
EN GENERAL,
LOS RESIDUOS DEBEN SER INDEPENDIENTES ENTRE SI (NO DEBE HABER
NINGUN PATRON O TENDENCIA EN LOS RESIDUOS). A MENUDO SE
REQUIEREN MAS DATOS PARA UNA OBSERVACION CONCLUYENTE
n a b r R E S I D U O S
6 1.357 3.479 0.9878 -1.257 -0.314 0.429 1.971 2.314 -3.143
5 0.100 3.950 0.9998 0.000 0.000 -0.200 0.400 -0.200
4 0.000 4.000 0.9998 0.100 0.000 -0.300 0.200
DETECTANDO CURVATURA