Introduccin a la Enzimologa

Catlisis

Ea Ea DG

DG

Reaccin no catalizada

Reaccin catalizada

Enzima: Protena dotada de actividad cataltica

- Enzimas proteolticas - Desnaturalizacin de enzimas - Purificacin de enzimas - Sntesis completa de una enzima

A partir de 1982, se sabe que no todas las enzimas son protenas; existen molculas de RNA con actividad cataltica, las llamadas ribozimas

Las enzimas cumplen su papel cataltico gracias a: - Fijacin estereoqumicamente complementaria del substrato - Transformacin cataltica del mismo

En ambas funciones participan:

- Cadenas laterales de los aminocidos - Grupos o molculas no proteicas: - Grupos prostticos - Iones metlicos - Cofactores

En la catlisis qumica se distingue entre:

- Catlisis homognea, cuando catalizador y reactivos estn en la misma fase fsicoqumica: Por ejemplo, la hidrlisis cida de la sacarosa. - Catlisis heterognea, cuando catalizador y reactivos estn en distinta fase fsicoqumica: por ejemplo, la reaccin en fase gaseosa entre N2 y H2 para formar amonaco (proceso Haber), que es catalizada por metales (slidos) La catlisis enzimtica tiene caractersticas de ambas

Los siguientes hechos: - Especificidad de la reaccin enzimtica - Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica

Nos llevan a postular la existencia de un Centro Activo en la molcula de enzima, capaz de:

- Fijar especficamente al substrato - Transformarlo catalticamente.

Lisozima y su substrato

Substrato: molcula(s) sobre la(s) que acta la enzima

Actividad enzimtica: velocidad a la que cursa la reaccin enzimtica Velocidad: variacin de la concentracin en la unidad de tiempo Unidades: katal: moles.s-1 U.I.: mmoles.min-1 (a 25C) La velocidad es directamente proporcional de la concentracin de enzima; por tanto, la velocidad es una medida de la concentracin de enzima en una preparacin.

Activador: Agente que aumenta la actividad enzimtica

Inhibidor: Agente que disminuye la actividad enzimtica

Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima: E+I EI

Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima: E+I

Cofactor (Coenzima):

tomo, ion o molcula que participa en el proceso cataltico sin ser enzima ni substrato.
Los cofactores participan de dos maneras distintas: 1. A travs de una fijacin muy fuerte a la protena y salen sin ser modificados del ciclo cataltico 2. Como un segundo substrato; salen modificados del ciclo cataltico y por lo general requieren otra enzima para volver al estado original.

Aminocido R CH COO- + O2 + H2O NH3+

LAO

Cetocido R CO COO- + H2O2 + NH4+

LAO: L-aminocido oxidasa: es una flavoprotena Las flavoprotenas tienen un grupo prosttico flavnico, que interviene en el proceso cataltico sin salir modificado del mismo
O H3C H3C N NH N NH O

Piruvato COOC O CH3 NADH + H+ NAD+

L-Lactato

LDH

COOHO C H CH3

LDH: Lactato deshidrogenasa Utiliza como cofactor NADH, el cual sale de la reaccin oxidado a NAD+. La regeneracin a NADH requerira otra enzima.

Isoenzimas: formas moleculares distintas de una enzima dentro del mismo organismo Hexokinasa: Presenta, al menos, cuatro formas distintas - Heptica - Cerebral - Muscular - Eritrocitaria

Las isoenzimas representan formas que tienen que ver con la diferenciacin celular, presentando distintas caractersticas funcionales.

Especificidad de las enzimas, 1

Especificidad absoluta:

COOCH CH COOFumarato (trans-)

H2O

COOHO CH CH2 COOL-Malato

Enzima:
Fumarato hidratasa Especfica para el ismero trans- por un lado y para el L- por otro.

Especificidad de las enzimas, 2

Especificidad de grupo:

R CO O R' + H2O Esterasa

R COOH + HO R'

Las carboxilesterasas hidrolizan todo tipo de steres, independientemente de la naturaleza de R o R

Otras caractersticas de la accin enzimtica Eficiencia cataltica En ocasiones llega a ser enorme; con nmeros de recambio del orden de 108 s-1

Las enzimas que han llegado a este lmite reciben el nombre de Enzimas plenamente evolucionadas, ya que un incremento en la actividad no tendra sentido al superar la velocidad de difusin de los substratos.

Teoras de la accin enzimtica, 1

Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer)

Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica, de la misma manera que una llave se ajusta a su cerradura. Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se considera insuficiente al no explicar algunos fenmenos de la inhibicin enzimtica, por ejemplo

Teoras de la accin enzimtica, 2

Modelo de Ajuste Inducido (Koshland) Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin en su estructura por el hecho fsico de la unin. Est mucho ms de acuerdo con todos los datos experimentales conocidos hasta el momento.

Teoras de la accin enzimtica, 3 La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad definiendo la accin enzimtica como Estabilizacin del Estado de Transicin

Segn lo cual, el Centro Activo enzimtico es en realidad complementario no al substrato o al producto, sino al estado de transicin entre ambos.

O R C O R'
Substrato: un ster

OR C O R' O-

Estado de transicin: intermediario tetradrico, inestable

O R C O
-

HO R'

Productos

O O

Anlogo de Estado de Transicin Derivado fosforilado, que no es substrato de la reaccin, pero que por su analoga estructural ocupa el centro activo de la enzima e inhibe fuertemente a la reaccin

R P O R'
-