HENRY ROLF ZELA CAMPOS UANCV-2013

PROTENAS
FUNCIONES BIOLOGICAS (I) Rol catalizador de las reacciones qumicas celulares Rol estructural Rol energtico Rol en el transporte intracelular y extracelular de metabolitos Rol en la respuesta inmune

PROTENAS
FUNCIONES BIOLOGICAS (II) Rol de mensajero qumico Rol en funciones especializadas Rol en el crecimiento y proliferacin celular Rol regulador del pH NO HAY FUNCION CELULAR QUE NO SEA MEDIADA POR LAS PROTEINAS

PROTENAS
COMPOSICIN ELEMENTAL
Carbono Oxgeno
Hidrgeno Azufre

50 % 23 %
7% 3%

Nitrgeno 16 %

(Vlido para las protenas simples)

PROTENAS
COMPOSICIN ELEMENTAL
Carbono 50 % Oxgeno 23 % Nitrgeno 16 % Hidrgeno 7% Azufre 3%
(Vlido para las protenas simples)

PROTEINAS
CARCTER MACROMOLECULAR -------------------------------------------------------------------TABLA.- Datos moleculares de algunas protenas -----------------------------------------------------------------------------------------------PROTEINA P.M. No de residuos No de cadenas Insulina-5733 51 2 Citocromo c (humana) 13000 104 1 RNAasa(bovino) 13700 124 1 Lisozima (huevo) 13930 129 1 Mioglobina(equina) 16890 153 1 Quimotripsina(bovino) 21600 241 3 Hemoglobina (humana) 64500 574 4 Ig G (humana) 145000 1320 4 Glutamato deshidrogen. 1000000 8300 40

PROTEINAS
METODOS BASADOS EN EL CARCTER MACROMOLECULAR DE LAS PROTEINAS PARA SU ANALISIS
Separacin por dilisis Ultracentrifugacin Cromatografa por ultrafiltracin molecular

DIALISIS

ULTRACENTRIFUGA

CROMATOGRAFIA POR ULTRAFILTRACION MOLECULAR

Los aminocidos: las unidades estructurales de las protenas Un aminocido es un compuesto orgnico que presenta dos grupos funcionales unidos a un tomo de carbono central, un grupo amino ( -NH2 ), a un grupo cido carboxilo ( - COOH ) y a un tomo de hidrgeno. En cada aminocido tambin existe otro tomo o grupo de tomos de carbono designados con la letra -R En muchos aminocidos el grupo amino se comporta como una base dbil y el grupo cido como un cido dbil lo que determina la ionizacin o polarizacin del aminocido ( tpico de los aminocidos hidroflicos), a diferencia de los aminocidos hidrofbicos que nunca se ionizan.

 Existen en la naturaleza un total de 20 aminocidos diferentes los que se utilizan para conformar las cadenas proteicas en los seres vivos. Estos 20 aminocidos no cambian, no importando que clula los sintetice ni que variedad de organismo. Los aminocidos se unen a travs de un enlace por deshidratacin denominado enlace peptdico. Al unirse los aminocidos entre s se va conformando una cadena proteica, primero se le denomina polipptido y posteriormente protena. La secuencia de aminocidos en la cadena peptdica determina el carcter biolgico de la molcula proteica. Una pequea variacin en la secuencia puede alterar o destruir la manera de funcionar de la protena

Estructura de un aminocido
Grupo amino (protonado) Grupo carboxilo (disociado)

COO H 3N
+

C H R
Carbono

Cadena lateral

Frmula general

Carbono , es un carbono quiral por lo tanto hay enantiomeros (isomeros pticos).

Los enlaces amida entre aminocidos se conocen como enlaces petdicos y el producto formado por la unin de dos aminocidos se llama dipptido. La cadena peptdica puede extenderse mediante la incorporacin de otros aminocidos (tripptidos, tetrapptidos, etc.). Los polipptidos contienen muchas unidades de aminocidos.

Las protenas son polipptidos que contienen ms de 50 aminocidos, son polmeros formados por 100-300 aminocidos.

Las protenas ejercen muy diversos papeles en los seres vivos: la seda,
el pelo, los msculos, el tejido conectivo y casi todos los enzimas son protenas.

Clasificacin de los aminocidos

Esenciales : Son aquellos que nuestro organismo no es capaz de sintetizar o formar y por lo tanto debe adquirirlo a travs de la dieta alimenticia, especialmente vegetal No esenciales: pueden ser sintetizados por el organismo a partir de glcidos, lpidos u otras molculas orgnicas, por tanto, su importancia es menor a los anteriores .

Metinina, treonina, lisina, valina, triptfano, leucina, isoleucina, fenilalanina, Histidina y arginina durante la infancia

Aminocidos esenciales en el ser humano Aminocidos esenciales Histidina Aminocidos no esenciales Alanina

Leucina
Isoleucina Lisina Metionina

Arginina
Asparagina Acido Aspartico Cistena

Fenilalanina
Treonina Triptofano Valina

Glutamina
Acido glutmico Glicina Prolina

Serina
Tirosina

Clasificacin de aminocidos segn polaridad

Aminocidos apolares o hidrofbicos: - A, V, L, I, F, W, M, P Aminocidos polares sin carga elctrica: - G, Y, S, T, C, N, Q Aminocidos polares con carga elctrica: - Aninicos (-): D, E - Catinicos (+): K, R, H

Clasificacin
Aminocidos con cadenas laterales no polares: Alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina y tripftofano.

Aminocidos con cadenas polares polares con carga en el pH fisiolgico. Glicina, serina, cistena, treonina, tirosina, asparagina y glutamina
Aminocidos con cadena lateral acida. cido asprtico y acido glutmico Aminocidos con cadenas laterales acidas. Histidina, lisisna y arginina.

No polares

Polares

cidos

Bsico

APOLARES, CADENA LATERAL ALIFATICA

GRUPO I

APOLARES. CON R AROMATICO

GRUPO I

Clasificacin de los aminocidos

Nombre Abreviaci n Estructura
Nombre Prolina Abreviacin Pro(P)
N H

Estructura
O

O Aminocidos con extremos de cadenas non polares H2N

OH
O

Glicina

Gly(G)
O NH OH

OH

fenilalanina

Phe (F)
NH 2

OH

Alanina

Ala (A)

Triptfano
OH

Trp(w)

H2N HN

OH

Valina

Val(V)

NH2

OH

Leucina

Leu(L)

NH2

Aminocidos con extremos de cadenas polares pero no ionizados O Asparagina Asn(N)

H2N OH O NH2

OH

Isoleucin a

Ile(I)
S

NH2

O
OH

Glutamina

Metionina Met(M)

Gln (Q)

H2N NH2

OH

NH2

Clasificacin de los aminocidos

Nombre Abreviacin Estructura Nombre Abreviaci n Estructura
O

Aminocidos con extremos de cadena polares pero no ionizados O

Serina Ser (S)
HO NH2 OH
OH O

Cistena

Cys(C)

HS NH2

OH

O Aminocidos con extremos de cadena bsicos

Treonina

Thr(T)
OH NH2

Lisina

Lys(K)

H N 2 O H N H 2
N H O

Arginina

O Aminocidos con extremos de cadenas cidos

Arg (R) His (H

H N 2

N H N H 2

O H

cido aprtico cido glutmico Tirosina

Asp(D)

HO OH O
O

Histidina

N OH NH2

NH2

O
HN

Glu (E)
Tyr(Y)

HO NH2

OH

O H N H 2 H O

AMINOACIDOS INUSUALES

AMINOACIDOS QUE NO FORMAN PARTE DE PROTENAS ( Se les encuentra libres)

COMPUESTOS DERIVADOS DE AMINOCIDOS

Existen aminocidos presentan actividad biolgica importante pero que no forman parte de las protenas, ejemplo: D-Acido Glutamico (en polipptidos presentes en pared celular de microorganismos). L-homoserina (Presente en muchos tejidos, intermediarios metablicos), etc. Glutamato (Neurotransmisor -aminobutirato GABA) Histidina: histamina, controla la constriccin de vasos sanguineos, secrecin de HCl por el estomago. Tirosina; precursor de epinefrina, hormona tiroidea, tiroxina y triyodotropina.

Biosntesis de los aminocidos. Aminocidos esenciales y no esenciales. Biosntesis de aminocidos no esenciales. Ejemplos de regulacin. Aminocidos como precursores biosintticos: sntesis de porfirinas, neurotransmisores y aminas.

Tirosina

(Aminocido esencial)

Glicina, serina, y cisteina

A partir de intermediarios de la glucolisis

Glutamato, glutamina, prolina y arginina A partir del alfa-cetoglutarato

AMINOACIDOS COMO PRECURSORES

La tirosina, adems de neurotransmisores participa en la biosntesis de: Hormonas tiroideas T4,T3 Melanina: Eumelanina, Feomelanina Neuromelanina

ABSORCION DE LUZ DE LOS AMINOACIDOS EN LA REGION ULTRAVIOLETA

AMINOACIDURIAS
Clasificacin:
1. Por mayor formacin del aminocido (Sobreproduccin) 2. Por menor reabsorcin tubular renal del aminocido

Aminoacidurias Frecuentes:
Fenilcetonuria Cistinuria Sindrome de Fanconi Enfermedad de Hartnup

Caso Clnico 1 ( a)
E.M es un nio de 2 aos de edad que padece de convulsiones desde un ao antes. Para el tratamiento de su cuadro convulsivo, se usaron diferentes frmacos, los que fueron sustituidos desde haca dos meses por valproato, por considerarlo ms efectivo como anticonvulsivante. En las ltimas semanas el estado de salud del nio fue desmejorando por lo que fue necesario proporcionarle sus alimentos a travs de una sonda nasogstrica .

Caso Clnico 1 ( b)
Das despus en vista que no mejoraba, se orden diversos exmenes de laboratorio. Se encontr la presencia de glucosa en la orina( glucosuria), sin hiperglicemia y un aumento en la excrecin urinaria de fosfato asociado a hipofosfatemia. Una muestra de orina fue utilizada para hacer un cromatografa en capa fina y luego de

Caso Clnico 1 ( c)
revelar la lmina con ninhidrina se pudo identificar una serie de manchas que correspondan a diversos aminocidos, en la misma lmina se sembr una muestra de orina normal y tambin se pudo detectar algunas manchas pero de mucha menor intensidad que las encontradas en la orina del paciente. Se practic una biopsia renal y el examen microscpico revel alteraciones a nivel tubular de tipo inflamatorio, pero sin alteracin alguna en la estructura mitocondrial .

Caso Clnico 1 (d)

Los mdicos que atendieron al enfermo pensaron que la administracin del ltimo anticonvulsivante tena alguna relacin con el estado del paciente y con las alteraciones de los exmenes de laboratorio y decidieron suspenderlo. A los pocos das se normalizaron todos los anlisis y el paciente mejor notoriamente a tal punto que se suspendi la alimentacin por la sonda.

Caso Clnico 2 (a)

Un nio de 12 aos de edad fue llevado al servicio de emergencia de un hospital pblico, por presentar un dolor muy intenso en el flanco derecho. El examen clnico no arroj otras anormalidades. Los padres refirieron que eran primos hermanos. Se centrifug una muestra de orina del paciente y el sedimento se observ al microscopio y se encontr adems de hemates, unos cristales hexagonales.

Caso Clnico 2 (b)

La radiografa de abdomen permiti visualizar clculos (piedras) a nivel de ambos riones, siendo ms llamativos en el derecho. Mediante cromatografa en capa fina se identific cantidades importantes de cistina en la orina, la que posteriormente se cuantific con HPLC. Se practic las pruebas del cloruro frrico y de la 2,4 dinitrofenilhidrazina en la orina del paciente resultando negativa la primera y positiva la segunda.; en tanto que la reaccin de Sakaguchi result positiva.

Caso Clnico 3 (a)

Nia de 9 aos de edad hija de padres consanguneos fue internada en un hospital por presentar cuadros de dermatitis ( piel rojiza y escamosa) y diarrea, adems de alteraciones neurolgicas evidenciadas por la presencia de ataxia. La madre pens que la nia tena la misma enfermedad que su hermano mayor , la cual haba sido diagnosticada como pelagra. No obstante la nia no tena ninguna deficiencia diettica de vitaminas.

Caso Clnico 3(b)

El examen de orina revel una poliaminoaciduria y cuando el hermano mayor mejor de su enfermedad tambin se pudo demostrar en la orina una excrecin aumentada de varios aminocidos, de manera especial los neutros. El examen de orina en los otros 4 hermanos revel que dos de ellos tenan tambin poliaminoaciduria; en tanto que los otros dos eran normales.

NIVELES DE ESTRUCTURACION DE LAS PROTEINAS

1. PRIMARIO
Alfa hlice Lmina plegada

2. SECUNDARIO 3. TERCIARIO 4. CUATERNARIO

+NH3-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO..

NH-CH-CO-NH-CH-CO

R(1)

R(2)

R(3)

R(165)

R(166)

Estructura Primaria de una protena que tiene 166 aminocidos

ESTRUCTURA PRIMARIA DE LA INSULINA DE PANCREAS DE BOVINO

1958

1980

FRED SANGER PREMIO NOBEL EN QUIMICA EN 1958 Y EN 1980

Variaciones en los aminocidos de la insulina de diferentes especies

ESPECI A8 ES

A9

A10

B30

Hombr Treoni Serina na e Vaca Cerdo

Alanin a Serina

Isoleuci Treonin na a Valina Alanina

Treoni Serina na
na gi-na

Isoleuci Alanina na
a

Gallina Histidi Asparra Treonin Alanina

Figura 5.1 Estructura Primaria de la Ribonucleasa ESTRUCTURA PRIMARIA DE LA RIBONUCLEASA

DESNATURALIZACION DE LA RIBONUCLEASA

TABLA 5.2.- LUGARES DE ACCIN DE LAS ENZIMAS Y COMPUESTOS QUIMICOS QUE HIDROLIZAN ENLACES PEPTDIC

AGENTE
1.Sobre enlaces pepti-dicos externos.

LUGAR DE CORTE
Primer o ltimo enlace peptdico.

ESPECIFICIDAD

-R de Edman Aminopeptidasa

Libera el aminocido N terminal Libera al aminocido N terminal

Cualquier aminocido Cualquier aminocido

Lugares de accin de las enzimas que hidrolizan enlaces peptdicos

Carboxipeptidasa A Carboxipeptisada B 2. Sobre enlaces peptdicos internos -Bromuro de ciangeno Tripsina

Libera el aminocido C terminal Libera al aminocido C terminal Del segundo al penultimo enlace peptdico Lado carboxilo Lado carboxilo

Todos los aminocidos excepto Arg, Lis y Pro Cuando es Arg y Lis

De la metionina De Lis, Arg y Cis si est aminooetilada. No actua si el que sigue es Pro. De Fen, Tir, Tri, Leu, Asp y Glu. No acta si el anterior es Pro. De Fen, Tir, Tri y Leu De Fen, Tir, Tri y Leu

Pepsina

Lado amino

Termolisina Quimotripsina

Lado amino Lado carbosilo

LAS DISTANCIAS INTERATOMICAS EN EL ESQUELETO PEPTIDICO

ESTRUCTURA ESTRUCTU -HELICE RA -HLICE

PUENTES DE HIDROGENO

LAMINA PLEGADA PARALELA

LAMINA PLEGADA ANTIPARALELA

ESTRUCTURA PRIMARIA , SECUNDARIA Y TERCIARIA DE UNA PROTEINA

ENLACES QUE MANTIENEN LA ESTRUCURA TERCIARIA DE LAS PROTEINAS

5.4 A

NIVELES DE ESTRUCTURACION DE LAS PROTEINAS

SECUNDARIA : LAMINA PLEGADA

PRIMARIA

SECUNDARIA : ALFA HELICE TERCIARIA

CUATERNARIA

COLAGENO

HEMOGLOBINA

DESNATURALIZACION REVERSIBLE DE LAS PROTEINAS

ELECTROFORESIS DE LAS PROTEINAS DEL SUERO SANGUINEO

ELECTROFORESIS DE

LAS

PROTEINAS SERICAS

Paciente de 72 aos con mieloma mltiple.

1Y 5: PATRONES

ELECTROFORESIS DE LAS HEMOGLOBINAS

Nio saludable de 3 aos de edad nacido en EEUU, de raza negra y fue estudiado en un programa de descarte.
Electroforesis el acetato de celulosa pH 8.4

1.- Madre
2.- Padre 3.- Paciente 4.-hermana del paciente de 7 aos Case 6.