Unidad de Investigacin y desarrollo en Alimentos Maestra en Ciencias en Ingeniera Bioqumica

Protocolo de Maestra

Establecimiento de las condiciones de sacarificacin y fermentacin de la harina de papa empleando Aspergillus niger y Sascharomyces cerevisiae para la produccin de etanol
Presenta:

Asesores:

Revisores:

Veracruz, Ver.

INTRODUCCIN

Combustibles fsiles

Industriales

Contaminacin Atmosfrica

Comerciales Domesticas

Agropecuarias

Primarios
Oxido de Azufre Monxido de Carbono Oxido de Nitrgeno

Secundarios
Oxidantes fotoqumicos Algunos Radicales de corta existencia (Ozono, etc.)

Etanol
Fermentacin de los azcares contenidos en orgnica de los productos vegetales. Sacarosa Almidn Hemicelulosa Celulosa
www.miliarium.com/Biocombustibles/Bioetanol.asp

la materia

Procesos Biotecnolgicos de produccin de etanol

Jugo de caa Azucares simples Remolacha Primera generacin Almidn Maz Papa Pltano Forraje de trigo Segunda generacin Forraje de maz Lignocelulosa

Procesos Biotecnolgicos

Desecho de papelera
Bagazo de caa

Produccin nacional de papa

Principales estados productores de papa Sinaloa Chihuahua Sonora N. Len Guanajuato 20% 14% 11% 10% 8% 6% Composicin de la papa Agua Almidn Protena Fibra A. Grasos 75% 20% 2.5% 1.8% 0.15%

68%

Veracruz

Disponibilidad

(Primavera - Verano) (Otoo Invierno)

Enfermedades Desechos de papa Sobre produccin Harina

Precio

Recepcin

Diagrama de proceso para Harina de papa

Lavado y pelado

Troceado en rodajas

Inmersin (Bisulfito de sodio 100

ppm )

Secado

Molienda

Harina
Caldern., (2011).

Harina Acida Almidn Hidrolisis Enzimtica

Microorganismos (Amiloliticos)
Aspergillus Niger Azcares fermentables Fermentacin
Saccharomyces Cerevisiae
Tolerante a altas concentraciones de etanol. Anaerobio Facultativo

Rendimiento terico: 51.1 %

Dobreva y col., (1996). Glazer y col., (1998).

Material Biolgico
Hongos Levaduras

Medio de Cultivo
Fuente de Carbono Fuente de Nitrgeno P,S,K,Mg

Modo de Operacin
Lote

Condiciones Ambientales
Temperatura pH %O2 Agitacin rpm

Y P/S Productividad

Productos Secundarios

ANTECEDENTES

M. Hamed y Col, 1986

Realizaron fermentacin directa de papa por co-cultivo de A. niger y S. cerevisiae
g/100 ml de medio A. Niger
Almid n con. Biomasa cel. Etanol

Almidn

A. Niger + S. Cerevisiae
Almidn con. Biomasa cel. Etanol

1 2 3 4 5

0.9 1.9 2.5 3.7 4.2

1.0 1.5 1.8 2.1 2.7

0.17 0.17 0.29 0.29 0.30

0.96 0.96 2.9 3.8 4.8

0.9 1.0 1.1 1.4 1.6

0.18 0.48 0.70 1.03 1.33

Rendimiento etanol: pH: 5-6 Anaerobia 48 hrs

ptimos

de

Rico, 1990
Produccin, purificacin y caracterizacin parcial de una glucoamilasa de A. niger
Pureza Caractersticas Produccin de la enzima Peso molecular Actividad glucoamilosica

Henao y col, 2006

Mtodos de conservacin para A. niger enzimatica amilolitica con actividad

6 Metodologas

Viabilidad Pureza Actividad enzimtica amilolitica amiloglucosidasa

Sepa nativa: A. Niger SMB14M3

Mxima actividad
t: 36 hrs pH: 3-5 T: 60C

Sossa-Urrego, col, 2008

Inmovilizacin de Bacillus l. y Sacharomyces c. para la produccin de etanol a partir de almidn de papa.
Almidn de papa
3.7 g L-1 Azucare Reductores 669 UA L-1 4h 150 rpm 3 v.v.m

Hidrolisis

Celulas B. licheniformis

Fermentacin

S. Cerevisiae

48 h 50 rpm 30C

Mohamed y Suumia, 2010

Produccin de etanol a partir de almidn de papa y subproductos asociados por S. cerevisiae
Almidn de papa
100C 1h

Hidrolisis

H2SO4 1%

Fermentacin

S. Cerevisiae comercial S. Cerevisiae Y-1646

36 h 50 rpm 35C ZnCl2 0.4 g L-1 Aerbicas Semi anaerobias

Rendimiento de etanol de 5.52 g L-1

Rani y col, 2010

Produccin de etanol a partir de harina de papa Saccharomyces cerevisiae Coccin
1:1 kg papa L-1 agua K2S2O5 0.5%

Trituracin Secado a 70C Tamao de partcula 210m

amilasa licuefacin Amiloglucosidasa Sarificacin 80C 90 min Ajitacin 60C

Hidrolisis

Enzimtica

Fermentacin

S. Cerevisiae

24 h Estacionaria 32C

Guhen y Demirce, 2010

Obtencin de etanol a partir de hidrolisis enzimatica de papa por Saccharomyces cerevisiae
Hidrolisis
Enzimtica amilasa Glucoamilasa Evaluaron T: 95-110 C pH : 5.8 t: 30-40 min

Fermentacin

S. Cerevisiae

T: 35 C pH: 5.5 Anaerobia

Evaluaron Temperatura pH

JUSTIFICACIN

Debido a la disminucin gradual de los recursos derivados del petrleo y el impacto de estos residuos en el medio ambiente, existe la necesidad de obtener combustibles a partir de recursos renovables, se han propuesto alternativas para la produccin de etanol a partir de la papa de desecho la cual no rene las caractersticas para el consumo en fresco. Propiciando el desarrollo de biotecnologa con alto rendimiento y eficiencia energtica para la obtencin de biocombustibles. Por lo tanto el empleo de harina cruda de papa para la fermentacin alcohlica representa un ahorro energtico y econmico, debido a que se eliminan las etapas de extraccin de almidn, la gelificacin y la hidrlisis a altas temperaturas ya que la capacidad de las cepas de A. niger ITV01 y S. cerevisiae ITV01DR para hidrolizar almidn y producir etanol eficientemente las hace aptas para el desarrollo de un proceso integral que considere menos operaciones y mayores rendimientos a los obtenidos en la actualidad.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Establecer las mejores condiciones de sacarificacin y fermentacin de la harina de papa empleando un co-cultivo de A. niger ITV-01 y S. cerevisiae ITV-01 DR para la produccin de etanol.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Caracterizar la cintica de sacarificacin de la harina de papa por A. niger a diferentes concentraciones de sustrato . Evaluar el efecto del Ph y la temperatura sobre la actividad hidrolitica de A. niger en harina de papa. Establecer las mejores condiciones de tiempo y tamao de inoculo para el co-cultivo de A. niger ITV-01 y S. cerevisiae ITV01DR en biorreactor.

METODOLOGA

banado, Inmersin en bisulfito, cado, molienda.

de azucares ores, hidrolisis de n (almidn residual)

Cintica Tiempo

de hidrolisis

de adicin de la saccharomyces
Cultivo

mixto

Hongo

activa

dio de cultivo

preinoculo

Medios de conservacin
Material biolgico
Aspergillus niger

Saccharomyces cerevisiae
Cajas petri
Componente
Agar-Agar Glucosa Extracto de levadura

Tubos Cajas petri

Componente g L-1 40

g L-1
20.0 20.0 10

Agar Dextrosa de Papa (PDA)

Refrigeracin 4C

Refrigeracin 4C

Componente Harina de papa (NH4)2SO4 KH2PO4

g L-1 Se ajustara en cada experimento 12.5 1.0

E N E

F E B

M A R

A B R

M A Y

J U N

J A S U G E L O P

O C T

N O V

D I C

E N E

F M A M J E A B A U B R R Y N

J U L

A G O

Revisin Bibliogrfica Caracterizacin cintica del hidrolizado de almidn de la harina de papa por A. niger a diferentes concentraciones de sustrato y relacin. Establecer las mejores condiciones para la produccin de etanol utilizando harina de papa en un co-cultivo con A. niger ITV-01 y S. cerevisiae ITV-01DR en un biorreactor de 10l. Escalar la produccin de etanol del co-cultivo a un biorreactor de 80l. Estudiar el comportamiento del co-cultivo para la produccin de etanol en un biorreactor de 80l. Tesis