Microbiologa y Parasitologa

Reconocimiento de equipo y material de laboratorio. Esterilizacin Prctica 1 INTRODUCCIN

El laboratorio de microbiologa adems de un ambiente apto para el trabajo microbiolgico requiere de una instrumentacin bsica de uso corriente en microbiologa.

COMPETENCIAS

Reconoce los equipos y materiales de uso comn en el laboratorio de microbiologa. El alumno se familiariza con el material de vidrio utilizado para el cultivo y aislamiento de los microorganismos.

Conoce el uso de tcnicas de esterilizacin mediante agentes fsicos y qumicos.

Determina la importancia de la bioseguridad durante sus prcticas en el laboratorio de microbiologa, as como en su vida diaria.

Prctica 1
Reconocimiento de equipo y material de laboratorio
AUTOCLAVE Es un equipo que se utiliza para la esterilizacin de material, tanto de limpio como contaminado, que se basa en la produccin de vapor contenido a altas presiones.

Prctica 1
Las autoclaves son grandes cmaras de acero inoxidable que funcionan automticamente. Los objetos deben ser colocados de manera que el vapor de agua entre en contacto con todas las partes de cada uno de ellos, y el aire no quede atrapado en su interior.

Prctica 1

Bao Mara

Microscopio

Prctica 1

Placas petri

Tubos de prueba con tapa rosca

Frascos

Fiola

Prctica 1

Matraz de vidrio

Matraz de Erlenmeyer

Asa de Koll

Esptula de Drigalsky

LIMPIEZA Y PREPARACIN DEL MATERIAL

El material que se emplea en microbiologa debe estar perfectamente limpio y estril . La limpieza es importante ya que restos de sustancias que permanecen en los tubos, placas y dems elementos, pueden impedir el posterior desarrollo de los microorganismos; la esterilizacin es fundamental para evitar la presencia de microorganismos extraos o contaminantes. Para ello el material deber ser acondicionado de tal forma que mantenga estas condiciones por tiempo indeterminado.

NORMAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

Usar guardapolvo durante las clases prcticas. Usar jabn desinfectante, detergente y marcador para vidrio. Tener sobre la mesa una probeta llena con solucin desinfectante para introducir las pipetas luego de ser utilizadas Lavarse las manos antes y despus de trabajar.

El cultivo con el que se trabaja puede ser patgeno, tomar precauciones de BIOSEGURIDAD.
Al recibir el cultivo NO LO DESTAPE, tome el tubo por su parte media apoyado sobre la palma de la mano de manera de ver fcilmente el contenido y la inscripcin que lo identifica.

MATERIAL DE LABORATORIO

Tubos de ensayo: destinados a conservar medios de cultivo en pequeos volmenes. Se utilizan tubos de vidrio, con tapa a rosca o a presin. Placas de Petri: cajas de vidrio de seccin circular, con tapa. Existen de diferentes tamaos.

Pipetas Pasteur: son tubos de vidrio terminados en capilar. Se usan para transportar pequeos volmenes de lquido o para sembrar a partir de medios de cultivo lquidos.
Marcador permanente: son marcadores resistentes al agua, se utilizan para marcar o escribir sobre superficies de vidrio.

MATERIAL DE LABORATORIO

Pipetas graduadas: para su uso en el laboratorio de microbiologa se les coloca un tapn de algodn en el extremo superior, de manera de impedir que el operador aspire lquidos potencialmente contaminados, o que contamine el medio de cultivo al aspirarlo. Se utilizan para realizar inoculaciones y diluciones. Esptula de Drigalsky: Se construye con una pipeta Pasteur larga o con una varilla de vidrio. Se calienta el extremo en la llama del mechero y se dobla en ngulo recto unos 4 cm, esta ltima porcin se dobla nuevamente del mismo modo. Se utiliza para distribuir una muestra lquida que se siembra sobre la superficie de un medio de cultivo slido. Mango o cabo de Koll: sirve para sujetar al asa, aguja o esptula de platino. Est compuesto por un mango de un material aislante, que se prolonga en un vstago metlico que sostiene mediante una tuerca un alambre. Cuando el extremo del alambre tiene forma de anillo se denomina asa; si se deja el extremo recto se llama aguja y si se dobla en ngulo recto al extremo libre se lo llama gancho.

Desinfeccin y Esterilizacin

Esterilizacin: proceso fsico o qumico que destruye toda forma de vida de vida microbiana, incluidas las esporas.
Desinfeccin: tiene por objeto la destruccin de microorganismos mediante agentes de naturaleza qumica (desinfectantes), con el fin de disminuir el nmero de formas vegetativas a niveles mnimos. Desinfectante: es la sustancia qumica que inhibe o destruye microorganismos al aplicarla sobre material inerte sin alterarlo significativamente. Asepsia: trmino que se aplica a los procedimientos utilizados para prevenir que los microorganismos progresen en un medio determinado (quirfano, laboratorio, etc.) Antispticos: son agentes desinfectantes que se utilizan sobre superficies corporales con el fin de reducir la cantidad de flora normal y de contaminantes microbianos patgenos. Tienen un menor grado de toxicidad que los desinfectantes y generalmente menor grado de actividad. Determinados preparados pueden utilizarse como antispticos o como desinfectantes indistintamente, pero a diferentes concentraciones en cada caso.

Esterilizacin
Agentes Fsicos
Calor seco o hmedo Flameado Radiaciones ionizantes Rayos UV

Agentes Qumicos
xido de etileno Formol o formaldehdo Glutaraldehdo

Mtodos de desinfeccin y esterilizacin: fsicos y qumicos

Fsicos

Esterilizacin por calor El calor es el mtodo de eleccin para esterilizar el material de laboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para esterilizar un material depende de que se est utilizando calor seco o calor hmedo. El calor hmedo mata los microorganismos ms rpidamente que el calor seco. La esterilizacin por calor hmedo se realiza en cmaras presurizadas los autoclaves.

Cuando se utiliza calor hmedo, una temperatura de 121C durante 20 minutos proporciona condiciones fiables para esterilizar la mayor parte del material de laboratorio.

Mtodos de desinfeccin y esterilizacin: fsicos

Los medios de cultivo y los materiales textiles, tales como toallas y batas de laboratorio, se esterilizan en la autoclave.
Tambin otros materiales secos que resisten las temperaturas altas, incluyendo pipetas de vidrio, matraces vacos o tubos de ensayo, especialmente si la autoclave posee secado automtico. El cristal y los instrumentos de metal tambin se pueden esterilizar por calor seco. Se colocan en hornos de aire caliente y se calientan a 170 oC durante 90 minutos.

Mtodos de desinfeccin y esterilizacin: fsicos

Radiaciones Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por cidos nucleicos causando daos genticos alterando las bases nitrogenadas. Se la utiliza en la preparacin de vacunas, cabinas de seguridad biolgica, lugares de trabajo como mesas de laboratorios, etc. Radiaciones ionizantes: actan lesionando cidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirrgicos, guantes, jeringas, etc.

Mtodos de desinfeccin y esterilizacin:qumicos

Los agentes qumicos como el xido e etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan con gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nucleicos y protenas alquilando estos radicales esenciales. xido de etileno Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que inactiva microorganismos sustituyendo tomos de hidrgeno lbiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc. El material se expone a esterilizar a un 5-10% de xido de etileno en dixido de carbono a 50-60 en condiciones de humedad controlada durante 4 a 6 horas. Es necesario someterlo despus a un perodo de aireacin debido a su carcter mutagnico. Es un agente efectivo en la esterilizacin de material termolbil como prtesis, catteres, jeringas, etc.

Mtodos de desinfeccin y esterilizacin:qumicos

Formol o formaldehdo Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin hospitalaria y en la industria farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse. Glutaraldehdo Se emplea sumergiendo el material limpio en una solucin al 2%, se emplea sobre todo en la esterilizacin de instrumentos pticos y los utilizados en terapia respiratoria.

Desinfectantes y antispticos Inorgnicos

La actividad de los compuestos derivados de metales pesados (como plata, mercurio, etc.,) se debe a la formacin de sales que se disocian con dificultad de los grupos sulfihidrilos de las protenas. Son buenos bactericidas. Nitrato de plata y derivados argnticos

El nitrato de plata se ha utilizado en el tratamiento de quemaduras en soluciones al 0,5% y en la profilaxis de la oftalmia del recin nacido por Neisseria gonorrhoeae.

Desinfectantes y antispticos Inorgnicos

Agua oxigenada (perxido de hidrgeno) Agente oxidante que se inactiva en presencia de materia orgnica. Es poco utilizado. En dermatologa es utilizado por su propiedad antifngica.
Permanganato de potasio Se inactivan en presencia de materia orgnica. El cloro y derivados son agentes oxidantes muy usados en la potabilizacin del agua en forma de cloro gaseoso en grandes establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para descartar material biolgico (sangre, suero, etc.)

Desinfectantes y antispticos Inorgnicos

Derivados clorados. Derivados yodados. Son agentes oxidantes que se usan en forma de solucin acuosa, combinndolos con detergentes o sustancias orgnicas. Los yodoformos son compuestos que se liberan progresivamente. El Yodo se encuentra en la polivinilpirrolidona (povidona yodada). Existen tambin soluciones alcohlicas.

Desinfectantes y antispticos Orgnicos

Actan desnaturalizando protenas. Su accin es rpida pero se evaporan con facilidad.

El alcohol etlico se utiliza en antisepsia a una concentracin del 70%, a esta concentracin se reduce ms la tensin superficial de la clula bacteriana facilitando el proceso de desnaturalizacin. Acta precipitando protenas. Fenoles. Son derivados fenlico que actan alterando la permeabilidad de la membrana celular bacteriana. Tiene inactivacin rpida y es bien tolerado por la piel. Se emplea mucho en hospitales en el lavado de la superficie cutnea en forma de solucin (acuosa o alcohlica) o asociada a detergentes no inicos. Otros derivados fenlicos son los cresoles, los que unidos a jabones originan compuestos estables.

Desinfectantes y antispticos Orgnicos

Clorohexidina. Acta desorganizando las membranas citoplasmticas. Tienen escaso poder bacteriosttico. Se pueden mejorar combinndolos con desinfectantes u otras sustancias tensoactivas como laurilsulfato. Detergentes aninicos. Tienen accin antisptica, se inactivan en contacto con jabn, algodn y materia orgnica. Son poco usados.

Detergentes catinicos.
Glicoles. Propilenglicol y Etilenglicol, se aplican o en forma de aerosoles para desinfeccin ambiental.