Ruth Bishop y col.

Royal Children`s Hospital en Melbourne, Australia

1974

Thomas Henry Flewett

Estructura del ROTAVIRUS

Cpside Externa

80 nm.

Cpside Interna

Cpside Interna

ROTAVIRUS
Segmentos de ARN ESPECIES DE RV. Grupo A (SGI-SGII)

Grupo B -

China

VP1/ VP3 Grupo C Australia, Brasil VP2 Grupo D Grupo E Grupo F VP6 VP4
Clivada por tripsina pancretica

Grupo G

VP7

VP8 / VP5

Protenas virales No estructurales (NS)

Replicacin ARN viral

NSP1

Transcrita por el gen 5 y es una protena de unin al ARN. Protena de unin de ARN, que se acumula en inclusiones citoplasmticas.

NSP2
NSP3 NSP5

Unida al ARNm en clulas infectadas y es responsable de la finalizacin de la sntesis proteica celular.

Codificada por el segmento 11 del genoma vrico del RV A y en las clulas infectadas se acumula en el viroplasma Enterotoxina viral que induce Diarrea (primera enterotoxina que se descubri)

NSP4

Grupo A
La clasificacin de rotavirus de acuerdo con el serotipo VP7. Se divide en 14 serotipos de RV del grupo A de origen animal y humano siendo:

Vp7(G (Glicoprotenas)). Serotipos que infectan a Humanos (G1, G2, G3, G4, G5, G6, G8, G9, G10 y G12)
20 Genotipos diferentes de VP4 (P) 10 Serotipos

Vp4(P(Prot. sensible a la Proteasa)) Serotipos en Humanos (P1A, P1B, P2A, P3, P3B, P4, P5 y P8)

Replicacin Viral

ENDOCITOSIS

PENETRACIN DIRECTA

NCLEO

Replicacin viral (Penetracin directa)

ROTAVIRUS
4 Nuevos virus deja a las clulas infectadas para invadir a las sanas 5 Las clulas epiteliales mueren y los fluidos salen del cuerpo

VP4

Hemaglutinina viral

Clula Epitelial

Transcriptasa viral.

El virus se multiplica y produce la toxina

Patogenia
Respuesta

Inmune

Disminucin en la superficie de absorcin

11 H. a 3 das
(Incubacin)

Alteracin de la integridad epitelial

Deficiencia de disacridos

Cuadro Clnico
7 a 10 Das

14 o ms das

Intolerancia disacridos 5-8 Das

2-3 Das

2-3 Das

Diagnstico de Laboratorio
Serologa

Inmunofluorescencia

ELISA Aglutinacin en Latex

Contrainmunoelectroforesis

Reaccin de fijacin del complemento

Diagnstico de Laboratorio
Otros recursos
Inmunoelectromicroscopa. Hibridacin para deteccin de heces. Sondas de oligonucletidos acopladas a radioactividad. Cultivo celular Estudio de reaccion de polimerasa en cadena.

Identificacin de ARN segmentado

Control
Control inicial

Control Especfico

2 Meses de Edad 4 Meses de Edad 6 4 Meses de Edad

Epidemiologa
65-67% ---1ao de edad 35% entre 2 y 3 aos de edad Templados: EE.UU, Mxico, Finlandia, Gran Bretaa (Fros o Secos) Tropicales: Brasil, Venezuela varios pases de frica (todo el ao)

Caracas: En todo el ao. 85% -- 1 ao 14% -- 2 aos 1% 3 aos Valencia Edo. Carabobo Estacionaria. 67% -- 1 ao 26% -- 2 aos 7% 3 aos

Electroforesis
Vocablos griegos lektron (mbar) y hace referencia a la electricidad phoros (llevar o trasladar)

Etimolgicamente puede definirse como:

Un transporte o traslado bajo la accin de la electricidad. Ms propiamente, la electroforesis se define como un mtodo analtico para la separacin de molculas segn la movilidad de stas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use.

Arne Tiselius (1937)

Desventajas Dio paso a aquellos que Escaso poder de usaban un soporte slido o resolucin Exigir gelatinoso gran cantidad Embebido en la solucin de muestra, amortiguadora Muy laborioso de pH Sobre el que ocurra la En la prctica no separacin permitir laelectrofortica separacin de los en total decomponentes los bandas o zonasde discretas componentes la mezcla

Electroforesis De Frentes En Movimiento o moving boundary electrophoresis

Fundamento

El movimiento de las molculas est gobernado tambin por dos fuerzas adicionales; inicialmente la friccin con el solvente dificultar este movimiento originando una fuerza que se opone, por otro lado las molculas poseen energa cintica propia por lo que tienden a moverse en forma aleatoria o movimiento browniano

Tipos de Electroforesis
Electroforesis Libre

Disoluciones o suspensiones. Fue desarrollada por Arne Tiselius en 1937. Desesuso, ya que al ser un fluido el medio en el que se desarrolla, tiene poco poder de resolucin.

Electroforesis en Zona

Fuente de alimentacin. Cubeta. Soporte electrofortico.

Tipos de Electroforesis de Zona

ELECTROFORESIS EN PAPEL ELECTROFORESIS EN GEL

El revelado se realiza empleando los mismos mtodos que los utilizados en cromatografa sobre papel, mediante la accin de los colorantes adecuados

La separacin no se produce slo por las diferentes cargas de las molculas, sino tambin por las diferencias de tamao.

Tipos de Geles
Geles de agarosa Geles de poliacrilamida

Este gel est constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras polimricas embebida en gran cantidad de medio lquido, que retarda el paso de las molculas, se usa usualmente para separar molculas grandes de alrededor 20.000 nucletidos.

Se forman por polimerizacin de la acrilamida por accin de un agente entrecruzador, es qumicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rpida y reproducible

La Electroforesis en Geles de Poliacrilamida

TIPOS

1. Electroforesis en gel en una dimensin (continuo o discontinuo) a. PAGE-nativa b. PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE) c. Isoelectroenfoque 2. Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)

PAGE-nativa

SEPARAR

EN FUNCIN

Carga intrnseca de las protenas

PAGE-desnaturalizante (SDS-PAGE)
Tamao (MM)
SEPARAR
EN FUNCIN

D. PM de las protenas
Detergentes (SDS, sodio dodecil sulfato) Catropos (urea) agentes reductores (2- mercaptoetanol, DTT).

Isoelectroenfoque

DESPLAZAMIENTO

Gradiente de pH

Las molculas anfotricas, como los aminocidos, se separan en un medio en el que existe una diferencia de potencial y un gradiente de pH. Entre ambos se establece un gradiente de pH tal que las molculas que se han de separar tenga su punto isoelctrico dentro del rango La migracin les conducir a una regin dnde el pH coincidir con su punto isolctrico, tendrn una carga neta nula y se detendrn. De esta forma las molculas amfotricas se sitan en estrechas bandas donde coincide su punto isoelctrico con el pH.

Electroforesis Bidimencional

SEPARAR

Segn

Punto isoelctrico Peso Molecular

Isoelectroenfoque Electroforesis En Poliacrilamida

Punto isoelctrico

Peso Molecular

La Electroforesis Capilar (CE)

Detector De las especies portadoras de Electroferograma--- Muestra el una carga elctrica global, bajo registro de la composicin de el efecto de un campo elctrico y la muestra. en contacto con un soporte (medio de desplazamiento) Solo las especies que se adecuado. dirigen hacia el ctodo sern detectadas. Solucin Buffer

SEPARAR MIGRACIN

Mtodos de Deteccin
UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a travs del capilar en una pequea zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco. Deteccin por Fluorescencia resulta ms sensible si se emplea una fuente lser muy intensa, asociada a menudo a un procedimiento de preformacin de derivados de los analitos portadores de un fluorforo.

Factores que Afectan la Electroforesis

CAMPO ELCTRICO MUESTRA TAMPN

SOPORTE

Resultados

Muestras rotapositivas que mostraron el patrn tpico de ARN de