MUTACIONES

Mutaciones
La definicin que dio De Vries (1901) de la mutacin es cualquier cambio heredable en el material hereditario

Mutacin Modificacin del Genotipo: puede ser o no un mutante Modificacin del Fenotipo: mutante

Niveles mutacionales
Mutacin gnica: mutacin que afecta a un solo gen. Mutacin: cromosmica: mutacin que afecta a un segmento cromosmico que incluye varios genes. Mutacin genmica: mutacin que afecta a cromosomas completos (por exceso o por defecto) o a juegos cromosmicos completos.

Efectos de la mutaciones
A nivel gentico A nivel morfolgico A nivel fisiolgico

Mutaciones gnicas
Sustituciones de bases: cambio o sustitucin de una base por otra en el ADN. Transiciones: cambio de una purina por otra, o de una pirimidina por otra Transversiones: cambio de una purina por una pirimidina (Pi) o viceversa Inserciones y deleciones: se trata de ganancia y prdida de nucletidos Duplicaciones: es la repeticin de un segmento de ADN del interior de un gen. Inversiones: un segmento de ADN del interior de un gen se invierte, para ello es necesario que se produzcan dos giros de 180, uno para invertir la secuencia y otro para mantener la polaridad del ADN. Transposiciones: un segmento de un gen cambia de posicin para estar en otro lugar distinto del mismo gen o en otro lugar del genoma.

 Mutacin espontnea: se produce de forma natural o normal en los individuos. Mutacin inducida: se produce como consecuencia de la exposicin a agentes mutagnicos qumicos o fsicos.

Mutaciones espontneas
Las principales causas de las mutaciones que se producen de forma natural o normal en las poblaciones son tres:

Errores durante la replicacin.:

Lesiones o daos fortuitos en el ADN.

Los elementos genticos transponibles.

Errores en la replicacin

Errores en la replicacin:Tautomeras

Las BN se encuentran en forma cetnica y y cuando pasan a su forma tautomrica enlica o imino.
Las formas tautomricas muestran relaciones de apareamiento distintas: A*-C, T*G, G*-T y C*-A y produce transiciones.

Error en replicacin: Mutaciones de cambio de fase

Se trata de inserciones o deleciones de uno o muy pocos nucletidos. Estas mutaciones se producen con frecuencia en regiones con secuencias repetidas. Ej ATATATATATATATAT...., durante la replicacin se puede producir el deslizamiento de una hebra. El deslizamiento de la hlice de nueva sntesis da lugar a una adicin, mientras que el deslizamiento de la hlice molde origina una delecin.

Errores en la replicacin: Deleciones y duplicaciones

Se han detectado con bastante frecuencia en regiones con secuencias repetidas.

En el gen lac I de E. coli se han detectado deleciones grandes que tienen lugar entre secuencias repetidas.
Puntos calientes de LacI

Lesiones y daos fortuitos en el ADN

Despurinizacin: rotura del enlace glucosdico entre la base nitrogenada y el azcar al que est unida con prdida de una Adenina (A) o de una Guanina (G). Como consecuencia aparecen sedes Apurnicas.

Desaminacin: consiste en la prdida de grupos amino. La Citosina (C) por desaminacin se convierte en Uracilo (U) y el Uracilo empareja con Adenina (A) producindose transiciones

Daos oxidativos: El metabolismo aerbico produce radicales superxido, H2O2 que daan el ADN. Transforman la Guanina (G) en 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que aparea con la Adenina

Elementos genticos transponibles

son secuencias de ADN que tienen la propiedad de cambiar de posicin dentro del genoma, se llaman elementos mviles. Por tanto, cuando cambian de posicin se produce un delecin en el sitio y una insercin donde se integran. Se denominan tambin transposones

Transposones en bacterias

Transposn Simple, Secuencia de Insercin (IS): Tienen una secuencia central con informacin para la transposasa y en los extremos una secuencia repetida en orden inverso. Transposn Compuesto (Tn): contienen un elemento de insercin (IS) en cada extremo y una regin central que adems suele contener informaciin de otro tipo como resistencia a antibiticos (cloranfenicol, kanamicina, tetraciclina etc.)

Transposones en Eucariotes
Transposones en maz: Los elementos autnomos: capaces de escindirse de la sede donadora y transponerse. Los elementos No autnomos: son estables, y solamente se vuelven inestables en presencia de los autnomos en posicin trans.

Transposones de levaduras: S. cereviciae Transposones de petunia, soja Los Retrovirus tambin pueden ser considerados como elementos genticos mviles

Transposones en mamferos
Retrovirus endgenos: semejantes a los retrovirus, no pueden infectar nuevas clulas y estn restringidos a un genoma, pero pueden transponerse dentro de la clula

Retrotransposones: Contienen genes para la transcriptasa inversa y pueden transponerse. Un ejemplo, son los elementos LINE-1 (elementos largos dispersos) en humanos y ratones

Retropseudogenes: carecen de genes para la transcriptasa inversa y por consiguiente son incapaces de transponerse de forma independiente, aunque si pueden cambiar de posicin en presencia de otros elementos mviles

Transposones de mamferos

Agentes Fsicos: UV, luz infrarroja UV: Causa dimerizacin de timinas adyacentes

Efectos de la luz UV

Dmeros de timina

Anlogos de bases
Remplazan una base determinada: el 5-Bromouracilo (5BU) es anlogo de la Timina (T) y puede remplazarla. El 5BU en su forma cetnica empareja con la Adenina (A) mientras que en su forma enlica (5BU*) empareja con la Guanina (G).

La 2-Aminopurina (2AP) es anlogo de la Adenina (A) y puede remplazarla. La 2AP aparea con la Timina (T) pero en su forma imno (2AP*) empareja con la Citosina (C). Esta alteracin produce transiciones.

Agentes Alkilantes
El etilmetanosulfonato radicales etilo transiciones GCAT. (EMS): aade y produce

La nitrosoguanidina (NTG) aade radicales metilo y produce tambin transiciones GCAT. Hidroxilamina (HA): produce especficamente transiciones GCAT. Iones bisulfito y cido nitroso: producen desaminacin. El cido nitroso transforma la Citosina (C) en Uracilo (U), el Uracilo (U) empareja con la Adenina (A) produciendo transiciones. La desaminacin de las Adenina (A) la convierte en hipoxantina (H) que empareja con la Citosina (C) produciendo transiciones

Agentes intercalantes
Proflavina, Naranja de acridina y Compuestos ICR: son compuestos con estructuras planas que se meten o intercalan entre las bases nitrogenadas del ADN produciendo adiciones o deleciones de un solo par de nucletidos.

Dao en la replicacin
Estos mutgenos daan muchas bases nitrogenadas y producen como consecuencia un bloqueo de la replicacin del ADN. La mayora de los compuestos cancergenos producen este tipo de alteraciones Luz ultravioleta (UV): produce dmeros de pirimidinas. Cuando hay dos pirimidinas sucesivas en la misma hlice la luz UV hace que se produzca un puente de hidrgeno entre ambas. Los ms frecuentes son los dmeros de Timinas. Aflatoxina B1: se une a la Guanina (G) modificndola de manera que la Guanina modificada se separa del azcar al que estaba unida . Es un potente carcingeno. Benzopireno: es un producto resultante de los motores de combustin y es un potente carcingeno.

Mutaciones
Mutacin silenciosa: Tripletes que codifican para el mismo aminocido: AAG(arg)CGG(arg) Mutacin cambio de sentido: Aparece un triplete que codifica para otro aa. Mutacin sin sentido: Aparece un triplete de terminacin o FIN: CAG(gln)UAG(FIN) Mutacin cambio de fase o pauta de lectura: Adicin o delecin de un nico par de nucletidos o de varios pares de nucletidos Una mutacin silenciosa altera la secuencia de ADN sin cambio del fenotipo. Otras mutaciones cambian lasecuencia de aminocidos sin alterar la funcin de la protena .

Reparacin de la mutacin
Sistemas que evitan los errores antes de que ocurran:
Superxido dismutasa: este enzima convierte los radicales superxido en H2O2 Catalasa: este enzima convierte el perxido de hidrgeno en agua.

Reparacin directa de las lesiones en el ADN:

Fotorreactivacin: repara daos por UV. La Fotoliasa se une ( a obscuras) a dmeros de Timina y cuando se expone a la luz deshace la unin.
Transferasa de grupos alquilo (metilo o etilo): elimina los grupos alquilo producidos por el EMS o por NG. El enzima metiltransferasa transfiere el grupo metilo de la O-6-metilguanina a una cistena de la enzima.

Reparacin por escicin: la accin de enzimas permite eliminar el error

Reversin
Retromutacin (en sentido estricto): consiste en recuperar la secuencia exacta de nucletidos en el ADN. Mutacin supresora: es una mutacin secundaria que restaura total o parcialmente la funcin prdida.

Tipos de mutantes
Las consecuencias son muy variadas: Mutaciones morfolgicas Mutaciones letales Mutaciones condicionales ej. Termosensibles) Mutaciones bioqumicas Mutaciones de prdida de funcin Mutaciones de ganancia de funcin Mutaciones silenciosas

Las consecuencias pueden ser nocivas o beneficiosas

Tipos de mutantes
Hiperproductoras: aumentan un producto Resistentes a temperatura, pH Resistentes a represin por catabolito Resistentes a virus Resistentes a antibiticos y toxinas Mutantes nutricionales

Condiciones de mutagnesis

Tipo de mutgeno
No. Clulas

Dosis del agente mutagnico Tiempo de accin del mutgeno

10 15

20

30

Tiempo (min)

Curva de sobrevivencia

Mutantes nutricionales
Auxtrofos Pierden la capacidad de producir un compuesto escencial para su crecimiento y hay que proporcionrselo: nucletido, vitaminas o aminocidos. No crecen en un MM si crecen en MC

Seleccin de mutantes

Tratamiento mutagnico

Crecimiento en medio completo

Medio completo

Medio mnimo

Auxanografa

Seleccin de auxtrofos

MUTACIN
Karla Marisol Gonzlez Villanueva

 MUTACIN. Es un cambio heredado en la secuencia de bases del cido nucleico que constituye el genoma de un organismo

RECOMBINACIN GENTICA. Proceso por el cual los elementos genticos comprendidos en dos genomas separados son juntados en una sola unidad

 Mientras que la mutacin por lo general trae slo una muy pequea cantidad de cambio gentico en una clula, la recombinacin gentica implica generalmente cambios mucho ms grandes.

Importancia de la gentica microbiana

Comprensin de la funcin celular microbiana Herramienta de estudio relativamente simple para los fenmenos genticos Los m.o. se usan para el islamiento y duplicacin de genes especficos de otros organismos- CLONACIN MOLECULAR

Uso de microorganismos genticamente modificados en procesos industriales a gran escala-BIOTECNOLOGA

Conocimiento de los mecanismos de patogeneidad de los m.o.

Marcadores genticos
Para detectar un intercambio gentico entre dos organismos Son cepas genticamente alteradas con una mutacin o ms en el DNA del m.o.

Mutaciones y mutantes
Mutacin Cambio hereditario en la secuencia de bases del cido nucleico genmico de un organismo (DNA bicatenario) Mutante Cepa que lleva un cambio en la secuencia de bases del cido nucleico. Difiere de su cepa parental en el genotipo, y puede que su fenotipo tambin.

Genotipo Constitucin gentica de un organismo. Forma de designarlo

hisC hisC1, hisC2 para mutaciones

Fenotipo Propiedades observables del m.o. Forma de designarlo

His+ His-

Aislamiento de mutantes
Seleccionables Ej. Un mutante resistente a antibiticos puede crecer en presencia de concentraciones de antibiticos que inhiben o matan a la cepa silvestre Se detectan por Seleccin (instrumento gentico que permite el aislamiento de un mutante a partir de una poblacin ) No seleccionables Ej. La prdida de color en un organismo pigmentado Se detectan por Anlisis o rastreo (screening) de grandes poblaciones de organismos

Rplica en placa
PROTOTROFO AUXOTROFO

Mtodo de seleccin con penicilina

La penicilina mata slo a clulas que estn creciendo. Se aade a una poblacin que est creciendo en un medio que carece del factor requerido por el mutante deseado (se matan slo clulas parentales). Incubacin preliminar en ausencia del factor de crecimiento en un medio con penicilina. Entre las colonias que crecen en las placas (incluyendo algunas derivadas de clulas parentales que han escapado a los efectos del tratamiento con penicilina) se deben encontrar algunos mutantes para ese factor de crecimiento. Seleccin negativa (perjudica al tipo parental o silvestre).

Bases moleculares de la mutacin

Las mutaciones originan cambios fenotpicos en el organismo en la mayor parte de los casos estos cambios son perjudiciales, pero ocasionalmente ocurren tambin cambios que son beneficiosos

mutaciones pueden ser

Espontneas
Radiacin natural que alteran la estructura de las bases del DNA Error en el apareamiento de bases, originando cambios en el DNA replicado (frecuencia de 10-7-10-11 por par de bases durante una ronda replicativa) Un gen (1000 pb), en un cultivo normal de m.o. que contenga unas 108 clulas/rnl es probable que exista algn mutante por cada ml de cultivo.

Inducidas
Mutaciones que implican un par de bases (o unos pocos pares) se denominan a veces mutaciones Puntuales. Pueden ser el resultado de sustituciones, insercin o delecin de un par de bases. El cambio fenotpico derivado de una mutacin puntual depende de dnde ocurra exactamente la mutacin en el gen, qu cambio de nuc!etido tuvo lugar, y qu producto codifica dicho gen (son reversibles).

Mutaciones por Sustituciones de Pares de Bases

Mutaciones silenciosas
Como se indica, un cambio en el RNA de UAC a UAU no tendra efecto aparente porque UAU es tambin un codn de tirosina Casi siempre las mutaciones silenciosas ocurren en la tercera base del codn (arginina y leucina pueden tener tambin mutaciones silenciosas en la primera posicin).

Mutacin con sentido errneo

Los cambios en la primera o en la segunda base de un triplete conducen, mucho ms a menudo, a cambios significativos en la protena Por ejemplo, un simple cambio de base de UAC a AAC ocasiona un cambio en la protena de tirosina por asparragina. El sentido qumico (secuencia de aminocidos) del polipptido resultante ha cambiado. Si el cambio ocurriera en un punto crtico de la cadena polipeptdica, la protena podra ser inactiva o mostrar actividad reducida Puede originar: Mutacin temperatura-sensible o letales condiciones

Mutaciones sin sentido

Otra posibilidad es que la sustitucin d origen a un codn de terminacin, que acarreara la terminacin prematura de la traduccin y por tanto a una protena incompleta que, casi seguro, no sera funcional. El cambio es desde un codn para un aminocido (codn con sentido) a un codn de terminacin (codn sin sentido)

Mutaciones por desfase

Como el cdigo gentico se lee desde un extremo en bloques consecutivos de tres bases, cualquier delecin o insercin de una base origina un desfase en el marco de lectura, y la traduccin del gen resulta completamente alterada. La insercin de una sola base en el promotor de un gen podra originar un notable cambio en la capacidad funcional del gen, pero no sera una mutacin por desfase.

Mutaciones hacia atrs o reversiones

Revertiente: cepa en la que aparece restaurado el fenotipo silvestre que se perdi en el mutante.
revertientes de un mismo sitio, la mutacin que restaura la actividad ocurre en el mismo sitio en que ocurri la mutacin original.
Si la mutacin hacia atrs no slo es en el mismo sitio sino que adems conduce a la secuencia silvestre, se denomina un verdadero revertiente.

revertientes de segundo sitio, la mutacin ocurre en un sitio diferente en el DNA (mutaciones supresoras que restauran el fenotipo original).

Las mutaciones supresoras:

Son nuevas mutaciones que compensan el efecto de la mutacin original. Tipos de mutaciones supresoras: (1) Mutacin en otra parte del mismo gen puede restaurar una funcin enzimtica, por ejemplo una mutacin por desfase del marco de lectura (2) Mutacin en otro gen puede restaurar el fenotipo silvestre (3) La mutacin puede resultar en la produccin de otra enzima que puede reemplazar a la mutada usando una va metablica diferente de la usada por la enzima mutante.

Mutaciones debidas a muchos pares de bases

Deleciones (errores replicativos) de centenares o miles de pares de bases. Pueden afectar a varios genes). Slo se restaura por recombinacin gentica. Inserciones de secuencias especficas de DNA de 7001.400 pb (secuencias de insercin) son un tipo identificable de elemento transponible, pueden revertir por mutacin posterior. Translocaciones, en las que largos trozos de DNA se llevan a una nueva localizacin. Inversiones, en las que la orientacin de segmentos particulares de DNA resulta invertida respecto al resto del DNA.

Velocidades de mutacin
Frecuencias a las que ocurren las distintas clases de mutaciones. Mutaciones espontneas: frecuencias de cerca de 10-6 / generacin (1/1x106 de que aparezca una mutacin en alguna localizacin de un gen dado durante un ciclo celular). Fenmenos de transposicin: aprox. a 10-4. Mutacin sin sentido: 10-6-10-8, porque solo unos cuantos codones pueden mutar a codones sin sentido. Mutantes seleccionables:, la deteccin experimental resulta difcil (incrementar la eficiencia de la deteccin de mutaciones).

Mutaciones en genomas con cido ribonucleico (RNA)

Algunos virus tienen genomas con RNA, que tambin pueden mutar. Velocidad de mutacin en los genomas RNA es alrededor de 1.000 veces mayor que en genomas DNA. Las RNA replicasas no parecen tener actividades correctoras como las de las DNA polimerasas. Los genomas RNA de virus que causan enfermedad pueden mutar rpidamente y presentar una poblacin en constante cambio y evolucin.

Mutgenos
Gran variedad de agentes qumicos y fsicos puede inducir mutaciones. Principales tipos y acciones.

Mutgenos qumicos

Muestran propiedades de apareamiento errneas

 Los agentes alquilantes como la nitrosoguanidina, son poderosos mutgenos y generalmente inducen mutaciones con frecuencia mayores que los anlogos de bases. Las acridinas, son molculas planas que actan como agentes intercalantes. Por tanto la acridina puede inducir mutaciones por desfase

Radiacin
Radiacin mutagnica en dos categoras principales: ionizantes y no ionizantes (electromagnticas)

 Bases pricas y pirimidnicas absorben intensamente radiacin ultravioleta (UV), mximo de 260nm para DNA y el RNA.
La muerte de las clulas por radiacin UV se debe a su accin sobre el DNA Induccin de dmeros de pirimidina en el DNA. Lmpara microbicida que emite grandes dosis de radiacin UV en la regin de 260 nm. Produce un 90-95% de muerte en la poblacin, La radiacin UV es muy til en el aislamiento de mutantes de cultivos bacterianos.

Radiacin ionizante
Rayos de longitud de onda corta:
Los rayos-X Los rayos csmicos y Los rayos gamma.

Causa la ionizacin del agua y de otras sustancias, y se producen indirectamente efectos mutagnicos debido a esta ionizacin. Entre las potentes especies qumicas formadas por la radiacin ionizante se encuentran radicales libres, el ms importante de los cuales es el radical hidroxilo OH-.

Los radicales libres reaccionan en la clula con macromolculas, como el DNA y las inactivan. La radiacin ionizante se usa con frecuencia para inducir mutaciones en animales y plantas.

Mutaciones que surgen de la reparacin del DNA

Algunas veces el proceso mismo de reparacin origina la mutacin. de A menudo, el mismo dao en el DNA puede inducir siste-mas de reparacin del DNA. Un mecanismo celular complejo, el sistema regulador SOS, se activa como consecuencia de daos en el DNA y pone en marcha un ciertos procesos de reparacin del DNA. En el sistema SOS ocurren algunas reparaciones del DNA en ausencia de molde con instrucciones, lo que ocasiona la creacin de muchos errores y, por tanto, de muchas mutaciones.