MODIFICACIN

DE LA INFORMACIN

GENTICA

Seminario 4

Universidad nacional de Trujillo Facultad de Qumica

Escuela de Ing. Ambiental

La supervivencia de una especie Por lo tanto La habilidad de los genes

Variabilidad gentica

Que posibilita una adaptacin optima en condiciones ambientales cambiantes

En cambio Un individuo

mutar

Volver a combinarse

Estabilidad gentica

Supervivencia de una especie

Una clula individual (tomando la parte por el todo)

Muchas mutaciones no tienen consecuencias, pero en el peor de los casos pueden ser fatales para la clula individual e incluso para el organismo interior. Si fallan estos sistemas complejos SIST. DE CORRECION Y DE REPARACION una nica vez, se produce una mutacin determinada. Para ello la clula cuenta con amplio arsenal de posibilidades de reparacin, encargadas nica y exclusivamente de detectar de forma rpida los cambios de ADN y eliminarlos.

Realiza grandes esfuerzos para luchar contra las mutaciones

Hemos visto ya los mecanismos con que la clula se esfuerza en maximizar la precisin en la replicacin de ADN sin embargo tambin hay cambios fortuitos en el ADN, independientes de la replicacin

mecanismos moleculares bsicos de la modificacin y reparacin de ADN: LA TRANSICIN Y

LA TRANSVERSIN SON SUSTITUCIONES FRECUENTES
Estas sustituciones

LAS MUTACIONES

Se originan en los genes frecuentemente por el cambio de uno o mas nucletidos.

espontanea es decir sin influencias externas

Inducidas por compuestos qumicos

radiacin

Reemplaza una base purinica por otra purinica o una base pirimidinica por una segunda.

A A

G G

T T G

C C A

 Hay dos tipos de transiciones de nucleotidos. Una forma tautomera de G (marcado con *) puede emparejarse durante la replicacin con T en lugar de C (en medio) y generar en la ronda de replicacin siguiente (abajo) A-T (marcado coloreado) en lugar de G-C en una de las hebras hijas.

Sustituyen una base purinica por base pirimidinica o viceversa.

Los agentes mgatenos pueden inducir cambios en el ADN mediante MODIFICACIONES QUIMICAS DE BASE. Por ejemplo: la FUERTE BASE HIDROXILAMINA puede reaccionar con CITOSINA . el derivado de CITOSINA que se obtiene hibrida con ADENINA en lugar de con GUANINA, de modo que se produce una transicin C-G T-A. algunos mgatenos terribles son los AGENTES ALQUILANTES , que introducen grupos metil o etil en un grupo hidroxilo de la posicin 6 de guanina. La O6METILGUANINA puede formar un apareamiento de bases con timina en lugar de citosina, de modo que aqu se produce una transicin C-G T-A . Por lo contrario la O4-metil guanina puede aparear con guanina. Tambin reaccionan con guanina los cancergenos como por ejemplo el benzopireno, que se une al anillo de

Una mutacin puntual en una seccin gentica codificadora puede dar lugar a diferentes resultados.

Una mutacin en sentido equivocado (missense): se

origina un triplete que codifica para otro aminocido, por lo que se instala un aminocido incorrecto. Una mutacin neutra: el triplete cambiado codifica el mismo aminocido y , por lo tanto, el producto gentico permanece inalterado; la mutacin es neutra o silenciosa.

La mutacin sin sentido (nonsense): la sustitucin del

nucletido genera un codn de parada, de modo que se obtiene un producto gentico acortado.

 En principio existen dos formas de subsanar los errores de ADN mutado: reconstruirlo o sustituirlo. Las clulas siguen ambas estrategias. Es mas sencillo entender los procesos en los procariotas (como en muchos otros casos) trataremos primero los sistemas de reparacin bacterianos, aun que veremos que las clulas de los mamferos utilizan sistemas similares .

 la enzima DNA-FOTOLIASA consigue la proeza de volver a separar el anillo de ciclobutano de los dmeros de timina que se haban enlazado por efecto de la radiacin UV. La enzima reconoce los lugares defectuosos en la hebra y abre los enlaces C-C del anillo cclico butano con la ayuda de dos cofactores que absorben la luz. Cuando hay incidencia de fotones, el compuesto cromoforo 5,10metilentetrahidrofolato transfiere la energa de la luz al nucletido de flavina y adenina reducido( FADH+) que a su vez transfiere su electrn libre al anillo de ciclobutano. Con la formacin de radicales libres como producto intermediario se produce la rotura del dmero de timidita; con ello se restituye el FADH+. El sistema de la ADN- fotoliasa se presenta en los procariotas y muchos eucariotas: en los humanos en cambio, no existe un sistema de fotorreactividad.

LOS SISTEMAS DE REPARACIN ELIMINADORES ASEGURAN LA INTEGRIDAD DE LA INFORMACIN EREDITARIA

Lamentablemente, para todos los daos del DNA no es posible restablecer el estado original invirtiendo las reacciones; en la mayora de las modificaciones se deben separar las partes defectuosas de la hebra y rellenar los huecos siguiendo las instrucciones de la hebra opuesta. En la replicacin ya Iremos visto la reparacin de escisin de apareamientos errneos.

Un prototipo de reparacin de escisin de nucletidos es el sistema Uvr en el que trabajan en la hebra cuatro actividades enzimticas: nucleasa, helicasa, polimerasa y ligasa.
23.8 Reparacin de escisin de nucletidos en E. Coli.

Otro Sistema de reparacin est especializarlo en la escisin de bases individuales errneas o defectuosas. Por ejemplo, los restos de citosina en un DNA pueden desaminarse espontneamente a uracilo. Hablamos de una reparacin de escisin de bases. Llegados a este punto podemos por qu el DNA, a diferencia del RNA, Rechaza" la base Uracilo.

Uracilo DNA-glicosidasa

Endonucleasa AP

Desoxirribosa-fosfodiesterasa

DNA-POLIMERASA DNA-LIGASA

Figura: 23.9. Reparacin de escisin de bases con uracilo-DNA-glicosilasa.

Xerodermia pigmentosa
La xerodermia pigmentosa o xerodermia pigmentatia, tambin abreviada XP, es una rara enfermedad hereditaria de la piel que tiene carcter autosmica recesiva y en donde el homocigoto recesivo muestra una marcada tendencia a desarrollar cncer de piel como consecuencia de la exposicin al sol; los heterocigotos son frecuentemente asintomticos, es decir, no desarrollan la enfermedad. Est causada por un mal funcionamiento de los mecanismos de reparacin del ADN, y fue la primera enfermedad de este tipo conocida.

LA RECOMBINACIN DEL DNA APORTAN VARIEDAD GENTICA

Si se transfiere un segmento en el interior de un cromosoma o entre dos cromosomas diferentes, hablamos de una translocacin. Si se crea una nueva molcula de DNA a partir de segmentos de DNA de origen diferente estamos ante una recombinacin. El intercambio de segmentos familiares (homlogos) entre dos hebras de DNA se denomina recombinacin homloga. Este proceso transcurre sobre todo durante la divisin sexual, la meiosis. En ella se crean clulas sexuales (los gametos) con un conjunto de cromosomas haploides (figura 23.10).

Figura 23.10 Proceso en la meiosis

Mediante los procesos de recombinacin homloga y no homloga se pueden reorganizar genes completos. De este modo contribuyen en gran medirla a la variabilidad gentica dentro de una especie. Por otra parte las clulas y los organismos utilizan la recombinacin homloga en los procesos de reparacin posreplicativa y para el reordenamiento de las secuencias de DNA que participan en el desarrollo y la diferenciacin. cruzamiento de hebras (tambin llamado cruzamiento de Holliday)

Figura 23.12. Cruzamiento de Holliday.

Regin heterodplex

LA SEPARACIN DEL CRUZAMIENTO DE HEBRAS PUEDE REALIZARSE POR DOS VAS

El cruzamiento de hebras puede moverse a lo largo del DNA en un sentido o en el otro; esta fase se denomina migracin de rama. De este modo se consigue un avanzado intercambio de las hebras entre los dos genes. Cmo pueden disolverse estos "nudos gordianos" que ya no admiten replicacin?

Figura 23.13. Disolucin del cruzamiento de hebras

Regin heterodplex no recombinante

Regin heterodplex recombinante

RECOMBINACIN HOMLOGA

Intercambia secciones de genes entre pares de cromosomas sin cambiar el orden de estos genes en los cromosomas.

Supone la reorganizacin de un gen o de un grupo entero de genes dentro de los cromosomas.

RECOMBINACIN DIRIGIDA Y TRANPOSICIONAL

En este proceso se elimina, transfieren o multiplican segmentos de DNA. El ejemplo ms conocido es la reordenacin programada de los genes de los anticuerpos durante el desarrollo del sistema inmunitario.

SISTEMA INMUNOLGICO DE LOS MAMFEROS

Reconoce estructuras moleculares (antgenos)

Protege al organismo de ellos reconociendo, uniendo y ordenando selectivamente estos antgenos exgenos para ello Producen anticuerpos (inmunoglobulinas), que reconocen y se unen a antgenos especficos.

LINFOCITOS B

El organismo humano dispone de ms de 1011 proteinas anticuerpos diferentes, para tener siempre una inmunoglobina adecuada a mano y as poder reconocer prcticamente cualquier antgeno.

La enorme diversidad en los anticuerpos se obtiene por el reordenamiento de un nmero restringido de segmentos de genes durante la diferenciacin de linfocitos. Dos tipos de cadenas ligeras (K, ) compuestas Cinco tipos principales de cadenas pesadas (, , , y ). Inmunoglobulina de tipo G (IgG)

LAS INMUNOGLOBINAS (IG) HUMANAS

cada cadena contiene una regin variable que determina la especificidad del anticuerpo; aqu se diferencia notablemente la estructura primaria de un anticuerpo a otro.

A continuacin sigue una regin constante, en la que la secuencia de anticuerpos diferentes de un mismo tipo es similar o incluso idntica. Cuatro segmentos de genes contienen la informacin completa para una cadena ligera: L (en ingls leader),

V (variable),

J (joining)

C (constant).

Inmunoglobulina de tipo G (IgG)

El nmero de linfocitos B presente en un organismo humano es elevado: cada una de las aproximadamente 1012 clulas inmunitarias produce un nico tipo de anticuerpo de especificidad definida.

El segundo pilar del sistema inmunitario lo constituyen los linfocitos T, que gracias a sus receptores de clulas T reconocen los antgenos en la superficie de las clulas destino. Las clulas T utilizan estrategias similares para diversificar al mximo sus receptores de clulas T.

Los receptores reconocedores de antgenos en la superficie de los linfocitos T, tambin llamados receptores de clulas T

constan tpicamente de dos cadenas (, ) que cruzan la membrana plasmtica constan

Parte amino terminal variable, que se une al antgeno

Segmentos carboxiterminal constantes, que llegan a las regiones transmenbrana.

Mientras que la recombinacin homloga suele aparecer en la meiosis y deja sus huellas en los gametos haploides de los microbios, la recombinacin dirigida reordena el DNA en las clulas diploides del organismo, por lo que tambin se le conoce como RECOMBINACIN SOMTICA. Aqu se ve por primera vez la plasticidad del DNA en un organismo.

Otra demostracin de la dinmica de los genomas es la aparicin de elementos genticos mviles, los transposones, que a modo de transbordadores transportan el material gentico entre los cortes de DNA. Son capaces de cambiar grupos genticos enteros. Segn el tipo de productos intermedio diferenciamos entre transposiciones con intermediarios de ADN o ARN. Los transposones aparecen en clulas eucarioticas y procarioticas.

La caracterstica principal que particulariza a los retrovirus es que su genoma (es decir, su material gentico) est constituido por ARN en lugar de ADN, al contrario que en el resto de virus. Para infectar a una clula, los retrovirus deben traducir su ARN en ADN e insertarlo dentro del ADN propio de la clula a infectar. Para conseguirlo usan una enzima especfica, LA TRANSCRIPTASA INVERSA. Normalmente, en las clulas, la informacin gentica va del ADN de los cromosomas a las protenas, va ARN mensajero. En los retrovirus se produce la transcripcin retrgrada, del ARN al ADN, por accin de la transcriptasa inversa. De ah el origen de su nombre. Entre los retrovirus se conocen tres gneros: oncovirus, lentivirus y espumavirus. Algunos oncovirus son reponsables directos de algunos procesos tumorales y leucemias. Sin embargo, no todos los retrovirus generan cncer; as el VIH-1 (virus de la inmunodeficiencia humana), causante del sida, no tiene ningn efecto oncognico en los humanos.

TERAPIA GNICA
posibilita el tratamiento de las enfermedades hereditarias
La terapia gentica es la tcnica que permite la localizacin exacta los posibles genes defectuosos de los cromosomas y su sustitucin por otros correctos, con el fin de curar las llamadas enfermedades genticas, entre las que se encuentran muchos tipos de cncer.
Los inicios de la terapia gnica se realizaron con ratones, mediante tcnica del ADN recombinante. Con la introduccin de estos transgenes se puede lograr la identificacin de zonas concretas del material gentico para llevar a cabo su clonacin, con el fin de que solo se vean afectadas un tipo especfico de clulas.

Tipos de terapia gnica

Terapia Gnica de Clulas Somticas busca introducir los genes a las clulas somticas y as eliminar las consecuencias clnicas de una enfermedad gentica heredada o adquirida.
Terapia in vivo: la transformacin celular tiene lugar dentro del paciente al que se le administra la terapia. Terapia ex vivo: la transformacin celular se lleva a cabo a partir de una biopsia del tejido del paciente y luego se le trasplantan las clulas ya transformadas.

Terapia Gnica de Clulas Germinales se realiza sobre las clulas germinales del paciente, las clulas del embrin temprano, los vulos, los espermatozoides o sus precursores. *Cualquier gen introducido en estas clulas estara presente en el individuo y sera transmitido a su descendencia. por cuestiones ticas y jurdicas, sta clase de terapia gnica no se lleva a cabo hoy en da.

Limitaciones a la Terapia Gnica en Humanos

El primer objetivo de la identificacin y clonacin de genes responsables de enfermedades de origen gentico es el diagnstico precoz, prenatal o postnatal. La identificacin de genes humanos mediante tcnicas de ingeniera gentica 1.- Va farmacolgica, para intentar compensar las consecuencias fisiolgicas del disfuncionamiento celular 2.- Va gentica, buscando la introduccin de un gen forneo -el transgn- en las clulas afectadas, para que sustituya al gen anmalo. Este enfoque es el que corresponde a la terapia gnica

imposibilidad tcnica de introducir el material gentico en el mismo sitio donde estn los genes anmalos.
La mayora de vectores deja los nuevos genes extracromosmicos por lo que el efecto se pierde rpidamente por digestin del DNA o por que en las mitosis sucesivas el nuevo material no se incorpora a los cromosomas. limitacin principal es el corto tiempo de expresin de la protena nueva. la clula termina evitando la trascripcin y traduccin del gen modificado y el efecto teraputico desaparece. la reaccin inmune contra el nuevo producto o la activacin de otros sistemas gnicos

SCID
sndrome de inmunodeficiencia severa combinada. Es una enfermedad hereditaria monognica El SCID puede desarrollarse por falta de adenosinadesaminasa (ADA), provocada por mutacion nonense . La falta de ADA provoca acumulacin intracelular de desoxiadenosina trifosfato (dATP) que inhibe la ribonucletido reductasa, generando asi una deficiencia en nucletidos, afectando a largo plazo a la produccin de los linfocitos T SNTOMAS DE LA SCID Neumona - infeccin de los pulmones. Meningitis - infeccin del encfalo. Sepsis - infeccin de la sangre. Infecciones crnicas de la piel. Infeccin por honguillos en la zona de la boca y del paal. Diarrea. Infeccin del hgado.

La enfermedad hace que el nio tenga su sistema inmunolgico deprimido o no lo tenga. el cuerpo del nio no puede combatir las infecciones. A este proceso patolgico tambin se lo conoce como el sndrome del "nio en la burbuja" porque la vida en el entorno normal puede ser fatal para estos nios.

terapia gnica en el tratamiento del SCID

trasplante de mdula sea (BMT)

EL SER HUMANO DESCUBRE SU PROPIO GENOMA

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DEL ADN AL SER HUMANO

1. Las cuatro letras letras qumicas o bases: la adenina (A) que hace par con la timina (T) y la citosina (C) que hace par con la guanina (G). 2. La doble hlice de ADN Los pares de bases A-T y C-G constituyen los escalones de la espiral de ADN, elemento bsico de todo ser vivo conocido. Al recorrer "de arriba abajo" la doble hlice, se puede "leer" el cdigo de la vida.. 3. Genes Los genes son secuencias especiales de cientos o miles de pares de bases que constituyen la matriz para la fabricacin de todas las protenas que el cuerpo necesita producir y determinan las caractersticas hereditarias de la clula u organismo.

4. Cromosomas oscila entre 30.000 y 120.000. Todos ellos, conjuntamente con el restante material gentico de deshecho, se distribuyen en "cpsulas" llamadas cromosomas. Cada ser humano cuenta con 23 pares de cromosomas, proveniendo un juego del padre y otro de la madre. 5. Ncleo y clula El total de 46 cromosomas humanos se encuentran en el ncleo de cada clula del cuerpo humano (excepto las clulas reproductoras, que slo tienen la mitad). De esta forma, la mayora de las clulas contienen toda la "frmula" para crear un ser humano. 6. Cuerpo Cada una de las clulas de nuestro cuerpo se "especializa". El resultado: la formacin de sangre, msculos, huesos, rganos. El cuerpo humano est integrado por un total de 100 billones (millones de millones) de clulas

DEL ADN AL SER HUMANO

Es la totalidad de la informacin gentica almacenada en el ADN de las clulas. Cada persona tiene su propio genoma, el cual guarda una gran similitud (99,8%) con todos los de su propia especie y tan solo se diferencia de la del chimpanc en algo ms del 1%. Esa informacin, que se encuentra almacenada en todas y cada una de sus clulas y que le define e identifica como ser nico e independiente, es lo que conocemos como su patrimonio gentico o genoma.
El genoma humano, ese gran libro de la vida que contiene las instrucciones que determinan las caractersticas fsicas y en parte psicolgicas e intelectuales del individuo

HUGO Human Genome Organization

Esbozo del genoma humano 3200 millones de bases pares -22 autosomas 2 heterosomas (x,y) 30000 genes -22500 genes codificadores de protenas -7500 genes no codificadores de protenas

Funcin biolgica de la protenas del genoma humano, cada categora refleja una funcin celular

Secuenciacin shotgun (escopeta de perdigones)

Secuenciacin shotgun: *aleatoriamente fragmentos de unos 150kbp que sirven para un mapeo aproximado
**1-10 kbp se secuencian individualmente ***Se desarma el genoma completo en fragmentos de 0.4-5 kbp ****Algoritmos---> secuencia completa

25% genoma humano esta compuesto por genes 75% secuencias intergenicas La media densidad gentica es de un gen por 80 kbp en el genoma completo.

Genes codificadores de protenas 75%

En conjunto, las secciones codificadoras de proteinas ocupan apenas algo mas de un 1% del genoma humano

Organizacin del genoma humano: arriba: parte relativa de secuencias codificadoras ---- 226000 exones Abajo: distribucin entre genes codificadores y no codificadores de protenas La anotacin del genoma humano ha contribuido tambin la clasificacin del genoma del ratn y de la rata

Anlisis genticos in silico aporta valiosos conocimientos

Los modelos in silico son programas de software que integran datos de transcripcin, regulacin, traduccin, redes intracelulares de la seal transduccin, activacin transcripcional, genmica, protemica, divisin celular.
In silico es una expresin que significa "hecho por computadora o va simulacin computacional".

Anlisis in silico

La investigacin biomdica se apoya por bancos de datos que guardan los datos estructurales y funcionales de genes, protenas y otras biomolecular

http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

Identificacin de genes in silico con el programa BLAST se pueden comprar las secuencias de DNA obtenidas experimentalmente con los genes humanos conocidos

Conclusiones ms importantes de los ensayos in silico: 1. Las plataformas in silico proporcionan informacin predictiva de ADME-Tox, rpida y rentable, reduciendo los amplios requisitos que son necesarios en estudios in vivo. 2. Se estn desarrollando potentes modelos in silico para integrar, analizar, visualizar, interpretar y manipular datos de diferente naturaleza. 3. Las tendencias actuales en los modelos computacionales incluyen aplicaciones virtuales de estructuras moleculares en 3D, relaciones estructura-actividad, perfiles metablicos, creacin de pacientes virtuales, desarrollo de programas traslacionales basados en genmica y desarrollo de software de nueva generacin para secuenciacin genmica. 4. Las capacidades de las plataformas in silico acelerarn y apoyarn la toma de decisiones en las pruebas ADME-Tox en preclnica.

Localizacin de un rea genmica humana

Mapa SNP
En los SNP se establece la variabilidad gentica entre individuos.
Eficacia y compatibilidad de los medicamentos Sirven como marcadores para identificar enfermedades poligenticas: osteoporosis o Alzheimer Pistas en cuestiones antropolgicas: permiten compara entre los genes y el genoma de especies estrechamente relacionadas: humanos y chimpanc

Mapas SNP y efectividad de un medicamento + = EFICAZ

- = INEFICAZ