MICROSCOPIA

M.C.F. JAVIER LPEZ SIERRA

Microscopio ptico

El microscopio ptico es un instrumento que sirve para aumentar el tamao de un objeto a travs de un sistema de lentes. Puede conseguirse con este mtodo un aumento de hasta 2000 veces.

Microscopio ptico Compuesto

Un microscopio compuesto tiene dos lentes o sistemas de lentes, el objetivo, situado cerca del objeto que se observa, y el ocular, que est colocado cerca del ojo. Combinacin de objetivo y ocular.

40 X OBJETIVO 10 X OCULAR x400

Poder de resolucin

Otra propiedad del microscopio debe ser su Poder Resolutivo. poder resolutivo definicin del objeto. El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la utilizada y de una propiedad ptica de la lente conocida como apertura numrica.

Como la habitualmente est fijada, la resolucin de un objeto es funcin de la apertura numrica: cunto mayor sea la apertura, el objeto resuelto ser ms pequeo. Generalmente entre mayor sea el aumento mayor ser la apertura numrica.

d = poder resolutivo = longitud de onda = semiapertura del objetivo N = ndice de refraccin del medio N sen = ndice de apertura nmerica

El aumento total 500 (A.N.) y 1000 (A.N.). Oculares de gran potencia favorecen el aumento pero disminuyen la luminosidad, nitidez y las dimensiones del campo visual.

Ejemplo:

Un objetivo de aumento x40 y A.N. 0,65 debemos usar un ocular que logre valores comprendidos los aumentos descritos. 500 0,65=325 aumentos 1000 0,65=650 aumentos Con una lente de x40 entonces los valores sern entre x10 y x15

De acuerdo con la teora de la ptica, las mayores resoluciones posibles con un microscopio ptico compuesto permitirn la observacin de un objeto cuyo dimetro sea de 02 m.

X100 2 m

X10

2 mm

La mayor parte de los microscopios usados en microbiologa tienen oculares x10 Y objetivos de aumentos diversos, habitualmente x10 (aumento total x100), x40 (aumento total x400) y x90 o x100 (objetivos de inmersin, aumento total x900 x1000)

La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin y para esto se utiliza un sistema de lentes llamado condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de la luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso.

Otros dos factores relacionados con el sistema de lentes utilizado son: Profundidad de campo significa el espesor de la preparacin enfocada en cualquier momento y es siempre mayor a pequeo que a gran aumento. El rea de campo es el dimetro de la parte de la preparacin que se est viendo es siempre mayor con pequeo que con gran aumento.

Microscopia de contraste de fase

El microscopio de contraste de fases hace posible ver fcilmente pequeas clulas, incluso sin teir.

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En este microscopio la fuente de luz es un cono hueco de luz que pasa a travs de un diafragma anular al condensador. En el objetivo un anillo de contraste de fases desplaza la fase de luz que lo atraviesa en un cuarto de longitud de onda. La luz que pasa retardada atraviesa el anillo y el ojo la ve como luz blanca normal.

Puesto que la imagen depende de las diferencias en el ndice de refraccin de la muestra y del medio circundante, la imagen desaparece si la muestra es sumergida en un lquido de igual ndice de refraccin. Para obtener mejores resultados con el microscopio de contraste de fases es esencial que el sistema ptico est cuidadosamente alineado y se emplea un dispositivo especial, el telescopio controlador, para ajustar el diafragma anular en relacin con el anillo de contraste de fases.

Microscopio ptico de campo oscuro

El microscopio de campo oscuro es un microscopio ptico ordinario cuyo sistema condensador ha sido modificado para dirigir la luz a la preparacin desde los lados de tal modo que slo la luz difractada por la preparacin pasa al ocular y se hace visible.

Treponema pallidium

Microscopio ptico de fluorescencia

Fluorescencia

Microscopio ptico de fluorescencia

Se utiliza para poner de manifiesto muestras que tienen fluorescencia, bien a causa de la presencia en su interior de sustancias materiales fluorescentes o que han sido tratadas con colorantes fluorescentes.

Espectro de luz visible

Fosforescencia

Este tipo de microscopios lleva una fuente luminosa que emite radiaciones ultra-violeta, en el lmite del espectro visible, que atraviesan el material de la preparacin de la misma forma en que lo hace un microscopio ptico comn. Uso del cuarzo. A continuacin del objetivo lleva unos filtros que retienen la radiacin ultravioleta, que es peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiacin visible, que no es peligrosa.

Fluorocromos

Uso de filtros y colorantes

Cuadro comparativo
Micro. Compuesto de campo claro Micro. De Contraste de Fase

Micro. Compuesto de campo oscuro

Micro. De Fluorescenci a

Microscopio electrnico

Para estudiar la estructura interna de los microorganismos es esencial el uso del microscopio electrnico. En este microscopio se utilizan electrones en vez de rayos de luz, y como lentes funcionan unos electroimanes. Todo el sistema opera en el vaco.
e20 m 2 mm

fijacin

deshidrataci n

corte

aclaramient o

inclusin

coloracin

MET

Clula observada con MET

Esquema

Sombreado

Tcnica de sombreado

Microscopio electrnico explorador

Scanning electron microscope El aumento que puede obtenerse oscila entre uno tan bajo como x15 y uno tan alto como x100000, pero slo puede observarse la superficie de un objeto.

Comparacin de mecanismos