Universidad de Chile Programa Acadmico de Bachillerato Biologa C

Prof. Coord. : Enrique Castelln Seccin C-1. Grupo 4 Lunes 4 de Junio de 2012

Avance Tarea n 3: Entrevista a Cientficos Destacados.

Integrantes Rafael Hauge A.- Javiera Hernndez C.- Daniela Hernndez C. - Leonardo Hernndez E. - Dania Hernndez Q. Personaje seleccionado Dr. Kary Banks Mullis Naci el 28 de diciembre del ao 1944 en Lenoir, Carolina del Norte, EE.UU. En 1966 obtuvo la Licenciatura en Ciencias en Qumica en Georgia Institute of Technology; posteriormente en 1972 obtuvo el grado de Ph.D. en Bioqumica en University of California, Berkeley, en la cual se desempeara como conferencista hasta 1973. Seguidamente desarroll diversos estudios de postgrado en reas mdica y farmacutica en otras universidades de EE.UU. En 1979, se une a Cetus Corporation en Emeryville, California como qumico especialista en DNA, donde desarroll la tcnica biotecnolgica Polymerase Chain Reaction (PCR), por la cual fue galardonado con el Premio Nobel en 1993. En la actualidad es un connotado cientfico que realiza consejeras a diversas compaas junto al desarrollo investigaciones y tcnicas biotecnolgicas orientadas al campo Inmunolgico (Ultermune), entre otros. Cabe mencionar, que ha manifestado su oposicin con respecto varios postulados cientficos actuales, como por ejemplo aquel que dice que el VIH produce SIDA. Contexto histrico-geogrfico. La biologa molecular se consolida como disciplina independiente y de gran desarrollo gracias al frtil, y no menos controversial, trabajo de muchos investigadores. Desde los trabajos de Mendel en 1865 hacia adelante se han materializado un gran cmulo de experimentos y observaciones que permitieron establecer, luego de la Segunda Guerra Mundial, que el material hereditario lo constituyen los cidos nucleicos. Consecuentemente, el inters por conocer las vas metablicas de expresin, regulacin, infectividad y otros mecanismos fisiolgicos lograron establecer las bases de las tcnicas biotecnolgicas actuales. En particular, el desarrollo en el rea de aislamiento, clonacin, hibridacin y secuenciacin de genes, y de macromolculas asociadas, desde la

dcada del 70, conforman el antecedente ms directo que permite comprender el desarrollo de la tcnica de amplificacin de DNA Polymerase Chain Reaction (PCR), publicada por el Dr. Kary B. Mullis en 1983. Dentro de estos trabajos es de suma importancia mencionar: en 1955 Kornberg, purific y caracteriz la enzima DNA polimerasa I de E. coli y, a mediados de los aos 70, Sanger y colaboradores idearon un mtodo de secuenciacin de DNA mediante sntesis enzimtica. Ambos trabajos, en suma a la gran cantidad de investigaciones en biologa molecular, permitieron concebir la tcnica de PCR. Contribucin cientfica del personaje En particular, se destaca la creacin de la tcnica de Amplificacin de DNA, Polymerase Chain Reaction (PCR) publicada en 1983, la cual se define como la amplificacin in vitro de un segmento diana de DNA flanqueado por oligonucletidos especficos (secuencias cortas de pares de bases que operan como cebador) gracias a la actividad cataltica de una enzima polimerasa termoestable. El proceso se puede comprender en tres pasos, los cuales se desarrollan en funcin de las variaciones de temperatura: estando la solucin a 95 C,

se provoca la desnaturalizacin del DNA, lo que implica, la separacin de las hebras; seguidamente y gracias al descenso de temperatura a unos 45 C ocurre el Alineamiento de los cebadores con la secuencia molde especfica; para luego, a unos 72C ejecutar la Extensin de la longitud de los cebadores mediante la adicin de nucletidos libres por accin de polimerasa (Rodrguez, 2004). Este procedimiento ocurre de manera cclica, generando 2 copias del segmento de DNA diana (donde n equivale al nmero de ciclos) al cabo de unas horas. Anteriormente, el anlisis de secuencias nucleotdicas especificas resultaba ser un proceso lento y engorroso, dado que la obtencin de productos gnicos se basaba en la sntesis bacteriana a partir de la insercin de material hereditario forneo, lo que implicaba el desarrollo y mantencin de los cultivos y la purificacin de los productos. Por otra parte no todas las muestras de DNA podan ser sometidas a estos procedimientos; por ejemplo, muestras de muy baja calidad en cuanto a conservacin o aquellas de las que se dispone muy poca cantidad de materia. Gracias a la herramienta PCR bastan microgramos de la muestra para realizar su amplificacin. Esta tcnica es considerada una de los inventos ms importantes en el rea tcnica de la biologa molecular, y en general de la biologa, dado que permite la obtencin de billones de copias de un segmento especifico de DNA en horas, con un alto grado fidelidad y sensibilidad. No obstante, por qu se querran billones de copias de un segmento de DNA? Dado lo complejo que resulta obtener una molcula ntegra de DNA de un tejido, contar con muchas copias para su tratamiento abre muchsimas puertas al campo del estudio de los genes (Mullis, 1990). De ah que existan mltiples aplicaciones de esta tcnica, tales como: diagnstico de enfermedades oncolgicas, hereditarias, infecciosas; desarrollo de la investigacin bioantropolgica a partir de muestras antiguas; peritaje forense mediante muestras en muy baja cantidad; desarrollo del programa Genoma Humano, y diversas aplicaciones industriales, entre otras (Rodrguez, 2004). Experimentos clave que le permitieron hacer su contribucin Mullis fue contratado por Cetus para sintetizar oligonucletidos de prueba. En este contexto, su inters recae en el desarrollo de una tcnica que determine fcilmente la identidad de un nucletido en una posicin dada dentro de la molcula de DNA (Mullis, 1990). Tal como lo relata Mullis, la concepcin del procedimiento de PCR ocurri en un viaje por la carretera, no obstante, la idea germinal consisti en modificar la tcnica de
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secuenciacin de DNA didesoxi propuesta por Sanger. Esta tcnica consiste, bsicamente, en la sntesis de una secuencia de nucletidos didesoxi (ddNTPs) por accin de una enzima polimerasa, a partir de clones de una molcula de DNA monocatenaria que sirve de molde, para la cual es necesario aadir un oligonucletido especifico. Mullis, asume no utilizar clones de molculas dado que su objetivo era que los productos de un ciclo de sntesis se convirtieran, al siguiente ciclo, en hebras molde. Otro experimento a considerar fue en respuesta a la pregunta Cmo mejorar la tcnica PCR? Mullis, realiz pruebas comparativas de eficiencia, rendimiento, sensibilidad y fidelidad de dos enzimas DNA polimerasa: Klenow y Taq; la primera se obtiene de E.coli, mientras que la segunda es aislada de una bacteria termfila denominada Thermus aquiaticus. La comparacin de bandas de productos de DNA mediante tcnicas como Electroforesis, permitieron avalar la efectividad de Taq DNA polymerase, puesto que, dado su resistencia a las altas temperaturas, es capaz de replicar con mayor fidelidad y sensibilidad fragmentos de DNA que la enzima Klenow, y dado que no se inactiva a las altas temperaturas, es necesario aadirla slo al inicio de la operacin, de manera tal que, en conjunto con la automatizacin de los ciclos de temperatura, el proceso de amplificacin mediante PCR se hace mucho ms simple y eficiente (Mullis,1988) .

Bibliografa
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