De cuantas maneras se puede ajustar el pH del medio de cultivo?

Se puede ajustar el pH utilizando HCL 0,1 o Na OH O,1N pH se ajusta aadiendo HCl 1N para la obtencin de valores cidos y NaOH 1N para los valores bsicos. Estas soluciones se esterilizan en autoclave en las condiciones habituales (121 C, 20 min) y posteriormente se toman alcuotas de cada solucin para volver a comprobar los valores de pH que se tomarn como definitivos. Las distintas soluciones de TSB se reparten en placas de microtiter en cantidades de 200L por pocillo. En algunos casos se puede ajustar el pH des-pus de la esterilizacin de forma asptica y utilizan-do soluciones cidas (Acido Clorhdrico) o bsicas(Sodio Hidrxido) estriles. En los medios slidos lamedida se hace a 45-50C (el agar todava no ha geli-ficado) mientras que en los lquidos se hace a tempe-ratura ambiente. Los medios cidos (pH<5) puedenpresentar malas gelificaciones debido a la posiblehidrlisis del Agar con la temperatura. Son mediosque no es aconsejable refundirlos, y si es imprescin-dible, es aconsejable aadirles agar. https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:jY4F_LHlg1cJ:www.ucv.ve/fileadmin/user_uplo ad/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparaci%25C3%25B3n_de_medios_de_cultivo.pdf+ como+ajustar+el+pH+en+un+medio+de+cultivo&hl=es&gl=pe&pid=bl&srcid=ADGEESi9JA_Xv7 7hC1jAzADOhagNE7WHEwoLQVgEIyNegLxG_YFPap2dqcT38gyyGN229sp2KjVWwoSKmr9rC0ZciMvcM8prhQocRqRRomjprP4b6oYtf0iZzwVSjdHon3pAjkfE7h&sig=AHIEtbQBCaGz_pCdvgTB1yboLEk3AT344A http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparaci%C3 %B3n_de_medios_de_cultivo.pdf http://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo (pruebas de microbiologia)

DESHIDRATACION DE CELULAS BACTERIANAS continuacin se efecta la deshidratacin utilizando disoluciones de acetona; se inicia el proceso con acetona al 50 % y despus al 70 %, 90 %, 96 % y por ltimo al 100 %. Se realizan tres tratamientos de 10 min para cada concentracin de acetona. Todos los lavados se realizan sin resuspender nunca las clulas, las cuales deben estar bien compactas en el fondo del tubo Eppendorf.

puede ser CO2 compuestos carbonados orgnicos. Se utilizan en la construccin de innumerables molculas necesarias para la clula. Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energa por excelencia en los quimioorganotrofos. Los ms comunes son:

hexosas como glucosa, fructosa, galactosa; pentosas como arabinosa, xilosa, ramnosa; disacridos como lactosa, sacarosa, maltosa; trisacridos como rafinosa; polisacridos como almidn, glucgeno;

alcoholes como glicerol, sorbitol, manitol; y glucsidos como salicina, y esculina. Fuente de nitrgeno: muchos organismos son autotrofos respecto de la fuente de nitrgeno y pueden crecer utilizando molculas sencillas como NO3-, NH3 N2. El nitrgeno es metabolizado para proveer protenas, cidos nucleicos y polmeros de pared. Otros microorganismos pueden incorporar nitrgeno en forma de aminocidos, bases pricas o pirimdicas. ** En ciertos medios de cultivo para quimioorganotrofos, el aporte de nitrgeno es realizado por las peptonas, que son los productos de la hidrlisis cida o enzimtica de protenas de origen animal o vegetal (carne, soja, casena, gelatina, harina de maz y girasol). Esos productos de hidrlisis pueden tener longitud variable, desde aminocidos, hasta dipptidos, tripptidos, polipptidos, albumosas, proteosas. 1. Agentes solidificantes Su agregado al medio de cultivo es opcional. El ms usado:

el agar, es un

polisacrido cido derivado de algas marinas, formado

principalmente por galactosa con un grupo sulfato cada 10 a 50 restos. Suele contener sustancias nutritivas en pequeas concentraciones, y por esto no puede ser utilizado en medios de composicin qumica estrictamente definida destinados a autotrofos. Se usa sin problemas en medios de cultivo complejos para quimioorganotrofos. Se agrega al 1.5-2% en medios de consistencia slida normal, al 0.2-0.3% en medios semislidos o blandos, al 5% en medios de consistencia muy firme para detener el crecimiento de grmenes muy mviles, y al 0% cuando se preparan medios lquidos (caldos). Sus caractersticas: Funde a 80-100C y permanece lquido hasta 50-55C. A 45-55C se pueden agregar suspensiones de clulas sin afectar la viabilidad (supervivencia) de las mismas. Permanece slido a 37C, temperatura de incubacin de la mayora de las bacterias patgenas del hombre. No es txico para las bacterias, ni es degradado por stas.

Utilizado al 1.5-2%, permite el aislamiento de colonias (poblaciones de microorganismos derivadas de una nica clula), lo que resulta imposible en medios lquidos!

Es transparente, lo que facilita la visualizacin de las colonias. Al solidificar, forma una trama suficientemente abierta para permitir la difusin de los nutrientes del medio de cultivo en todas direcciones, y suficientemente cerrada segn la concentracin empleada- para impedir la movilidad de los microorganismos.

Otros solidificantes: Agarosa: es agar muy transparente libre de sulfatos. Se usa intensamente para fines especficos en Inmunologa y Biologa Molecular. Silicagel: es silicato diluido en HCl. Se emplea en medios de cultivo para autotrofos, cuando debe excluirse materia orgnica del medio de cultivo. Gelatina: es una protena obtenida por hidrlisis del colgeno. Fue el primer solidificante usado en Microbiologa, pero es degradado por la mayora de las bacterias (lo comen, por lo que el medio inicialmente slido termina convertido en medio lquido) y la temperatura de incubacin no puede ser mayor a 22C (es el punto de fusin) con lo que cultivos slidos a temperaturas ms altas resultan inviables. Albmina de huevo, suero: a 80C estas protenas coagulan y solidifican el medio de cultivo.

http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0prelicin--00-0----0-10-0---0---0direct10---4-------0-0l--11-1l-50---20-help---00-0-1-00-0-0-11-1-0000&cl=CL3.3&d=HASH01ebc63ab80c0bbb5a17ddab.19.11&hl=1&gc=0&gt=0 (libroo)

http://books.google.com.pe/books?id=2u6Q2XCMDgC&pg=PA25&lpg=PA25&dq=compuestos+nutritivos+que+aporta+el+carbono+,+qu e+le+sirva+a+la+bacteria+como+energia?++microbiologia&source=bl&ots=4TggretKTp&sig=0_txbOBhi_yup454enlAOQ_jH_g&hl=es&sa= X&ei=YE9vTzSFsaCgwfHu4Fs&ved=0CEcQ6AEwBQ#v=onepage&q=compuestos%20nutritivos%20que%20a porta%20el%20carbono%20%2C%20que%20le%20sirva%20a%20la%20bacteria%20como%20e nergia%3F%20-%20microbiologia&f=false (carbono) Como se clasifican los medios de cultivo, atendiendo a los objetivos de su empleo?

os medio de cultivo debidamente preparados debern guardarse previo control deesterilidad en nevera a 4C, hasta el momento del uso. Antes de ser usados debernsacarse de la nevera y esperar para siembra que est a temperatura ambiente

Seguir exactamente las recomendaciones que exige la casa comercial respectiva.Estas instrucciones van adheridas en el exterior del frasco que contienen elmedio. y Usar en la hidratacin del medio de cultivo, solamente agua destilada estril. y Adicionar solamente los componentes determinados por la casa comercial. y En la hidratacin del medio, usar solamente recipientes de vidrio totalmentelimpios. y Pesar exactamente las cantidades indicadas para cada medio en particular. y Vaciar la cantidad de medio de cultivo pesado previamente en un baln omatraz, y agregar la cantidad necesaria de agua, agitando manualmente yprocurando que no queden restos del medio en las paredes del recipiente. y Esta mezcla homognea se llevara a la estufa elctrica hasta la ebullicin y que elmedio quede totalmente transparente. y En general, los medios se esterilizan en el autoclave a 15 lbs. de presin, a 121C(240F) por 15 minutos. Otros medios no se esterilizan como caldo tetrationato,caldo rea. y Para envasar los medios de cultivo en los tubos de ensayo o en cajas de petriestriles, se har lo ms cerca posible a la llama, sin hablar, toser en el momentode la operacin. Los medios se dejarn solidificar o endurecer. y Luego se realizar control de esterilidad en la incubadora por 24 horas a 37C. y Los medios de cultivo que no se utilicen inmediatamente se llevaran a la nevera. y

Para los medios de cultivo inclinados en tubo, como Agar TSI, Agar citrato deSimons y Agar nutritivo, inicialmente cuando el medio sea liquido y estril secoloca en posicin inclinada sobre una compresa hasta que se endurezcan y sellevaran a la refrigeracin para su conservacin.