Revista Cubana de Medicina Tropical

versin impresa ISSN 0375-0760

Rev Cubana Med Trop v.49 n.2 Ciudad de la Habana Mayo-ago. 1997

Centro Provincial de Higiene y Epidemiologa de Ciego de Avila

Pesquisaje de Babesia en trabajadores agropecuarios y donantes en la provincia de Ciego de vila

Dr. MIGUEL SUREZ HERNNDEZ,1 Dra. MAGALY ALONSO CASTELLANO,2 Dr. ROBERTO PELEZ MARTNEZ,3 Dr. BERNARDO SNCHEZ PREZ,4 Dr. JOS R. BRAVO GONZLEZ5 y Lic. ANTONIO SNCHEZ SIBELLO6

1. Mster en Epidemiologa. Centro Provincial de Higiene y Epidemiologa de Ciego de vila. 2. Doctora en Ciencias. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). 3. Especialista de I Grado en Psiquiatra. Facultad de Ciencias Mdicas de Ciego de vila. 4. Especialista de I Grado en Administracin de Salud y en Pediatra. Sectorial Provincial de Salud de Ciego de vila. 5. Especialista de II Grado en Bioestadstica. Investigador Auxiliar. Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour". 6. Licenciado en Economa. Profesor Auxiliar. Instituto Superior Agrcola de Ciego de vila.

RESUMEN
Se realiz un estudio descriptivo de casos, en ste se investigaron 781 sueros con la tcnica de inmunofluorescencia indirecta con antgenos de Babesia bovis y Babesia bigemina en el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. De ellos, 371 provenan de trabajadores agropecuarios y 410 de donantes de la provincia de Ciego de vila. Se parti de diluciones de 1/64, a cada seropositivo se le confeccion una encuesta epidemiolgica para conocer factores de riesgo. Se emple la prueba de diferencia de proporciones para comparar los porcentajes de positivos. Se calcularon las medias geomtricas en ambos grupos y se procedi a su comparacin con la prueba U de Mann Whitney. En los trabajadores agropecuarios se detect un 7 % con anticuerpos contra el 3,9 % de los donantes (p < 0,05). Se encontr mayor circulacin de Babesia bovis que de Babesia bigemina.

Descriptores DeCs: BABESIOSIS/inmunologa; BABESIOSIS/epidemiologa; DONADORES DE SANGRE; BABESIA BOVIS/inmunologa; BABESIA/inmunologa; TECNICA DEL ANTICUERPO FLUORESCENTE INDIRECTA/mtodos; ENFERMEDADES DE LOS BOVINOS/sangre; ENFERMEDADES DE LOS TRABAJADORES. La babesiosis es causada por varias especies del gnero Babesia que afectan diferentes animales domsticos y salvajes, as como al hombre. Las especies que ms provocan afecciones en ste son: microti, bovis, divergens y bigemina.1-3 Los reservorios de Babesia microti son los roedores y de Babesia bovis, divergens y bigemina fundamentalmente, el ganado bovino.4-8 En Estados Unidos de Amrica se han identificado reas endmicas de Babesia microti.9 En Amrica Latina, Babesia bovis y bigemina son endmicas de bovinos en muchos pases y representan un serio problema para la salud animal.10,11 En Cuba se ha detectado la presencia de Babesia bovis y bigemina que infectan frecuentemente la sangre de los bovinos.12 En la literatura cubana revisada no hemos encontrado el reporte de Babesia microti y de Babesia divergens. La babesiosis humana ha sido reportada en los Estados Unidos de Amrica, en varios pases de Europa y en frica. Se ha demostrado la presencia de anticuerpos en individuos asintomticos en diferentes estudios serolgicos.13-16 El hombre adquiere la entidad por medio de la picadura de las garrapatas y, en menor escala, por las transfusiones.17,18 Se ha demostrado que Babesia bovis, divergens y bigemia afectan ms a los pacientes esplenectomizados, los ancianos y los inmunosuprimidos, mientras Babesia microti puede presentarse ms en los inmunocompetentes.4,15,16 El perodo de incubacin oscila de 1 a 6 semanas, el cuadro clnico vara desde cuadros sobreagudos a leves. Los sntomas y signos que se pueden presentar son: fiebre, mialgia, artralgia, anemia, postracin, hemoglobinuria, ctero, hepatomegalia y esplenomegalia, etctera. Son ms notables los signos de hemlisis masiva en los individuos sin bazo.19 Existen reportes de babesiosis en seropositivos al VIH, pero no se ha demostrado que sea un agente oportunista.20,21 En el hombre el diagnstico se realiza por extensiones de sangre teida con Giemsa y se puede confundir con Plasmodium falciparum. Otro medio diagnstico es la inmunofluorescencia indirecta.22,16 En la literatura cubana no conocemos ningn trabajo donde se reporten casos humanos de babesiosis ni se haya demostrado la

presencia de anticuerpos en el hombre; no obstante, un investigador cubano realiz 2 estudios en Mozambique.23,24 En Cuba, la babesiosis bovina presenta alta prevalencia en las empresas pecuarias, a lo cual no es ajena nuestra provincia, se presentan animales enfermos o con manifestaciones latentes.12 Las bases fundamentales de la provincia de Ciego de vila son la agricultura caera y no caera, en sta se incluye la ganadera, de la cual se deriva un alto nmero de trabajadores vinculados a ella. Teniendo en cuenta los antecedentes sealados nos proponemos como objetivos:

Conocer la presencia de anticuerpos a Babesia bovis y bigemina en trabajadores agropecuarios. Evaluar la circulacin de Babesia en donantes. Analizar los principales elementos epidemiolgicos de los serorreactores.

MTODOS
Se investigaron, con la tcnica de inmunofluorescencia indirecta con antgeno de Babesia bovis y bigemina en el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), 371 sueros de trabajadores agropecuarios de 5 empresas de la provincia de Ciego de vila de ellas 4 pecuarias y 1 forestal; en las primeras haban focos de babesiosis en bovinos. Adems se estudiaron 410 sueros de donantes del Hospital "Antonio Luaces Iraola", el criterio de seleccin fue tener igual rango de edad y sexo que el grupo anterior y no ser obrero pecuario. Los antgenos se elaboraron en el CENSA. Para la obtencin de stos se inocularon terneros esplenectomizados con cepas de Babesia bovis y Babesia bigemina. Cuando la parasitemia fue del 7 al 12 % se colect sangre heparinizada a razn de 0,1 mL por cada 50 mL. La sangre heparinizada fue diluida 1:20 en PBS y centrifugada a 2 500 rpm durante 15 min, se desech el sobrenadante y la capa leucocitaria. El paquete de eritrocitos se suspendi en PBS y se lav 4 veces por centrifugacin a 2 500 rpm durante 15 min. Despus del lavado final se ajust el volumen total de eritrocitos al 30 % con una solucin de albmina bovina al 3,5 % en PBS. Se barnizaron las lminas portaobjetos con una solucin de albmina al 3,5 % con un rotor se extendi una pelcula en cada una de las lminas, stas fueron secadas unos minutos en una incubadora a 50 &deg;C y conservadas a -80 &deg;C envueltas en papel de aluminio hasta el momento de su empleo. Se parti de diluciones de 1/64 para evitar posibles reacciones cruzadas, ya que en estudios previos realizados con 5 sueros de pacientes paldicos ninguno reaccion con diluciones superiores a 1/32. Se consider seropositivo el que reaccionara a 1/64 o ms. A cada serorreactor se le confeccion una encuesta epidemiolgica para conocer: edad, sexo, presencia de sntomas o no, antecedentes de

haber sido picado por garrapatas, de recibir transfusiones, de ser esplenectomizado, tener inmunodeficiencia, tomar esteroides, viajar al exterior y padecer de paludismo. El presente trabajo es un estudio descriptivo de casos donde se comparan las proporciones entre los trabajadores agropecuarios y los donantes por medio de una prueba de diferencia de proporciones (Z). Adems, se calcula la media geomtrica de los ttulos de anticuerpos de ambos grupos. Para comparar ambas medias se utiliz la prueba de Mann-Whitney. Se calcul el intervalo de confianza para el 95 %. El resto de las variables se analizan mediante tablas de frecuencia.

RESULTADOS
En la tabla 1 aparecen los resultados de la inminofluorescencia en los grupos estudiados. En los trabajadores agropecuarios se detect 7 % con anticuerpos, es de sealar que en los trabajadores pecuarios el tanto por ciento con anticuerpos fue de 6,8 % y en los forestales de 4,7 % aunque la muestra de este grupo fue pequea. En los donantes de banco de sangre se encontr 3,9 % al comparar ambos grupos se demuestra una diferencia estadsticamente significativa (Z= 1,921; p<0,05). El 5 % de los pesquisados era seropositivo. TABLA 1. Resultados de la inmunofluorescencia de Babesia bovis y Babesia bigemina en trabajadores agropecuarios y donantes Seropositivos Grupo Trabajadores agropecuarios Donantes de sangre Total No. de estudiados 371 410 781 p < 0,05. Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa. Los ttulos detectados en las especies de Babesia investigadas aparecen en la tabla 2, el 69 % de los seropositivos reaccion a Babesia bovis y el 40 % a Babesia bigemina. La media geomtrica fue mayor en los donantes que en los trabajadores agropecuarios (215,3 contra 142,40), no se demostraron diferencias significativas (p0,05). TABLA 2. Ttulos detectados en las especies de Babesia investigadas Trabajadores agropecuarios Ttulos 1:64 bovis 9 bigemina 1 Total 10 bovis 2 Donantes bigemina Total 2 No. 26 16 42 % 7,0 3,9 5,37

1:128 1:256 1:512 1:1 024 Total

3 6 1 19

1 4 1 7

4 10 2 26

4 3 1 10

1 2 3 6

5 5 3 1 16

Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa. Las ocupaciones de los seropositivos en los trabajadores agropecuarios, aparecen en la tabla 3, se observ que las mayores, frecuencias se detectaron en los obreros pecuarios y tcnicos veterinarios, pensamos que stos tienen un contacto ms estrecho con los animales que los otros pesquisados y esto motivara un mayor nmero de personas con anticuerpos. En la tabla 4 se muestran las ocupaciones de los donantes. TABLA 3. Ocupaciones de los seropositivos en los trabajadores agropecuarios Ocupaciones Obrero pecuario Tcnico veterinario Mdico veterinario Obrero forestal Mecnico Administrativo Total No. de casos 12 8 2 2 1 1 26 Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa. TABLA 4. Ocupaciones de los donantes seropositivos Ocupaciones Mecnico Albail Obrero industrial Constructor Obrero de servicio Ama de casa No. de casos 2 2 2 2 2 1 % 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 6,2 % 46,0 30,7 7,6 7,6 3,5 3,5

Electricista Chofer Operador de maquinaria Obrero agrcola Tcnico agrcola Total

1 1 1 1 1 16 Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa.

6,2 6,2 6,2 6,2 6,2

En la comparacin de algunos elementos epidemiolgicos entre seropositivos se observ que en los trabajadores agropecuarios se reportaron ms picaduras por garrapatas que en los donantes. Es de sealar que en ninguno de los 2 grupos estudiados se presentaron individuos esplenectomizados. En los trabajadores agropecuarios el 88 % no refiri sntomas compatibles, y entre los donantes en el 87 % ocurri lo mismo (tabla 5). TABLA 5. Comparacin de algunos elementos epidemiolgicos en los trabajadores agropecuarios y los donantes seropositivos Grupo Trabajadores agropecuarios Donantes Total No. 26 16 42 Picados por garrapatas 20 3 23 Transfusiones 5 2 7 Terapia esteroide 2 1 3 Viajes al extranjero 3 3 6 Antecedentes de paludismo 3 1 4

Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa. De los 42 seropositivos, 4 tenan antecedentes de paludismo, por lo que se puede asegurar que en los 38 los anticuerpos son antibabesia y el resto de las reacciones pudieran ser cruzadas. En la tabla 6 se analizan los pesquisados por grupos etarios, el mayor porcentaje de seropositivos en los trabajadores agropecuarios, se detect en el grupo de 37 a 47 aos, con el 9,2 %; este es el rango de edad que predomina en estos trabajadores, seguido del 7,6 % en el de 26 a 36 aos, este es el segundo grupo de mayor plantilla en estas ocupaciones. Eso explica que las muestras seleccionadas en ambos grupos sea mayor que en el resto. TABLA 6. Grupos de edades y seropositivos detectados en trabajadores agropecuarios y donantes Grupos etarios Trabajadores agropecuarios Donantes

(aos) 15 a 25 26 a 36 37 a 47 45 a 55 Mayor de 55 Total

Estudiados 40 130 140 40 21 371

Seropositivos 1 10 13 1 1 26

% 2,5 7,6 9,2 2,5 4,7 7,0

Estudiados 50 150 150 50 10 410

Seropositivos 2 10 4 16

% 4 6,6 2,6 3,9

Fuente: Departamento Provincial de Epidemiologa. Es de suponer que el grupo de 37 a 47 aos lleve ms tiempo de exposicin a los factores de riesgo y esto quizs explique su mayor positividad. En los donantes la mayor positividad fue en el grupo de 26 a 36 aos, con el 6,6 %; para la cual no tenemos una teora que lo explique. En ambos grupos, 4 de los 42 seropositivos fueron del sexo femenino para el 9 %, la mayor presencia de anticuerpos en el sexo masculino se puede deber a que la muestra estudiada fue predominante masculina, ya que este sexo es mayoritario en el sector agropecuario y por ende la seleccin de donantes fue tambin con esa composicin.

DISCUSIN
En Cuba no se han efectuado estudios serolgicos en el hombre, por lo cual no tenemos punto de referencia. En estudios realizados en Mozambique por autores cubanos mediante la tcnica de fijacin de complemento, se detect que el 7,1 % de las personas estudiadas tenan anticuerpos a Babesia bovis y el 4,5 % a Babesia bigemina.24 Estos autores reportaron casos de enfermos por Babesia bovis.23 En el presente estudio el 3,7 % de los estudiados present anticuerpos a Babesia bovis y el 1,6 % a Babesia bigemina. En Venezuela, en un estudio realizado en mdicos veterinarios, trabajadores agropecuarios y soldados de origen rural, encontraron 42 % de reactores a Babesia bigemina y 22,1 a Babesia bovis.25 En un pesquisaje realizado en reas rurales de Mxico se encontr una seroprevalencia del 37 %.16 Otros investigadores sealan que se desconoce la proporcin de individuos con anticuerpos.26 En la presente investigacin el mayor nmero de seropositivos a Babesia bovis se pudiera deber a que este agente est ms difundido en el ganado vacuno en el pas que Babesia bigemina.12 En lo referente a la fuente de infeccin no est claro cmo pudieron adquirirla los que no refirieron haber sido picados por garrapatas ni haber recibido transfusiones, pero esto se puede deber a sesgo de memoria de los encuestados, ya que se ha demostrado que los

anticuerpos antibabesia pueden mantenerse detectables por un perodo de 1 a 2 aos despus de la infeccin primaria.27 En el diagnstico serolgico de Babesia hay que tener en cuenta, segn sealan algunos autores, que Babesia bovis y Babesia bigemina tienen 1 o ms antgenos similares.28 Por lo cual, en nuestro estudio pudieran existir reacciones cruzadas entre ambas especies, es de expresar que ningn seropositivo reaccion a ambos antgenos. Tambin se refiere que existen reacciones cruzadas de Babesia bovis y bigemina con Plasmodium falciparum y vivax, aunque los ttulos positivos altos se obtienen con el antgeno homlogo.22 En Cuba no hay paludismo autctono pero si mucha Babesia en el reservorio animal, esto debe servir de alerta al personal mdico ya que se pueden presentar casos de babesiosis que no se reconozcan; adems, dado el sistema de vigilancia que tenemos para paludismo se pudieran diagnosticar errneamente por gota gruesa casos de Plasmodium falciparum cuando en realidad sean Babesia y puede ocurrir lo contrario. Adems, en los controles de foco de paludismo importado en el pas se puede utilizar la inmunofluorescencia indirecta de Plasmodium y se pueden dar falsos positivos, lo que llevara a las autoridades sanitarias a pensar en la transmisin local. Se seala que es importante no confundir el paludismo verdaderamente resistente, de la babesiosis.13 El presente trabajo demuestra que se debe profundizar ms en el pas en el estudio de la babebiosis en el hombre. Se puede concluir que:

1. Fue significativamente mayor el tanto por ciento de seropositivos en trabajadores agropecuarios que en los donantes (p<0,05). 2. Se detectaron ms seropositivos a Babesia bovis que a Babesia bigemina. 3. El grupo de trabajadores agropecuarios present un mayor nmero de picadas por garrapatas que los donantes; en los primeros, los obreros pecuarios y los tcnicos veterinarios fueron los que ms seropositivos aportaron.

SUMMARY
A descriptive study of cases was conducted in which 781 sera were investigated using the indirect immunofluorescent technique with antigens of Babesia bovis and Babesia bigemina at the National Center for Agricultural Health. Of them, 371 came from agricultural workers and 410 from donors in the province of Ciego de vila. It was started from dilutions of 1/64. An epidemiological survey was done to each seropositive so as to know the risk factors. The test of difference of proportions was used to compare the percentages of positives. The geometrical means were calculated in both group and they were compared with the U test of Mann Whitney. Among the agricultural workers it was detected 7 % with antibodies against 3.9 % of the

donors (p < 0.05). It was found a greater circulation of Babesia bovis than of Babesia bigemina. Subject headings: BABESIOSIS/immunology; BABESIOSIS/ /epidemiology; BLOOD DONORS; BABESIA BOVIS/immunology; BABESIA/immunology; FLUORESCENT ANTIBODY TECHNIQUE, INDIRECT/methods; CATTLE DISEASES/ /blood; AGRICULTURAL WORKERS DISEASES.

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Recibido: 27 de octubre de 1995. Aprobado: 12 de marzo de 1997. Dr. Miguel Surez Hernndez. Centro Provincial de Higiene y Epidemiologa de Ciego de vila. Provincia Ciego de vila, Cuba.