BASES MOLECULARES DEL CANCER

Conjunto de enfermedades que se caracterizan por poseer un crecimiento celular desordenado, al que llamamos tumor junto con una colonizacin tisular (metstasis). Todo ello est determinado por una mutacin inicial seguido de otras mutaciones. Las clulas crecen mas de lo normal invadiendo tejidos pero se tiene que dar una acumulacin de mutaciones (que conllevan ganancia o prdida de funcin). El descontrol tanto del ciclo celular como de la apoptosis da lugar a proliferacin anormal y daos tisulares. Hay homeostasia celular constante, una renovacin constante. En una persona sana hay un equilibrio entre la proliferacin celular y la apoptosis. Cuando hay alteracin de este equilibrio, los fenmenos de proliferacin disminuyen, y aumenta la apoptosis apareciendo enfermedades degenerativas: SIDA, enfermedades isqumicas, enfermedades neurodegenerativas La supervivencia y la proliferacin no es lo mismo. La supervivencia esta muy relacionada con la apoptosis, ya que al inhibirse la apoptosis se activa la supervivencia. La proliferacin esta ligado con la mitosis. Cuando hay una alteracin del equilibrio con sobreestimulacion de la superficie de proliferacin y disminucin de la apoptosis, hay un crecimiento exagerado, y se produce el cncer. Cualquiera que codifique una protena que acte en este equilibrio sern aquellos implicados en cncer y tambin las funciones vitales. Los reguladores del ciclo celular y en parte de la apoptosis, se clasifican en dos grandes grupos: o Protooncogen. o Gener supresores de tumores. Protooncogen: codifica una protena que estimula el ciclo celular. Desempean funciones vitales. El oncogen es la forma mutada del protooncogen con un papel en el cncer. Al sobreestimular el ciclo aparece el tumor. Tipos de protooncogen: o Factores de crecimiento: polipptidos que estimulan tanto la supervivencia celular como la proliferacin celular. Actan como hormonas a nivel extracelular.

o Ej: el primer factor de crecimiento descubierto fue el factor de crecimiento nervioso (NGF). La IgF: de tipo insulnico. La EGF: factor de crecimiento epidrmico. TGF: solo proliferativo. Receptores de factores de crecimiento: el receptor de la insulina tiene una caracterstica estructural. Poseen un dominio cataltico tirosina quinasa. Protenas implicadas en la traduccin de seales: o Ej: Ras: protena fundamental en la traduccin de seales, anlogo estructural de la protena G. Factores de transcripcin: cuando se estimulan, fomentan la expresin de determinados genes (implicados en estimular el ciclo celular de forma mas directa). Quinasas dependientes de ciclinas: papel fundamental, los principales reguladores del ciclo.

Ciclo celular. Fase S: fase vital. Replicacin del ADN. La clula se tiene que dividir. Fase G2: no hay replicacin del ADN pero si transduccin y traduccin. M: mitosis, la de divisin incluyendo citoquinesis. Fase G1: nunca replicacin. Solo transduccin y traduccin. En G1-S hay un punto de control evitando que la clula entre en fase S. el protooncogen supera el punto de restriccin. Aqu situamos a los protooncogenes. Estimulan el ciclo en este punto. Cncer: por mutaciones. Mutaciones en un protooncogen: - Mutacin inactivadora: donde antes estimulaba, aqu no lo estimula. No es una causa de cncer, puede desencadenar procesos degenerativos. - Mutacin activadora: donde antes estimulaba, ahora sobreestimula. Si implicada en cncer. Cuando estn afectados los protooncogen, basta que la mutacin sea en un solo alelo para el proceso tumoral. Genes supresores de tumores: Aquellos que codifican protenas que inhiben el ciclo celular y/o estimulan la apoptosis ya que los fenmenos de supervivencia y apoptosis estn relacionados. Ms del 50% de los tumores intervienen los genes supresores de tumores, mas implicados. Tipos de genes supresores de tumores:

o Factores inhibidores de crecimiento (gen DCC). o Receptor de estos factores inhibidores. o Protenas implicadas en la traduccin de seales. o Ej: nf1: neurofibromina cuya funcin es estimulador de la actividad GTPasa o Factores de transcripcin (genes Rb y p53). o Rb: retinoblastoma. o Gen P53: genes posiblemente con mayor implicacin en genes tumorales. Donde antes se estimulaba el ciclo celular, ahora este gen supresor de tumores inhibe el ciclo celular. Se pueden dar dos tipos de mutaciones de genes supresores de tumores. - Mutacin activadora: con ganancia de funcin. No afecta al cncer. El ciclo celular esta ms restringido de lo normal. Crecimiento deficiente. Enfermedad de tipo degenerativo. - Mutacin inactivadora: con prdida de funcin por lo que se tiene que dar en los 2 alelos. Esto es muy poco probable que se de pero son los mas implicados en el cncer porque una persona nace ya heterocigtica con una mutacin inactivadora, y si a lo largo de la vida sufre otra inactivacin mutadora, ya tiene los dos alelos tumorales, (porque todas sus clulas tienen ya un alelo reprimido). Control de la proliferacin. Se muestran casi todos los protooncogenes que hemos hablado. El factor de crecimiento se une a su receptor, con actividad tirosin kinasa, tiene dominio cataltico, se fosforila as misma la tirosina en el citosol (citoplasma). La secuencia sin fosforilar no tiene capacidad de unir protenas citoplasmticas, al fosforilarse, si puede iniciar que la protena citoplasmtica se una y la active. Esta protena se denomina factor de intercambio o factor intercambiador de nucletidos de guanina. Participan los Ras, cuya forma inactiva es la unida a GDP y la activa es la unida a GTP. Este intercambiador sustituye el GDP por el GTP, pasando Ras de la forma inactiva a su forma activa. Esta tiene actividad GTPasa intrnseca, se hidroliza y pasa de GTP a GDP liberando un fosfato e inactivndose cuando ya ha ejercido su accin porque no puede estar permanentemente activo (con fin de estimular el ciclo celular). La neurofibromina acta a este nivel y pasa el Ras de activo a inactivo (gen supresor), si sufre una activacin inactivadora, hay Ras mas tiempo activo estimulando el ciclo.

Con la participacin de las kinasas, se transporta el Ras al ncleo. Con la activacin del Ras: se termina activando la MAPK (MAP quinasa, protena activada por mitogenos factor de crecimiento). La MAP quinasa se fosforila y se activa por la MAPKK y esta se activa a su vez por la MAPKKK. Se activan las quinasas que acaban fosforilando la MAPK. Ras tiene actividad quinasa y fosforila la MAPKKK y esta activa a la MAPKK, se fosforila y activa la MAPK. La MAPK fosforila y activa factores de transcripcin, aquellos que fomentan la expresin de ciclinas, que son capaces de hacer que la clula entre en fase S. Regulacin del ciclo celular. Los principales reguladores son las proten quinasas dependientes de ciclinas (CDK). Las CDK son realmente heterodimeros constituidos por una subunidad reguladora conocida como ciclina y una cataltica con actividad quinasa. La quinasa siempre esta presente en la clula pero la ciclina no. Sin la ciclina, la quinasa no tiene actividad cataltica alguna. Sintetizamos ciclina: ganamos actividad quinasa. Degradamos ciclina: perdemos actividad quinasa. No solo regulan a nivel G1-S (ms importante) sino tambin a nivel G2-M. Ejemplos de sustratos a nivel de G2-M: Quinasas: fosforilan sustratos y regulan a nivel de G2-M. 1. Protena laminina: componente fundamental de la envoltura nuclear. Durante la mitosis la membrana nuclear se tiene que disgregar para permitir la segregacin de las cromatidas hermanas. La CDK fosforila a la laminina (se despolimeriza) y se disgrega la membrana nuclear. 2. Protena asociada a microtbulos: su fosforilacin hace que esta se reorganice formando el huso mitotico. 3. Actomiosina: principal protena contrctil responsable de impulsar la citoquinesis. Tras completarse la citoquinesis, hay que inactivar a la actomiosina, la fosforilan las CDK, la cual se disocia en sus dos componentes bsicos: actina y miosina. A nivel de G1-S: principal punto de restriccin del ciclo celular. La regulacin a este nivel se lleva a cabo actuando sobre una protena fundamental en el control del ciclo celular, la protena del retinoblastoma (Rb). Consecuencia de la fosforilacin de la protena Rb, cambia su conformacin y ya no puede unir al factor E2F, este se libera y queda libre activo. Si une factor de transcripcin va al ncleo

y fomenta la expresin de genes concretos: protenas implicadas en la replicacin del ADN, el ADN se replica y entra en fase S. Regulacin de CDK: tres niveles: 1. A nivel de sntesis o degradacin de la subunidad reguladora (ciclina). 2. Por fosforilacin: hay residuos que cuando se fosforilan pueden actuar o inhibir el ciclo (quinasas y proteasas). 3. Porque existen protenas inhibidoras del complejo: impulsado por el gen P53: con mayor implicacin en tumores humanos. Dos papeles bien diferenciados: a. Inductor de apoptosis: cuando hay un dao grave al ADN es mucho mas seguro ejecutar la clula que sufrir un proceso neoplsico. b. Como gen supresor de tumores, como inhibicin del ciclo pero en este caso cuando hay dao leve en el ADN. Hay posibilidad de repararlo pero no puede haber multiplicacin celular mientras se repara. Cmo ejerce estas funciones? Es otro caso de factor de transcripcin el cual se activa ante cualquier situacin de dao al ADN fomentando la expresin de genes concretos. Ej: 1. Protena p21: se une al complejo CDK-ciclina inhibindolo, al inhibirlo el complejo no puede actuar sobre la protena Rb que estar unido a E2F y este estar atrapado. 2. Protena GADD: inhibe a protenas de replicacin, freno extra a que la clula entre en fase S. 3. Se produce cuando solo el dao al ADN es grave: protena Bax: fundamental en el proceso de apoptosis. Apoptosis Tipo de muerte controlado genticamente. Cualquier clula de mamferos puede morir por este proceso, cuya gran ventaja frente a la necrosis es que nunca va asociada a una respuesta inflamatoria. Fases de la apoptosis Ocurre en tres fases bsicas: 1. Fase de activacin: una seal de muerte o estimulo apoptotico va a activar a la maquinaria de muerte apoptotica. Los ejecutores de muerte son proteasas, cisten proteasas

(llamadas caspasas). Una vez activadas, se pasa a la fase 2 o fase de ejecucin. 2. Fase de ejecucin: si es sobre enzimas, actan sobre mltiples blancos celulares generando cambios en la clula: a. Cambios morfolgicos b. Contraccin del citoplasma. c. Condensacin de la cromatina. d. Fragmentacin del ADN. e. En la membrana de la clula que se esta generando da lugar a protuberancias y contienen pequeos corpsculos. La clula se escinde en cuerpos apoptoticos por zeiosis. 3. Fase 3 o fagocitosis: macrfagos activos fagocitan y eliminan a los cuerpos apoptoticos y esto va asociado a una respuesta inflamatoria generalmente, pero en este caso no va asociado a la respuesta inflamatoria.

Funcin de la apoptosis: 1. Morfognesis: la apoptosis es la responsable de la formacin de tejidos y rganos y forma los orificios del tubo digestivo, responsable de formar las extremidades. 2. Desarrollo de SNC: la complejidad organizativa del SNC se lleva a cabo gracias al proceso de apoptosis: a. Durante el desarrollo embrionario generamos un exceso de neuronas que nacen programadas para morir. Solo sobreviven las neuronas que tengan contacto sinptico adecuado con los factores de crecimiento de la clula diana y las dems morirn. 3. Regulacin del sistema inmune: los linfocitos T se forman a partir de precursores en la medula sea y maduran en el timo donde sufren un control de calidad. Si el linfocito no es funcional o puede originar problemas de autoinmunidad, se ejecuta por apoptosis. El exceso de linfocitos T que se producen en una infeccin se eliminan por apoptosis. 4. Tras dao al ADN: el p53 induce suicidio celular (apoptosis). 5. Homeostasia de tejidos: ej. El recambio celular continuo de los queratinocitos; menstruacin: renovacin peridica del tero. Hay apoptosis entre clulas vecinas. Caspasas. Se dividen en dos grupos.

1. Caspasas iniciadoras: no son las ltimas responsables de inducir

la muerte clulas. Ej. Caspasa 8, implicada en la ruta extrnseca de la apoptosis y caspasa 9 implicada en la ruta intrnseca. A nivel estructural estn formadas por 1 subunidad pequea (p10) y otra grande (p20) y un dominio extra cuya funcin es interaccionar con protenas adaptadoras y reclutadoras de caspasas.
2. Caspasas efectoras: son las ultimas responsables de inducir

muerte celular y la relacin entre ambas es:

a. Seal de muerte activa a caspasas iniciadoras

activan a caspasas efectoras (caspasa 3 sobre todo). Se sintetizan como zimgenos inactivos. Es un proceso irreversible y por ello el nivel de regulacin tiene que ser estricto. La caspasa iniciadora posee tres dominios. Se tienen que alinear 2 molculas o ms de caspasas para autodigerirse en unos puntos de corte especficos formndose una especie de tetrmero activo. La complejidad es conseguir la disposicin. Se consigue por formacin de plataformas moleculares que alineen las caspasas y esto se consigue por la subunidad extra de la caspasa iniciadora. El proceso crtico es activar la caspasa iniciadora que esta activa a la caspasa 3, se forma el tetrmero y ya es activa. La caspasa 3 acta sobre los blancos celulares para ejecutar la clula (autentico ejecutor de muerte celular). Mecanismos bsicos de activacin: 1. Ruta extrnseca. La caspasa implicada es la caspasa 8. Caracterizada por la participacin de receptores de muerte celular. El receptor de muerte celular prototipo pertenece a una familia que le da el nombre el TNFR (factor de necrosis tumoral). Este receptor generalmente no induce apoptosis. Por lo que el receptor con mayor implicacin es el: CD95 o receptor FAS. El ligando del receptor de muerte se conoce como receptor de muerte, se localiza especficamente en clulas del sistema inmune (CD95L ligando del receptor CD95), y concretamente en linfocitos T activados y clulas NK. La caracterstica es que este ligando est anclado en la membrana. El ligando es homotrimrico, recluta o atrae hacia si a tres molculas de receptor. Cuando las acopla produce interaccin de unos dominios, los activa y hace que se acoplen protenas (Con capacidad de interaccionar de forma especfica con la

protena que acabamos de acoplar). Al final se obtienen 2 caspasas 8 alineadas inactivas (prerrequisito para activar caspasas iniciadoras). Se activa ella misma por protelisis, forma el tetrmero activo y comienza a activar a caspasa 3. A partir de este momento la clula se ejecuta.
2. Ruta intrnseca. La caspasa implicada es la caspasa 9. Juega un

papel determinante la mitocondria por la liberacin de una molcula, el citocromo C (importante en la cadena respiratoria).
a. Mitocondria libera citocromo C ante la llegada de una

seal de muerte el citocromo C interacciona con una molcula citoplasmtica cuya funcin es activar y reclutar la caspasa 9. Para que esto se d, tiene que interaccionar con una molcula conocida como apaf-1 (la que recluta y activa factor activador de apoptosis). El citocromo C tiene una protena de unin especfica dentro de apaf-1, el apaf-1 cambia su conformacin y se abre.
b. La caspasa 9 tiene 3 dominios. sta interacciona con

apaf-1 (que es posible porque antes ha interaccionado con el citocromo C y la ha abierto, en estado cerrado no puede interaccionar). Esto forma un complejo conocido como apoptosoma formado por apaf-1, citocromo C y el zimgeno de caspasa 9 cuya funcin es alinear molculas de caspasa 9 inactivas. Inicialmente se crea que el apoptosoma estaba formacin por 2 de casa, pero hoy da se sabe que se forma una estructura en forma de rueda formada por 7 de cada uno (apaf-1, citocromo C y zimgenos de caspasa 9). Las caspasa 9 no se separan de la molcula en forma de rueda, llegan molculas de caspasa 3, se unen y se ejecuta la clula.

El citocromo C es muy voluminoso y no sale muy fcilmente de la mitocondria. Hay dos mecanismos bsicos de liberacin de citocromo C: 1. Megaporo. Complejo del megaporo. Dentro de la membrana interna, el canal de porina y dentro de la membrana externa el transportador de nucletidos de adenina. Este canal opera en condiciones normales en modo de baja conductancia (Apertura pequea).

Si aparece una sea de muerte celular (Ej. Estrs oxidativo intenso), el canal se abre en modo de alta conductancia, que es de gran apertura. Adems la apertura si se abre en gran apertura es un proceso irreversible. Sin embargo la apertura no es lo suficientemente grande para permitir el paso del citocromo C, por lo que primero se disipa el potencial transmembrana (a partir de aqu no se sintetiza ATP) y hay una apertura que entra agua y solutos a la matriz mitocondrial de forma masiva. La matriz mitocondrial se hincha, esto se extiende a la membrana interna inicialmente. Esta membrana estaba muy plegada y no se va a romper por el aumento de volumen porque tiene mucha superficie, pero la membrana externa es rgida y la expasin llega ah si se rompe y permite la salida de molculas alojadas en el espacio intermembrana y ah es donde se aloja el citocromo C. 2. El 2 mecanismo de hibridacin del citocromo C implica la formacin de unos canales constituidos por heterodmeros de las protenas Bax y Bak. Este canal tiene una apertura suficientemente grande para permitir la salida del citocromo C desde el espacio intermembrana al citosol. Bax y Bak pertenecen a la familia BCL-2 con gran importancia en la regulacin de la apoptosis. Familia BCL-2 Tiene gran implicacin en el cncer. Papel principal regulador de la apoptosis. Se divide en dos grupos: Miembros anti-apoptoticos. Ej. Proteina BCL-2 y proteina BCL-XL Miembros pro-apoptoticos. Ej. Proteina Bax y Bak, y proteina Bad. Caractersticas: casi todos los miembros poseen una cola transmembrana (CT) que le permite el anclaje a la membrana fundamentalmente en la membrana mitocondrial externa, la membrana del retculo endoplasmtico y la membrana nuclear. La protena Bad no tiene esta cola CT, no est anclada a la membrana y se encuentra libre en el citoplasma. Poseen un dominio BH2, que confiere la propiedad de formar canales (en todos los anti-apoptticos y en los pro-apoptticos slo en Bax y Bak). Mecanismo de accin de los miembros anti-apoptticos.

inhiben la traslocacin de citocromo C del espacio intermembrana al citosol, evitan asi que el megaporo se abra en alta conductancia. Los miembros anti-apoptticos tienen la capacidad de unirse a las protenas adaptadoras y reguladoras de caspasas inhibindolas (apaf-1).

Mecanismo de accion de los miembros pro-apoptoticos - Los de tipo I, Bax y Bak, forman heterodmeros que facilitan la salida de citocromo C. Accin comn para todos los miembros pro-apoptticos: ante la llegada de una seal de muerte, un miembro pro-apopttico podr unirse a un miembro anti-apopttico formando un heterodmero inhibiendo de este modo la accin de estos ltimos.

Los que tienen mayor implicacin en el cncer son los antiapoptticos porque si se produce una mutacin activadora de estos, la clula no se muere y ser resistente a todo tratamiento. Ej. - En el melanoma (tumor muy agresivo), se produce una sobrepresin de la protena BCL-2 En el cncer de mama, a veces, aparece una recidiva que emerge mucho mas agresivo que la original puesto que se suman nuevas mutaciones de BCL-2 y BCL-XL.

La mitocondria es el orgnulo clave en la induccin de la apoptosis porque contiene el citocromo C (constituyente del apoptosoma). La familia BCL-2 regula el proceso de apoptosis. BCL-XL es una molcula anti-apopttica que acta por dos mecanismos que evitan la traslocacin de citocromo C y se una a protenas apaf-1 por lo que nunca se podr formar el apoptosoma pero si tenemos que producir muerte celular tiene que venir dado por un miembro pro-apopttico sin cola transmembrana (proteina Bad). Bad forma heterodmeros con el anti-apopttico y lo inhibe, no puede evitar la salida de citocromo C, se libera apaf-1 formndose el apoptosoma. Esta protena se regula a partir del factor de crecimiento. El mecanismo de la proteina Bad para tenerla no activa en el citoplasma: mecanismo de fosforilacin. La protena bad fosforilada es inactiva. Si esto ocurre tiene afinidad por otra protena citoplasmtica que lo va a unir y secuestrar, la protena 1433, tenindola aislada. La fosforilacin depende de una kinasa, que se activa en respuesta a un factor de

crecimiento. La protena Akt (kinasa), tambin denominada proten kinasa B, es activada por el factor de crecimiento, y esta kinasa fosforila a Bad. Se conoce como deprivacin de soporte trfico: factor de crecimiento deja de actuar. Bad no se fosforila, esta activa y se unir al miembro anti-apopttico y la inhibir.