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OCDE/OCDE 402
Adoptado:
9 de octubre de 2017

DIRECTRICES DE LA OCDE PARA LAS PRUEBAS DE PRODUCTOS QUÍMICOS

Toxicidad dérmica aguda: procedimiento de dosis fija

INTRODUCCIÓN

1. Las Directrices de la OCDE para el ensayo de sustancias químicas se revisan periódicamente a la luz del progreso
científico y las consideraciones de bienestar animal. La Guía original de toxicidad dérmica aguda TG 402 se adoptó en 1987.
Varias publicaciones recientes han analizado los resultados de estudios de toxicidad oral y dérmica aguda para cientos de
sustancias activas de pesticidas y miles de productos químicos industriales, y han descubierto que las clasificaciones regulatorias
basadas en la toxicidad aguda oral Los datos fueron equivalentes o más graves que los derivados de los datos dérmicos en más
del 98 por ciento de los casos, lo que pone en duda el valor de las pruebas de rutina para este criterio de valoración (1­6). El
Documento de orientación 237 de la OCDE sobre exención o puente de las pruebas de toxicidad aguda en mamíferos (7)
identifica criterios para eximir de estudios de toxicidad aguda dérmica, que deben revisarse antes de tomar la decisión de realizar
este estudio con el fin de limitar nuevas pruebas con animales para este criterio de valoración. a circunstancias excepcionales
con justificación científica convincente. Este documento se centra en el uso de pruebas de toxicidad aguda para la evaluación
de la salud humana; Se debe prestar la debida consideración a la realización del estudio cuando los resultados se utilizarán para
otras áreas de evaluación, como el riesgo ecológico.

2. Sobre la base de las recomendaciones de varias reuniones de expertos, se había llegado a un acuerdo internacional
sobre valores límite armonizados de LD50 para la clasificación de productos químicos. Se consideró oportuna una revisión de
TG 402 porque i) las pruebas en un sexo (generalmente mujeres) generalmente se consideran suficientes, y ii) para que una
estimación puntual sea significativa, es necesario estimar intervalos de confianza (IC) (8 ) (13).
Las dosis adecuadamente separadas permiten clasificar una sustancia problema a efectos de clasificación de peligros de
acuerdo con el Sistema Globalmente Armonizado (GHS) para la clasificación de sustancias químicas sin una estimación puntual
de la toxicidad (10).

3. Se llevó a cabo un análisis biométrico para evaluar y comparar el rendimiento de múltiples diseños de prueba para
toxicidad dérmica aguda con el fin de seleccionar el mejor diseño de prueba para el TG 402 actualizado (11).
Evaluaciones biométricas del diseño TG 402 (OCDE, 1987), cuatro modificaciones de un Procedimiento de dosis fija (FDP) (12),
un diseño modificado de Clase tóxica aguda (ATC) (9) y el Procedimiento arriba y abajo

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Usted es libre de utilizar este material sujeto a los términos y condiciones disponibles en http://
www.oecd.org/termsandconditions/.

Esta Orientación fue adoptada por el Consejo de la OCDE mediante procedimiento escrito el 9 de octubre de 2017 [C(2017)97].
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(UDP) (13). Mientras que, además del UDP, el TG 402 (OCDE, 1987) tuvo el mejor desempeño para clasificar correctamente los
peligros químicos, el FDP dérmico superó a todos los demás métodos para clasificar químicos de manera segura. Además, los
diseños de FDP dérmico utilizaron menos animales que el TG 402 (OCDE, 1987) o el UDP. Por lo tanto, el procedimiento por pasos
de la directriz de ensayo 402 de la OCDE, con el uso de hasta tres animales de un solo sexo por paso, se ha adaptado del método
de clases de toxicidad aguda y del procedimiento de dosis fija establecidos en la directriz de ensayo 420 de la OCDE (12). .
Dependiendo de la mortalidad y/o del estado moribundo de los animales, puede que sean necesarias medidas adicionales para
poder juzgar la toxicidad aguda de la sustancia problema. El procedimiento es reproducible, utiliza muy pocos animales y puede
clasificar las sustancias problema (14) de manera similar a otros métodos de prueba de toxicidad aguda (por ejemplo, Directrices
de examen 425 (13)).

4. Las definiciones utilizadas en el contexto de esta Directriz se establecen en el Anexo 1.

CONSIDERACIONES INICIALES

En interés tanto de la ciencia sólida como del bienestar animal, 5. no se deben considerar los ensayos de toxicidad
cutánea aguda in vivo hasta que se hayan evaluado todos los datos disponibles pertinentes sobre la posible toxicidad cutánea de
la sustancia problema en un análisis de ponderación de las pruebas. . Antes de realizar el estudio debe considerarse toda la
información disponible sobre la sustancia problema. Dicha información incluirá la identidad y la estructura química de la sustancia
problema, sus propiedades fisicoquímicas, los resultados de cualquier otro ensayo de toxicidad in vitro o in vivo con la sustancia
problema, los datos (Q)SAR disponibles y los datos toxicológicos sobre sustancias estructuralmente relacionadas. sustancias; los
usos previstos de la sustancia problema, la posibilidad de exposición humana relevante y el uso previsto de los datos generados.
Esta información ayudará a justificar la realización de este estudio y, de ser así, a seleccionar una dosis inicial adecuada. Un
principio del método es que sólo se utilicen dosis que se espera que sean moderadamente tóxicas y que se debe evitar la
administración de dosis que se espera que sean letales.

En la sección 6 se puede encontrar orientación sobre las oportunidades de exención de este método de prueba para un propósito determinado.
Documento de orientación sobre la exención o transición de las pruebas de toxicidad aguda en mamíferos (7). Las opciones para
renunciar a este estudio deben depender de los requisitos de información legal aplicables.

Si bien el énfasis está en estimar los rangos de toxicidad involucrados, la información generada puede 7. ser necesaria
para permitir que la sustancia química se clasifique de acuerdo con los criterios de clasificación y etiquetado (10). La información
generada mediante pruebas de toxicidad aguda es de particular valor para evaluar los peligros que probablemente surjan en
situaciones de accidente; sin embargo, a menudo, los datos reales requeridos en tales circunstancias están más allá del alcance
de un estudio de toxicidad aguda. Si la renuncia no está justificada científicamente (7), se podrá realizar una prueba in vivo de
toxicidad cutánea aguda caso por caso, siempre que se proporcione una justificación clara del valor o la relevancia de los datos
generados.

8. Los productos problema no deben administrarse en dosis que se sabe que causan dolor y malestar intensos debido a
posibles acciones corrosivas o gravemente irritantes. El pH y la capacidad tampón (reserva ácida/alcalina) de la sustancia problema
constituyen una indicación útil a este fin. Podría realizarse un estudio in vitro para comprobar la posible corrosividad de la sustancia
problema. Los animales moribundos o los animales que evidentemente sufren dolor o muestran signos de angustia grave y
duradera serán sacrificados humanamente y se considerarán en la interpretación de los resultados de la prueba de la misma
manera que los animales que murieron en la prueba. Los criterios para tomar la decisión de sacrificar animales moribundos o que
sufren gravemente, y las orientaciones sobre el reconocimiento de una muerte predecible o inminente, son objeto de un documento
de orientación independiente (15).

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9. Si se realiza este estudio, se pueden investigar los efectos tanto locales como sistémicos. Evidencia clara de irritación
de la piel (por ejemplo, eritema de grado 3 o 4 y/o edema de grado 3 o 4) en el estudio dérmico podría
utilizarse para informar el potencial de irritación en lugar de realizar un estudio de irritación específico.

Mezcla o producto de uso final formulado:

10. Una evaluación exhaustiva de productos mezclados (incluidos pesticidas, biocidas y otros productos formulados) (16)
ha demostrado que la toxicidad dérmica aguda rara vez es mayor que la toxicidad oral aguda de esa mezcla. De hecho, en la
mayoría de los casos (99%), la LD50 dérmica es ≥2000 mg/kg de peso corporal.
Por lo tanto, se recomienda utilizar los criterios de exención para los datos de toxicidad oral aguda (si la LD50 oral es >2000 mg/kg
pc) para evitar pruebas innecesarias. Además, los datos in vivo se han comparado con la metodología de cálculo del GHS; consulte
el Capítulo 3.1.3 Criterios de clasificación para mezclas (10); en el que se calcula la categoría de clasificación basada en la
Estimación de Toxicidad Aguda (ATE) de cada componente individual dentro de la mezcla. Estos datos muestran una concordancia
>98% (sin subpredicciones, es decir, falsos negativos) y, por lo tanto, proporcionarían otra forma de prescindir del estudio dérmico.
Si bien generalmente no se esperan efectos sinérgicos entre los componentes de una mezcla, se deberán tener en cuenta las
posibles interacciones que podrían contribuir al potencial tóxico de la mezcla total.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA IN VIVO

11. Se exponen grupos de animales de un solo sexo a la sustancia problema mediante un procedimiento gradual utilizando
las dosis fijas apropiadas establecidas en el anexo 2. Dependiendo de las pruebas disponibles sobre la sustancia problema, podrá
ser necesario realizar un estudio de determinación del rango. necesario (por ejemplo, cuando hay poca o ninguna información). El
nivel de dosis inicial se selecciona en la concentración que se espera que produzca signos claros de toxicidad sin causar efectos
tóxicos graves ni mortalidad. Podrán someterse a pruebas otros grupos de animales con dosis fijas mayores o menores,
dependiendo de la presencia o ausencia de signos de toxicidad o mortalidad. Este procedimiento continúa hasta que se identifica la
dosis que causa toxicidad o no más de una muerte, o cuando no se observan efectos con la dosis más alta o cuando se producen
muertes con la dosis más baja.

12. La sustancia problema se aplica sobre la piel en dosis graduadas a animales de experimentación, utilizándose una
dosis por grupo. Posteriormente se realizan observaciones de efectos y muertes. A los animales que mueren durante la prueba se
les practica la necropsia y, al finalizar la prueba, se sacrifican y se les practica la necropsia a los animales supervivientes.

13. A continuación se define la clasificación de la sustancia problema en función del resultado observado.

DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

Selección de especies animales.

14. La rata adulta es la especie preferida para utilizar. Al considerar el sexo más apropiado, las encuestas de pruebas
convencionales de toxicidad oral aguda (17) y de toxicidad aguda por inhalación (18) (19) muestran que normalmente hay poca
diferencia en la sensibilidad entre los sexos, pero en aquellos casos donde se observan diferencias, las mujeres son generalmente
un poco más sensible. Se obtuvo más evidencia de la falta de sensibilidad sexual en una revisión reciente de los datos de toxicidad
dérmica generados en una variedad de productos (16) que confirmó que no hay diferencias de sexo en los resultados del estudio.
Por lo tanto, se recomienda que normalmente se utilicen hembras.
Sin embargo, si el conocimiento de las propiedades toxicológicas o toxicocinéticas de sustancias químicas relacionadas
estructuralmente indica que es probable que los hombres sean significativamente más sensibles, entonces se debe utilizar este
sexo. Cuando la prueba se realice en hombres, se deberá proporcionar una justificación adecuada.
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15. Se deben emplear animales adultos jóvenes sanos de cepas de laboratorio comúnmente utilizadas. Las hembras
deben ser nulíparas y no estar embarazadas. Cada animal, al inicio de su dosificación, debe ser un adulto joven (de al menos 8­10
semanas de edad) con un tamaño que facilite la realización de la prueba (200­300 g) y su peso debe estar dentro de un intervalo
de ± 20 % del peso medio de los animales previamente dosificados.
Se requieren animales con piel sana e intacta.

Condiciones de vivienda y alimentación.

dieciséis.
La temperatura en la sala de animales de experimentación debe ser de 22ºC (±3ºC). Aunque la humedad relativa debe
ser de al menos el 30% y preferiblemente no exceder el 70%, excepto durante la limpieza de la habitación, el objetivo debe ser del
50 al 60%. La iluminación debe ser artificial, siendo la secuencia 12 horas de luz, 12 horas de oscuridad. Para la alimentación se
pueden utilizar dietas convencionales de laboratorio con un suministro ilimitado de agua potable.

Preparación de animales

17. Los animales se aclimatan a las condiciones del laboratorio durante al menos cinco días antes del inicio del estudio,
utilizando jaulas grupales por razones de bienestar. Los animales se seleccionan al azar para su uso en el estudio y se marcan
para proporcionar una identificación individual.

18. El día antes de la administración de la sustancia problema, se debe eliminar todo el pelo de la zona dorsal/flanco de
los animales de ensayo (es decir , al menos el 10 % de la superficie corporal total) mediante un recorte estrecho.
Se pueden utilizar anestésicos para ayudar en el manejo de los animales y minimizar el estrés. Se debe tener cuidado de no
raspar la piel, lo que podría alterar su permeabilidad. Se deberá tener en cuenta el peso del animal a la hora de decidir la zona a
despejar y las dimensiones de la cubierta.

PROCEDIMIENTO

administración de dosis

19. La sustancia problema debe aplicarse lo más uniformemente posible sobre la zona expuesta de la piel dorsal o del
flanco (es decir , al menos hasta el 10 % de la superficie corporal total). En el caso de sustancias problema altamente tóxicas, la
superficie cubierta puede ser menor, pero igual. La zona debe cubrirse con una película lo más fina y uniforme posible. Las
sustancias problema deben mantenerse en contacto con la piel con un apósito de gasa porosa y una cinta no irritante durante un
período de exposición de 24 horas. El lugar de ensayo debe cubrirse adicionalmente de manera adecuada para retener el apósito
de gasa y la sustancia problema y garantizar que los animales no puedan ingerir la sustancia problema. Esto podría implicar el
uso de un dispositivo de sujeción si fuera necesario, aunque esto no debería dar lugar a la inmovilización del animal. Durante el
período de exposición de 24 horas, los animales podrán enjaularse individualmente para evitar la ingestión oral de la sustancia
problema por otros animales de la jaula.

20. Cuando se ensayen sólidos, que pueden pulverizarse si procede, la sustancia problema debe humedecerse
suficientemente, preferiblemente con agua o, cuando sea necesario, con un vehículo adecuado para garantizar un buen contacto
con la piel. Cuando se utiliza un vehículo (que no sea agua), debe tenerse en cuenta la influencia del vehículo en la penetración
de la sustancia problema en la piel. Se debe registrar la cantidad de vehículo utilizado (generalmente son suficientes de 0,5 a 1
ml). Los productos problema líquidos generalmente se utilizan sin diluir.

21. Al final del período de exposición, deben eliminarse los restos de la sustancia problema, cuando sea posible utilizando
agua o un disolvente adecuado. Los animales serán devueltos a alojamientos grupales a menos que existan motivos para alojarlos
individualmente (por ejemplo , existe la preocupación de que el contacto con otros animales pueda aumentar el estrés debido a la

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naturaleza y gravedad de los signos de toxicidad, o podría provocar una exacerbación de los efectos cutáneos locales). Sin embargo, se
debe minimizar el tiempo que los animales permanecen alojados individualmente.

Número de animales y niveles de dosis.

22. La sustancia problema se administra a animales individuales de manera secuencial; se utilizan dos animales a cualquier nivel
de dosis seleccionado en el estudio principal. Generalmente, si se requiere un estudio de toxicidad dérmica aguda porque no se aplican
los criterios de exención, la toxicidad dérmica aguda esperada probablemente será desconocida o alta (por ejemplo, LD50 < 200 mg/kg de
peso corporal).

23. Cuando no hay información o ésta es insuficiente sobre una sustancia problema, se recomienda realizar un estudio de
determinación del rango de dosis utilizando 1 animal a una dosis inicial de 200 mg/kg de peso corporal para minimizar el uso de animales
y optimizar el diseño del estudio (consulte el diagrama de flujo del Anexo 2 para estudio de determinación de rangos). Con base en el
resultado del estudio de búsqueda de rango, el estudio principal se puede realizar con 2 animales más para confirmar el resultado de la
clasificación, siguiendo el procedimiento descrito en el diagrama de flujo del Anexo 2 para el estudio principal. Este enfoque está
respaldado por una evaluación biométrica (11) que se realizó para comparar varios diseños de estudios con sus respectivas predicciones
de clasificación. Esto es para garantizar la confianza en el diseño del estudio recomendado, donde solo se necesitan dos animales en el
estudio principal para generar la clasificación correcta.

24. Si se dispone de información sobre la sustancia problema y aún así no es posible una exención, se podrá elegir una dosis
inicial diferente, por ejemplo , 50, 1.000 o 2.000 (similar a una dosis límite) mg/kg de peso corporal, siguiendo el mismo procedimiento
(intervalo ­estudio de resultados seguido del estudio principal), basado en las categorías del GHS para la toxicidad cutánea aguda (10).

Se permitirá un período de al menos 48 horas entre las pruebas de cada animal, aunque esto dependerá de la aparición,
duración y gravedad de los signos tóxicos. El tratamiento de los animales con el siguiente nivel de dosis debe retrasarse hasta que se
tenga confianza en la supervivencia de los animales que recibieron la dosis anterior. Todos los animales deberían
Normalmente se observará durante al menos 14 días.

OBSERVACIONES

26. Los animales se observan inmediatamente después de la administración al menos una vez durante los primeros 30 minutos,
periódicamente durante las primeras 24 horas, prestándose especial atención durante las primeras 2 a 6 horas después del inicio del
período de exposición, y diariamente a partir de entonces, hasta un total de 14 días. Sin embargo, la duración de la observación no es fija,
sino que debe estar determinada por la naturaleza y el momento de aparición de los signos clínicos y la duración del período de
recuperación. Los momentos en que aparecen y desaparecen los signos de toxicidad son importantes, especialmente si existe una
tendencia a que los signos de toxicidad se retrasen (4). Todas las observaciones se registran sistemáticamente, manteniéndose registros
individuales para cada animal. Los animales que se encuentren en estado moribundo y los animales que muestren dolor intenso y/o signos
permanentes de angustia grave deben ser sacrificados sin demora y sin medidas humanitarias. Cuando se sacrifican animales por razones
humanitarias o se encuentran muertos, la hora de la muerte debe registrarse con la mayor precisión posible.

27. Las observaciones deben incluir cambios en la piel y el pelaje, los ojos y las membranas mucosas, y también los sistemas
respiratorio, circulatorio, autónomo y nervioso central, y la actividad somatomotora y el patrón de comportamiento. Se debe prestar
atención a las observaciones de temblores, convulsiones, salivación, diarrea, letargo, sueño y coma. Además, el lugar del tratamiento
puede observarse 24, 48 y 72 horas después de la eliminación de la sustancia problema utilizando los criterios de Draize, ya que estos
datos pueden ser útiles para prescindir de la necesidad de realizar un estudio independiente sobre irritación de la piel in vivo .

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Peso corporal

28. Los pesos individuales de los animales deben determinarse el día de la administración de la sustancia problema o
inmediatamente antes de ella y, posteriormente, al menos semanalmente. Al final de la prueba, los animales supervivientes se pesan y
luego se sacrifican humanamente.

Patología

Todos los animales de prueba (incluidos aquellos que mueren durante la prueba o son retirados del estudio por razones de
bienestar animal) deben ser sometidos a una necropsia macroscópica. Todos los cambios patológicos importantes deben registrarse para
cada animal. También se puede considerar el examen microscópico de órganos que muestren evidencia de patología macroscópica, o del
sitio de tratamiento, en animales que sobrevivan 24 horas o más después de la dosis inicial, porque puede brindar información útil.

DATOS E INFORMES

Datos

30. Se deben proporcionar datos individuales de los animales. Además, todos los datos deben resumirse en forma de tabla,
mostrando para cada grupo de prueba el número de animales utilizados, el número de animales que presentan signos de toxicidad, el
número de animales encontrados muertos durante la prueba o sacrificados por razones humanitarias, el momento de la muerte de animales
individuales, una descripción y la evolución temporal de los efectos tóxicos y su reversibilidad, y hallazgos de necropsia.

31. Como se establece en el anexo 2, debe determinarse la categoría de clasificación de la sustancia problema. La acción que se
debe tomar después de la prueba con la dosis inicial se indica en el diagrama de flujo. Al utilizar el estudio de determinación de alcance,
se requerirá una de tres acciones en el estudio principal; 1) probar con el mismo nivel de dosis para confirmar los resultados, 2) probar con
el nivel de dosis más alto o 3) probar con el nivel de dosis más bajo. En el estudio de determinación del rango de dosis, no es necesario
revisar en el estudio principal una dosis que causó la muerte, para proteger a los animales de un sufrimiento innecesario. Los resultados del
estudio principal con los 2 animales adicionales por dosis confirmarán la clasificación de peligro adecuada y no serán necesarias más
pruebas.

Informe de prueba

32. El informe de prueba deberá incluir la siguiente información, según corresponda:

Justificación de las pruebas in vivo: análisis del peso de la evidencia de los datos de pruebas preexistentes:

– descripción de los datos pertinentes disponibles en pruebas anteriores; –

datos obtenidos en cada paso de la estrategia de prueba;

– análisis de peso de la evidencia para realizar estudios in vivo ;

Producto de prueba

­ fuente, número de lote, fecha límite de uso, si está disponible;

­ estabilidad de la propia sustancia problema, si se conoce;

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­ solubilidad y estabilidad de la sustancia problema en el vehículo, si se conocen;

Sustancia monoconstituyente:

­ apariencia física y propiedades fisicoquímicas adicionales relevantes (por ejemplo, reserva ácida/alcalina);

­ identificación química, como nombre IUPAC o CAS, número CAS, código SMILES o InChI, fórmula estructural,

­ pureza,

­ identidad química de las impurezas según sea apropiado y prácticamente factible, etc.

Sustancias multiconstituyentes, UVCB y mezclas:

­ caracterizado en la medida de lo posible por la identidad química (ver arriba), la ocurrencia cuantitativa y
Propiedades fisicoquímicas relevantes de los constituyentes y la mezcla.

Vehículo (si procede):

justificación del uso del vehículo y justificación de la elección del vehículo (si no es agua).

Animales de prueba:

especie/cepa utilizada;

estado microbiológico de los animales, cuando se conozca;

número, edad y sexo de los animales (incluida, cuando proceda, una justificación para el uso de machos en lugar de hembras);

fuente, condiciones de vivienda, dieta, datos históricos, etc.;

detalles sobre la calidad de los alimentos y el agua (incluido el tipo/fuente de dieta y la fuente de agua);

Método de aleatorización en la selección de animales.

Condiciónes de la prueba:

detalles de la formulación de la sustancia problema, incluidos detalles de la forma física de la sustancia problema
administrado;

detalles de la administración de la sustancia problema y del lugar de tratamiento, incluidos los volúmenes de dosificación,
área de aplicación y duración de la exposición;

la justificación de la selección de la dosis inicial;

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Resultados:

tabulación de los datos de respuesta y el nivel de dosis para cada animal (es decir, animales que muestran signos de toxicidad,
incluida la mortalidad, la naturaleza, la gravedad y la duración de los efectos);

− tabulación del peso corporal y de sus cambios;

peso individual de los animales el día de la exposición, posteriormente en intervalos semanales y en el momento de la muerte o
la eutanasia; − fecha y hora de la muerte si es anterior al sacrificio programado;

curso temporal de aparición de los signos de toxicidad y si fueron reversibles para cada animal;

resultados de la necropsia y hallazgos histopatológicos de cada animal, si están disponibles;

­ evaluación de los criterios de Draize, si se realiza;

­ procedimiento de interpretación de datos

Discusión e interpretación de resultados.

Conclusiones.

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LITERATURA

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ANEXO 1

DEFINICIONES

La toxicidad cutánea aguda es el efecto adverso causado por una sustancia problema tras una única exposición ininterrumpida mediante aplicación
cutánea durante un período corto de tiempo (24 horas o menos).

La dosis es la cantidad de sustancia problema administrada. La dosis se expresa como peso de la sustancia problema por unidad de peso del
animal de prueba (p. ej., mg/kg de peso corporal).

GHS: Sistema de Clasificación Globalmente Armonizado de Sustancias y Mezclas Químicas. Una actividad conjunta de la OCDE (salud humana y
medio ambiente), el Comité de Expertos de las Naciones Unidas en Transporte de Mercancías Peligrosas (propiedades físico­químicas) y la OIT
(comunicación de peligros) y coordinada por el Programa Interorganizacional para la Gestión Racional de los Productos Químicos (IOMC) ).

La muerte inminente es cuando se espera un estado moribundo o la muerte antes del siguiente momento planificado de observación. Los signos
indicativos de este estado en roedores podrían incluir convulsiones, posición lateral, decúbito y temblor. (Consulte el Documento de orientación de
Humane Endpoint nº 19 (14) para obtener más detalles).

La LD50 (dosis letal media) es una dosis única derivada estadísticamente de una sustancia química que se puede esperar que cause la muerte en
el 50 por ciento de los animales cuando se administra por la ruta de exposición determinada. El valor LD50 se expresa en términos de peso de la
sustancia problema por unidad de peso del animal de prueba (mg/kg de peso corporal).

La prueba límite se refiere a una dosis con un límite superior en la prueba (2000 mg/kg de peso corporal).

El estado de moribundo es estar en un estado de agonía o incapacidad para sobrevivir, incluso si recibe tratamiento. (Consulte el Documento de
orientación sobre criterios de valoración humanitarios n.° 19 (14) de la OCDE para obtener más detalles).

Muerte predecible: presencia de signos clínicos indicativos de muerte en un momento conocido en el futuro antes del final previsto del experimento,
por ejemplo: imposibilidad de alcanzar agua o alimentos. (Consulte el Documento de orientación de Humane Endpoint nº 19 (14) para obtener más
detalles).

Producto problema: designa lo que se prueba.

UVCB: sustancia de composición desconocida o variable, productos de reacción complejos o materiales biológicos

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402 OCDE/OCDE

ANEXO 2

DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO DE PRUEBA

Estudio de búsqueda de rango

12

© OCDE, (2017)
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ENV/JM/WRPR(2017)36

Estudio principal

Dosis de estudio de búsqueda de rango: p. ej., 200 mg/kg

COMENZAR

2 animales 2 animales 2 animales 2 animales

50 mg/kg 200 mg/kg 1000 mg/kg 2000 mg/kg

A B C A B C A B C A B C

Clasificar categoría GHS 1 2 2 3 3 4 4 5 5/Sin clasificar

Resultado

A 2 muertes

B 1 muerte

C Sin toxicidad evidente y sin muertes.

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