SINTESIS Y

MADURACIÓN DEL RNA

ASPECTOS : 1. Transcripción
2. Código Genético
3. Traducción
4. Control de la expresión génica

1. Transcripción:
 No todos los genes que existen se expresan todo el
tiempo.
 Dependiendo de las necesidades celulares, unas
veces se expresan unos genes y otras veces otros.
 Gen a expresar : COPIA

TRANSCRIPCIÓN
Consiste en que la secuencia de nucleótidos de una gen
se transcribe a un mRNA que se separa y viaja del
núcleo al citoplasma hasta los ribosomas.
2. Código genético: El gen se escribe en un lenguaje
DNA alfabeto (A, T, C y G). Se expresa en proteína
alfabeto (20 aa).
Para traducir un idioma a otro (DNA Proteína) se
necesita una clave: CÓDIGO GENÉTICO

3. Traducción: El mensaje escrito (mRNA) tiene que

traducirse a aa.
tRNA (transferente) Los aa. determinado de acuerdo
secuencia del mRNA (CODON)

tRNA: Reconoce el codon

Síntesis de polipéptido
en el Ribosomas
Replicación: “ DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA
Autocopia del DNA MOLECULAR ”

Transcripción:
DNA mRNA

Traducción:
A proteínas
Ribosomas
rRNA

tRNA

Básicos en:
Procariotas y
eucariotas
 LA TRANSCRIPCIÓN

 Formación de RNA tomando el DNA como molde.

 Enzima RNA POLIMERASA (Transcriptasa).
 RNA pol Lee una hebra de DNA y polimeriza una hebra
de RNA complementario.
 Síntesis de RNA: 5’ 3’
 Molde: Solo una de las 2 hebras de DNA
 RNA recién trascrito Pre – RNA
“Maduración”
RNA:
RNA ribosómico (rRNA)
RNA de transferencia (tRNA)
RNA mensajero (mRNA)

• Pre – rRNA madurará rRNA

• tRNA y rRNA Forman parte de la maquinaría propia

de la síntesis de proteínas.

Procariotas: mRNA Único RNA que no requiere

modificaciones postranscripcionales, son leídos
directamente en la síntesis de proteínas.

Eucariotas:
Pre – mRNA Intermediarios en el transporte de
información desde el DNA ribosoma síntesis
de proteínas.
 mRNA (procariota y eucariota):

Intermediario en el transporte de información

desde el DNA al ribosoma para la síntesis de
las proteínas.
 TRANSCRIPCIÓN DE mRNA EN PROCARIOTAS:

RNA POLIMERASA EN E. coli

 Enzima muy grande (~500 Kb), formado por 4 subunidades

 Forman un complejo llamado: Holoenzima

HOLOENZIMA (Enzima completa y cataliticamente activa):

PROTEÍNA (APOENZIMA) + COFACTOR:
ION O MOLÉCULA ORGÁNICA (COENZIMA): NAD+ NADH
RNA POLIMERASA :
 Subunidad σ Reconoce el promotor (inicia la sintesis)
 Subunidad α Se une a secuencias reguladoras
 Subunidad β’ Se une al DNA molde
 Subunidad β Se une a los NTPs y forma el enlace
fosfodister

Síntesis de RNA:

INICIACIÓN

ELONGACIÓN

TERMINACIÓN
 FUNCIONES DE LA RNA POLIMERASA

1. Localiza en el DNA los centros de iniciación

2000 promotores en E. coli
2. Desenrolla un tramo de DNA DNA de hebra sencilla.
3. Selecciona el NTP correcto y cataliza la formación del enlace
fosfodiester.
4. Localiza las señales de terminación de la transcripción.
5. Interaccionan con las proteínas activadoras y represoras que
modulan la velocidad de la transcripción.

Necesita:

Molde : DNA
Precursores activados: ATP, GTP, UTP y CTP
Ion metálico divalente: Mg++ o Mn++
No requiere: Cebador
No presenta: Actividad correctora
INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN:
 Inicia en los centros promotores del DNA molde.
 Promotores: 2 tramos de secuencias comunes al 5’ del punto de
iniciación:
 Sec. -10 (TATAAT) A -10 nucleótidos del primer
transcrito.
 Sec. -35 (TTGACA) A -35 nucleótidos del primer
transcrito.

5’ ----------------------TTGACA------------------------TATAAT----------------1er sitio de
~35 (6pb) ~10 (6pb) iniciación

 La hebra molde de DNA es completaría del RNA transcrito.

 La hebra codificadora del DNA tiene la misma sec. del RNA
transcrito.
 Hebra codificadora hebra sentido (+)
 Hebra molde hebra antisentido (-)
La subunidad sigma capacita al a RNA Polimerasa para reconocer
los centros promotores:

 Contribuye mediante la disminución de la afinidad de la

RNA polimerasa por regiones inespecíficas del DNA
 Posibilita que la RNA polimerasa reconozca las secuencias
promotoras

 Sigma Polipéptido esencial para iniciar la transcripción

 Sigma + RNA POL Inicio de la transcripción.
Los promotores de todos los genes tiene la misma secuencia
(promotor) Sec. consenso.
Súperenrollamientos (+) Girasa (facilita la transcripción)

La RNA POL desenrolla casi 2 vueltas del DNA molde antes de iniciar
la síntesis de RNA
RNA POL desenrolla 17 pb promotores.

Formación del primer enlace fosfodiéster

LAS CADENAS SE RNA COMIENZAN CON pppG O CON
pppA Y SE SINTETIZAN EN SENTIDO 5’ 3’

 RNA recién sintetizado lleva una señal:

inicio de su síntesis: pppG o pppA

 No es necesario un cebador
ELONGACIÓN DE LA CADENA DE RNA
 Inicia después de la formación del primer enlace fosfodiéster
 Perdida del factor sigma (σ).
Núcleo de la enzima se une más fuerte al molde de DNA

Se Forma:
 BURBUJA DE TRANSCRIPCIÓN : RNA pol, DNA y RNA nuevo.
 Hélice hibrida: RNA recién sintetizado y DNA molde (12pb)
 Velocidad de síntesis: 50 nucleótidos por segundo

IMPORTANTE:
RNA Pol: No corrige
Fidelidad: transcripción < replicación
Tasa de error: 1 fallo / 104 bases
 BURBUJA DE TRANSCRIPCIÓN DURANTE LA
ELONGACIÓN

17 pb
Rebobinado
Desenrollamiento

12 pb
TERMINACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN

 Cesa la formación de enlaces fosfodiéster

 Se disocia el híbrido RNA-DNA
 Se rebobina la región fundida del DNA
 Se libera la RNA polimerasa del DNA

Señales de terminación (stop signals)

 Región palindrómica rica en GC seguida de AT

Palabra o frase que

El transcrito se leede
de RNA igual
estehacia
DNAdelante que hacia
palindrómico es atrás.
Ej. Arenera, radar, seres
autocomplementario
anita lava la tina
 Formación de una Horquilla seguida de 4 o más U
“horquilla-oligo U”
Una horquilla de RNA
seguida de varios residuos
de Uridina provoca el fin
de la transcripción.

El sigma vuelve al núcleo

de la enzima para buscar
un nuevo promotor.

La proteína RO
terminación
de la transcripción

RO (P): detecta señales

de terminación adicionales
que no son reconocidas
por la RNA polimerasa
(P) Se une al RNA

Rompe la hélice DNA-RNA

 Proteína Nus A Capacita a la RNA POL para reconocer
otro tipo de terminación.
E. coli Señales de terminación llamadas atenuadoras

Necesidades nutricionales

RNA ribosomico en procariotas (rRNA):

Pre-RNA ribosómicos y pre-RNA transferencia

Modificaciones postrancripcionales rRNA y tRNA

tRNA y rRNA Corte y modificación del RNA naciente.
E. coli: 3 rRNAs y 1 tRNA (nucleasas específicas)
Ribonucleasa P origina 5’ correcta en tRNA
Ribonucleasa III rRNAs (5S, 16S y 23S)
Segundo tipo de maduración Adición de nucleótidos al extremo
terminal de algunos RNAs cola poli(U)
Tercer tipo de maduración Modificación de bases y
unidades de ribosa en los rRNAs
REMOCIÓN DEL INTRON DE LA SECUENCIA
CODIFICADORA
Antibióticos inhibidores de la transcripción:
 Rifampicina: Bloquea la formación del primer enlace
fosfodiester en la cadena de RNA.
Centro de acción β (RNA POL)

 Actinomicina D: Evita que el DNA actué como molde

para la síntesis de RNA

Inhibe la formación de RNA

(procariotas y eucariotas) cáncer
La transcripción es asimétrica:
RNA POL Lee solo una de las dos hebras de DNA
(Codogénica, sentido o codificadora)
La complementaría Antisentido
Ej:
DNA 3’ - ATCGATCG - 5’ RNA 3’ - GCUAGCUA - 5’
RNA 5’ - UAGCUAGC - 3’ DNA 5’ - CGAT CGAT - 3’

POLIPEPTIDOS DISTINTOS
GRACIAS
TRANSCRIPCIÓN DE mRNA EN EUCARIOTAS:
Transcripción y traducción:

Separación temporal y espacial: Permite regular

la expresión génica contribuyendo a la riqueza de forma y
funciones.
Eucariotas Regiones con diferente capacidad
transcripcional.
Zonas no funcionales que no son activas a la transcripción
 DNA + histonas núcleosomas

movilizarse para hacer el DNA accesible a la RNA POL

Las histonas Represoras de actividad génica
Cromatina incompetente: Cuando los genes situados en ella no
se transcriben proteínas no usadas en
ese tejido.
Superenrollada (tej. diferenciado)
No funcional (condensada
excepto en embriones)
Cromatina competente: Transcribe en tejido diferenciado.
Relajada
Activa (DNA separa a cada lado
del núcleosoma – RNA POL)

TIPOS DE RNA POLIMERASAS EN EUCARIOTAS:

El RNA de las células eucariotas se sintetizan por 3 diferentes
tipos de RNA POL:
La RNA POL I Nucleolo rRNA 18S, 5.8S y 28S
 La RNA POL III Núcleo rRNA 5S
La RNA POL II Núcleo Pre-mRNA
RNA POL II Subunidades:
RPB1 β (RNA POL-procariota)
RPB2 β’ (RNA POL-procariota)
CTD Reconocimiento de
señales de activación.
Amanita phalloides α-amanita Bloquea RNA POL II y III
mRNA eucariota:
Sec. líder (sec. consenso): 5’pipiATTCPu Transcripción

m-7-G(5’)pppA adición enzimartica de 7-metil-guanosina

CAP (protege al mRNA) citoplasma

Asociación al ribosoma Proteínas de unión a CAP

TRADUCCIÓN Síntesis de polipéptidos

(PROTEÍNAS)
 mRNA También se modifica antes de su paso al
citoplasma Cola terminal de adeninas
Cola poli – A al 3’ mRNA
(200 aprox.)
Cola poli – A Protege el mRNA (núcleo→citoplasma)
ATP Dador de los adenilatos.
Promotor eucariota: CAJA TATA
Centro de iniciación de la transcripción
CAJA TATA (TATAAAA) (Promotor de la RNA POL II) 5’ del
centro del inicio de la transcripción 30 dNTP
arriba del lider.
5’ ----------------------LIDER---------------------------TATAAAA--------------1er sitio de
iniciación

Mutaciones en la caja TATA No hay transcripción.

Unión caja TATA papel clave en el
acoplamiento de los complejos de la transcripción activados.
Inicio de la Transcripción:

TATA + TFIID Factor de

transcripción
Clave: Reconocimiento de
la caja TATA por:
TFIID + proteína de unión a
la caja TATA TBP

corazón del complejo de

iniciación.
Intensificadores:
TFIIA + TFIIB + TFIIE

APARATO BÁSICO DE
LA TRANSCRIPCIÓN
Sec. Intensificadoras:

Estimulan la transcripción
en centros de iniciación
alijada millones de bases.

La actividad de muchos
promotores aumenta
debido a secuencias
intensificadoras.

Intensificadores:

Eficaz en ciertos
tipos de células: Factores de transcripción y otras proteínas
Ej: que se unen a estas secuencias reguladoras
Intensificador de Ig se pueden considerar como contraseñas,
dando acceso a la RNA POL a genes
linfositos B específicos.
MADURACIÓN DEL mRNA EUCARITICO (Splicing):
El mRNA eucariotico sufre un proceso de acortamiento.
RNA nucleares hnRNA RNA nuclear heterogéneo
Maduración: hnRNA mRNA:
La mayor parte son innecesarios para la traducción y son
eliminados INTRONES
Las piezas que contienen el mensaje se empalman en el mRNA
maduro que traduce a proteína EXONES
 Genes (Célula eucariota, virus y algunas mitocondrias)
Exones Proteínas ; Intrones Eliminados
Ej: Gen de ovoalbumina (7 exones y 6 intrones):
7700 nucleótidos (hnRNA) 1872 (mRNA)
Eucariotas Corte y empalme de exones

SPLICEOSOMAS Partículas de ribonucleoproteína

Los puntos de empalme de los pre-mRNA están situados en los
extremos de los intrones.
La secuencia de un intron comienza con GU y termina con AG.
Espliceosoma Reconoce la sec. de los intrones
Long. de los intrones es de 50 – 1000 nucelótidos.
Talasemia (anemia hereditaria) mutación (empalme aberrante)
RNA nucleares pequeños (snRNAs) de los espliceosomas
catalizan el empalme de los precursores de mRNA.
snRNA RNAs pequeños nucleares.
scRNA RNAs pequeños citoplasmáticos.
snRNA + scRNA Partículas peq. de ribonucleoproteína
nuclear snRNPs

ESPLICEOSOMAS snRNPs + Pre - mRNA

ESPLICEOSOMA: EXON 1 EXON 2
Corta primero el intron por el INTRON
extremo izq. (GU), se dobla y
y forma un enlace interno
entre la G (GU) y la A (AG)
formando un lazo el cual es
cortado y los exones se
unen = Mrna.
Empalme entre exones:
Corte del enlace fosfodiester
entre exon 1 y el intron
El OH de A (situada a la mitad del intron)

Ataca el fosfato terminal del intron

enlace fosfodiester Lazo

El 3’-OH (Exon 1) ataca el enlace fosfodiester situado
entre el intron y el Exon 2
Exones 1 y 2 (se unen) ; intron (elimina)
ESPLICEOSOMA:
snRNPs U1
GU
(Centro de empalme)
U2 Centro de ramificación
A
+ Complejo U4 – U5 – U6

Espliceosoma completo

snRNA U2 y U6:
centro catalítico
U2, U5 y U6:
Se van con el
intron cortado.
 Fuente : Stryer Luber
snRNAs
Long
snRNA Función
(nts)
Se une al sitio de corte 5’ y luego
U1 165
al sitio de corte 3’
Une las secuencias de los
U2 185 intrones a cortar y forma parte del
centro catalitico
Ayuda a la actividad catalitica del
U4 116
U6
U5 145 Se une al sitio de corte 5’

U6 106 Cataliza el splicing

 Splicing
Definicíón:
Remover segmentos (intrones) del transcripto
primario y unir los segmentos codificantes
(exones)

Categories
1. Cis – splicing (RNA –Splicing, Splicing)
Segmentos (exons) de la misma molecula de RNA
son unidos.
2. Trans – splicing
Un segmento (SL RNA) de una molecula de RNA es
fusionado con otra moléculade RNA.
Ejemplo: Trypanosomes, Leishmania
 Cis- -splicing
Cis splicingmechanism
mechanism
5’ splice site branch site 3’ splice site

Exon 1 Intron Exon 2

U1
GU U2
A AG
U5
U4
U6 ATP

AG
U1 U2
U5
U4
U6
Características el proceso:
RNA juega un papel clave en la dirección del
alineamiento de los centros catalíticos.
Las proteínas dependientes de ATP inducen la
liberación de las ribonucleoproteínas de los pre-
mRNA y los intrones.
“No todos los genes se traducen a proteínas”:
Los genes (DNA) que transcribe el rRNA y el tRNA

UNIDAD TRANSCRIPCIONAL

Unidad transcripcional rDNA:

Procariotas: rRNAs (16S, 5S y 23S) + tRNA
Eucariotas: rRNAs (18S, 5.8S y 28S) RNA POL I
rRNA 5S RNA POL III
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:
El largo transcrito es ITS ITS
un precursor el cual
posee los tres rRNAs:
ETS ETS
Procesamiento:

Cortes endonucleótidicos

Metilación de 2’-hidroxil
La unidad de
transcripción completa
incluye:
2 espaciadores no
codificantes : ITS
2 espaciadores no
codificantes: ETS
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:
La “Unidad de Transcripción de rDNA”:

El número de copias del

rDNA es conocido en
muchos organismos.
Cada unidad de
transcripción del rDNA
dentro del cluster es
separada por
espaciadores
intergenicos: IGS
IGS:
2 kpb Levaduras
30 kpb Mamíferos.
La secuencia dentro de
los IGSs es
marcadamente diferente
de una especie a otra.
Maduración del tRNA:
E. coli: 40 tipos de tRNA
tRNA Une un aa determinado de acuerdo a la
secuencia del mRNA. CODON
tRNA Lleva al ribosoma el aminoácido
correspondiente a cada codon (3dNTP) para la
síntesis de proteínas.
Pre – tRNA moleculas de tamaño mucho mayor que los
tRNA funcionales. Maduración postranscripcional.
Estructura primaria de los tRNA:
5’ – lider – tRNA – trailer – 3’
5’ – lider – tRNA – esp – tRNA – esp…. – tRNA – Trailer – 3’
mas de 2 genes para tRNA
Pre – tRNA Ribonuclesa P tRNA
Líder, trailer y espaciadores Eliminados
tRNA posteriores modificaciones en sus bases

apareamientos intrahebra
Intricada estructura espacial propia y única.
Maduración del tRNA:
Uridinas reducidas a dihidrouridinas.
Uridinas modificadas a pseudouridinas
Adeninas desaminadas a inosina
Otras modificaciones: 5-metil-guanosina
1-metil-citosina

Enzima:
nucleotidil transferasa

CCA – OH

tRNA
+ aa
Eucariotas:
tRNA RNA POL III
tRNA intrones en
lazo anticodon
RNA autoempalmante (RNA Catalítico):
RNA Actividad catalítica y procesarse a así mismo
en ausencia de proteínas.
Cofactor requerido GMP, GDP o GTP
G se une al RNA y luego ataca el empalme 5’ par aformar un
enlace fsofodiester
El 3’ –OH recien formado del exon ataca el 5’ lo cual une los 2
exones L19 RNA (395) (Nucleasa y polimerasa)
Hybridization of ovalbumin mRNA with its
corresponding DNA

Ovalbumin gene (linear presentation)

 Poly-adenylation
cleavage site
5’-cap
Coding sequence
AAUAAA GU-rich

10 – 30 nts 20 – 40 nts

Endonuclease

AAUAAA
ATP
Polyadenylate polymerase
RNA+ nATP = RNA-(AMP)n + nPPi
PPi
AAUAAA AAA(A)n

80 – 250 A’s
RNA mensajero
procariota

RNA mensajero
eucariota
LA TRANSCRIPCIÓN Y LA TRADUCCIÓN ESTAN SEPARADAS
TEMPORAL Y ESPACIALMENTE EN EUCARIOTAS