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UNIVERSIDAD LIBRE

Pereira - Barranquilla - Socorro

MODELADO PREDICTIVO DE ESCHERICHIA COLI O157:H7


EN ALIMENTOS
Redondo Alejandra; Torres, Elvira1; Sánchez Juan David2

Resumen diferentes temperaturas. Este texto busca


Escherichia coli O157:H7 es un patógeno mostrar una perspectiva a las aplicaciones
asociado diarrea inespecífica, diarrea san- informáticas que faciliten el modelado pre-
guinolenta, Síndrome Urémico Hemolítico dictivo de E. coli O157:H7 en alimentos, su
(SUH) y la Enfermedad Diarreica Aguda importancia y la aplicabilidad los mismos.
(EDA), responsable de complicaciones
intestinales, sistémicas y otra serie de Palabras clave: Modelos Predictivos, Pa-
Enfermedades Transmitidas por Alimen- tógeno, Carne, ETA, O157:H7
tos (ETA). Su identificación se realiza me-
diante pruebas bioquímicas, serológicas Abstract
y moleculares. Se encuentra distribuido Escherichia coli O157:H7 is a pathogen
en diversos países industrializados a ni- associated with nonspecific diarrhea, bloo-
vel mundial, donde se han llevado a cabo dy diarrhea, Hemolytic Uremic Syndro-
estudios previos sobre su identificación me (HUS) and Acute Diarrheal Disease
en heces, agua y alimentos. La transmi- (ADD), responsible for intestinal systemic
sión se produce principalmente a través complications and another series of Foo-
de agua contaminada y otros alimentos dborne Diseases (FBD). E. coli O157:H7
como la carne picada, vegetales, leche identification includes biochemical, serolo-
cruda y fruta. Aplicar modelos predicti- gical and molecular tests. It is distributed in
vos resulta una manera adecuada para several industrialized countries worldwide,
predecir el comportamiento de E. coli where previous studies on its identifica-
O157:H7 en diferentes matrices alimen- tion in feces, water and foods have been
tarias, permitiendo tomar medidas para carried out. Transmission occurs mainly
controlar su desarrollo y reducir su inci- through contaminated water and other
dencia como causante de ETA. Ejemplos foods such as minced meat, vegetables,
de modelos predictivos de otros países raw milk and fruit. Predictive models are
son el propuesto por el Departamento de therefore a suitable way to predict the be-
Agricultura de los estados Unidos (USDA), havior of E. coli O157:H7 in different food
MicroHibro de la Universidad de Córdoba matrices, allowing measures to control its
(España) y @Risk® (USA). En Colombia, development and reduce its incidence as
no se han desarrollado modelos predicti- a cause of FBD. Examples of predictive
vos para describir el comportamiento de E. models from other countries are the pro-
coli O157: H7 en los alimentos, pero si se posed by the United States Department
ha empleado el software Pathogen Mode- of Agriculture (USDA), MicroHibro of the
llig Program (PMP) Versión 6.0 de USDA University of Córdoba (Spain) and @
con el Eastern Regional Reseach Center Risk® (USA). In Colombia, no predictive
(ERRC) en la descripción de E. coli sp. a models have been developed to descri-

1 Estudiantes Programa de Microbiología de la Universidad Libre. Barranquilla. alejandrae-

2
lenaredrocha@hotmail.com- elvi0910@hotmail.com
Profesor Asociado Programa de Microbiología de la Universidad Libre. Barranquilla.
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be E. coli O157: H7 behavior inside food, luz intestinal puedan multiplicarse o lisarse
but if USDA’s Pathogen Modellig program alcanzando otros sistemas, y cuyo factor
(PMP) Version 6.0 software in conjuction de virulencia es diferente a una exotoxi-
with the Eastern Regional Reseach Center na7. Macroorganismos causantes de ETA
(ERRC) has been used in the description para destacar son Salmonella Enteritidis,
of E. coli at different temperatures. This Salmonella Typhimurium, Campylobacter
text seeks to show a computer applications spp., Clostridium botulinum, Shigella spp.,
perspective that facilitate E. coli O157: H7 Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus,
predictive modeling in food, its importance Clostridium perfringens y Escherichia coli
and its applicability. serotipo O157:H71. Este último patóge-
no, perteneciente al patotipo de las cepas
Keywords: Predictive Models, Pathogen, de Escherichia coli enterohemorrágicas
Meat, FBD, O157:H7 (EHEC), probablemente el grupo más viru-
lento de las E. coli diarreogénicas debido
a las dos verotoxinas (denominada así ya
Introducción que se les descubrió por primera vez en
Las Enfermedades Transmitidas por los las células Vero, cuyo origen es del riñón
Alimentos (ETA) se definen como un con- del mono verde africano Chlorocebus)8 o
junto de síntomas originados por la inges- toxinas similares a las de Shigella, por lo
tión de alimentos y/o agua, que contengan que también es llamada Escherichia coli
agentes etiológicos en cantidades tales verotoxigénica (VTEC) o Escherichia coli
que afecten la salud del consumidor a ni- productora de toxinas tipo Shiga (STEC).
vel individual o grupos de población(1,4).
Éstas constituyen un problema de salud E. coli O157:H7 se caracteriza por ser un
pública mundial que aumenta con el pasar bacilo gram negativo, anaerobio faculta-
de los años. Entre los factores responsa- tivo, catalasa positivo oxidasa negativo,
bles se destacan el crecimiento de la po- no fermenta el sorbitol, ni la ramnosa y no
blación, la pobreza, la urbanización en los produce β-glucuronidasa, perteneciente a
países subdesarrollados, el comercio in- la familia Enterobacteriaceae9. La deter-
ternacional de alimentos y la aparición de minación del grupo patógeno al que este
nuevos agentes causantes de ETA o nue- microorganismo pertenece se realiza uti-
vas variantes de estos agentes con mayor lizando un esquema de serotipificación
resistencia y patogenicidad(5,6). desarrollado por Kauffman, éste tiene 176
antígenos somáticos (O), 112 flagelares
Las ETA se clasifican en intoxicaciones, (H) y 60 capsulares (K). El antígeno «O»
toxiinfecciones e infecciones. Las intoxi- es el responsable del serogrupo; la deter-
caciones, se producen por la ingestión minación del antígeno somático y flagelar
de toxinas o venenos que se encuentran (O:H) indica el serotipo, el cual en ocasio-
presentes en el alimento ingerido, y que nes se asocia con un cuadro clínico en
han sido producidas por hongos o bacte- particular (10).
rias, aunque éstos ya no se hallen en el
alimento; las toxiinfecciones se producen E. coli O157:H7, se asocia con diversas
al ingerir un microrganismo que dentro del enfermedades cuyo espectro clínico en
cuerpo produce la toxina; y las infeccio- seres humanos incluye diarrea inespecí-
nes, se producen por la ingestión de ali- fica, Diarrea Sanguinolenta (DS), Enfer-
mentos que contienen microorganismos medad Diarreica Aguda (EDA) y Síndrome
38 vivos perjudiciales para la salud, que en la Urémico Hemolítico (SUH) (6).
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La capacidad toxigénica de las cepas es Actualmente se reconoce la existencia de


necesaria para que el paciente desarrolle distintas fuentes y vías de transmisión.
los síntomas, ya que la citotoxina Stx es Los rumiantes, y en particular el ganado
el principal mecanismo de patogenicidad bovino, son el principal reservorio y datos
de STEC y su síntesis está relacionada obtenidos durante los brotes y las infec-
con la presencia del bacteriófago Stx, que ciones esporádicas indican que la fuente
está insertado en el genoma. Una vez que más frecuente de toxiinfección por E. coli
la toxina Stx (subunidad B) se ha fijado a O157:H7 son los alimentos de origen bo-
su receptor Gb3, es endocitada la subu- vino, especialmente la carne de vacuno
nidad A, transportada al aparato de Golgi poco cocida y los productos cárnicos de
y posteriormente hasta el retículo endo- vacuno(13,17). La contaminación se pro-
plásmico rugoso, para inhibir luego la sín- duce como resultado de malas prácticas
tesis proteica. La StxA, en ambas toxinas
de faenado de los animales, su manipula-
shiga, son N-glucosidasa altamente selec-
ción y la higiene de los mataderos(13). La
tivas, que depurinan un residuo especifico
segunda causa más importante por la cual
de adenina de la subunidad ribosomal 60S
de la célula eucariótica, esto bloquea la se propaga esta patología es la ingesta de
síntesis de proteína y conduce a la muerte vegetales crudos(18,19), contaminación
celular de las células intestinales o rena- que se produce al ser E. coli O157:H7 libe-
les del hospedero (9). En las cepas EHEC rada por los animales y los seres humanos
aisladas, se han encontrado las variantes en sus heces he ingresar a los agroeco-
Stx1 y Stx2 que son inmunológicamente sistemas a través del estiércol, aguas de
diferentes. Además de la toxina, las EHEC riego, semillas contaminadas, plagas de
tienen otros mecanismos de patogenici- insectos y animales silvestres, o vectores
dad como el fenómeno de adherencia y nematodos(13). Entre otras matrices ali-
esfacelación (A/E), y presentan el gen cro- mentarias relacionadas con la transmisión
mosomal eae que codifica para la proteína de este microorganismo se encuentran la
de membrana externa de 94 kilodaltones sidra fresca no pasteurizada y la leche cru-
(kDa), llamada intimina, cuya expresión da y sus derivados como el queso fresco y
es regulada por genes plasmídicos. Otro el yogurt(20,23).
factor de patogenicidad es el plásmido
pO157, de 60 megadaltones (MDa), que El análisis retrospectivo de los alimentos
codifica para la enterohemolisina (10,11). relacionados con brotes causados por
este serotipo ha revelado que menos de
Este microorganismo es el serotipo más 10 UFC/g o ml pueden ser suficientes para
reconocido en este grupo y es conside- causar la enfermedad. Dosis infectivas ba-
rado como un patógeno de gran impacto jas, de 2 a 2000 UFC, han sido asociadas
en la salud pública, ya que ha sido iden- con brotes (22,24).
tificado como una cepa causante de ETA
a nivel mundial. Su transmisión se lleva De acuerdo a la Organización Mundial de
a cabo por vía fecal–oral(12) y la fuente la Salud (OMS), un número creciente de
de contaminación de los alimentos son las brotes se asocian al consumo de estos ali-
heces humanas y de animales. La epide- mentos contaminados durante su cultivo,
miología de cada variedad es diferente se- manipulación o cualquier etapa de la ca-
gún el reservorio de la infección, niveles dena, desde la producción primaria hasta
de sanidad e higiene en la comunidad y la preparación para su consumo final, y de
sistemas de producción agrícola y de los ahí, la necesidad de analizar cada proble-
alimentos (13). mática con una visión integral del tipo “de
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la granja a la mesa”(19-26). También se babilidad de aparición de la toxiinfección


ha aislado en masas de agua (estanques, (32).
arroyos), pozos y abrevaderos, y se ha
observado que puede sobrevivir durante Con respecto a la etiología bacteriana de
meses en el estiércol y en los sedimentos la EDA, E. coli O157:H7 es uno de los
de recipientes de agua. Se ha informado principales que se aíslan en los cultivos de
de casos de transmisión por el agua, tan- heces de personas con esta patología. En
to por agua de bebida contaminada como Colombia no se tenían informes de la pre-
por aguas de recreo (19,27,28). sencia de este patógeno, sin embargo, en
1996, se reportó por primera vez, aunque
La principal etiología del SUH es la toxiin- con probabilidad de ser un caso no endé-
fección gastrointestinal por cepas de Es- mico, lo que indica la importancia de resal-
cherichia coli O157:H7, que da origen a tar su intervención y estudio como agente
un cuadro diarréico prodrómico (SUH-D+), causal de la EDA en el país como patóge-
generalmente de características hemorrá- no emergente (33).
gicas o disentéricas. La incidencia de este
síndrome a nivel global se estimó en 2,1 Según lo reportado por el Instituto Nacio-
casos cada 100.000 personas por año. En nal de Salud (INS) en el 2016, la tasa de
Latinoamérica, existen zonas endémicas mortalidad nacional de EDA es de 26,3
como Argentina, que presenta el registro casos por 1.000.000 de menores de cinco
más alto de SUH, con aproximadamente años y la incidencia es de 59,1 casos por
420 casos nuevos declarados anualmen- 1.000 habitantes, en donde las entidades
te(28-30), esto posiblemente debido a la territoriales con incidencia mayor a la na-
elevada frecuencia de enfermedades dia- cional son Bogotá, Valle del Cauca, Quin-
rréicas agudas producidas por toxinas tipo dío, Amazonas, Risaralda, Meta, Antioquia
Shiga en este país. Aunque actualmente y Barranquilla (34).
se conoce que puede aparecer en cual-
quier lugar del mundo y que su frecuencia La comprensión de los riesgos de las en-
está aumentando; en Colombia, en la ciu- fermedades bacterianas transmitidas por
dad de Bogotá, durante el período de junio los alimentos depende del conocimiento
1992 a junio 2002, se demostró mediante de las condiciones ambientales especí-
la realización de un estudio a 63 pacientes ficas que afectan el comportamiento de
con diagnóstico de SUH que entre los mi- los patógenos (es decir, el crecimiento,
croorganismos causantes de la enferme- la supervivencia y la disminución). Esta
dad sólo el 9,5% de los niños la desarrolló información puede traducirse en modelos
por E. coli, sin identificar el serotipo al que matemáticos que permitan estimar cómo
pertenecía(31). Debido a la severidad del los patógenos específicos reaccionarán a
SUH y la carencia de un tratamiento espe- condiciones ambientales únicas (35).
cífico, la prevención primaria de toxiinfec-
ciones por E. coli O157:H7 es fundamen- Realizar una evaluación de riesgos aso-
tal para disminuir su impacto sanitario. ciada a peligros microbiológicos resulta
Las estrategias de control de los riesgos complejo por el potencial de las poblacio-
asociados a E. coli O157:H7 se pueden nes bacterianas para crecer o disminuir
aplicar en diferentes etapas de la cadena en función del microambiente generado
alimentaria y su efectividad dependerá del desde la producción hasta el consumo, lo
conocimiento que se tenga sobre el im- cual obliga además a considerar las incer-
40 pacto que cada etapa posee sobre la pro- tidumbres, es decir, la falta de conocimien-
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to sobre una propiedad medible de un sis- los primarios: de transferencia, modelos


tema (un ejemplo es el momento en que de crecimiento e inactivación(38), siendo
alimento contaminado entra en la línea de el último el tipo de modelo que estudia la
procesamiento ya que se desconoce con muerte de los microorganismos bajo con-
qué frecuencia un lote de alimento conta- diciones especiales o la inactivación de
minado ingresa a la fábrica) y variabilidad estos o de sus toxinas (39).
propias de dicho proceso biológico (36).
Actualmente, con el fin de facilitar el mo-
Los modelos de crecimiento microbiano in- delado predictivo de microorganismos pa-
tegrados a un modelo cuantitativo de ries- tógenos en diferentes matrices alimenta-
gos tratan de representar el incremento en rias, en otros países se han desarrollado
la población microbiana durante diferentes software como los que ofrece el Departa-
etapas del proceso (ej. procesamiento, mento de Agricultura de los Estados Uni-
distribución, almacenamiento, etc.). De dos (USDA)(40), MicroHibro desarrollado
esta forma, se debe modelar el fenómeno por el equipo de investigación HIBRO de
mediante el cual un número inicial de bac- la Universidad de Córdoba (España)(41)
terias (Ni) se multiplica para dar como re- y otros que aplican para diferentes áreas
sultado un número final de microorganis- como @Risk® desarrollado por Palisade
mos (Nf), debiendo considerar los factores Corporation, New York, Estados Unidos de
que regulan y condicionan el crecimiento América(42). En Colombia, no se han de-
bacteriano (ej. pH, temperatura, actividad sarrollado herramientas informáticas co-
de agua, etc.)(18). nocidas para dicho fin, de igual manera, no
se han encontrado referencias bibliográfi-
Para lo anterior existen diferentes modelos cas en las que se evalúe el crecimiento de
que sirven como herramientas para mode- E. coli O157:H7 utilizando programas de
lar el crecimiento microbiano, pudiéndolos modelado predictivo de otros países. Sin
dividir en tres tipos: a) primarios (describen embargo, estas herramientas informáticas
la evolución de la población de microorga- si han sido utilizadas por investigadores
nismos a lo largo del tiempo bajo deter- como los de la Universidad de la Saba-
minadas condiciones que son asumidas na, Bogotá, quienes utilizan el software,
como constantes), b) secundarios (tienen Pathogen Modeling Program (PMP) ver-
en consideración la variabilidad que pue- sión 6.0, que ofrece el Departamento de
de ocurrir en el período bajo análisis en Agricultura de los Estados Unidos (USDA),
cuanto a sus condiciones ambientales) y para describir el crecimiento de E. coli sp.
c) terciarios: aplicaciones informáticas que a diferentes temperaturas (43).
calculan el desempeño microbiano bajo
condiciones ambientales específicas (37). Debido la presencia de éste patógeno en el
país y a la mortalidad de las manifestacio-
A nivel mundial, en países como Argentina nes clínicas que puede desarrollar, resulta
y España los estudios para el modelado importante tener un mayor conocimien-
predictivo de E. coli O157:H7 se desarro- to del comportamiento de este patógeno
llan más que todo en carne vacuna y en en alimentos para lograr un mejor control
derivados cárnicos (ej. hamburguesas, en la mitigación de su impacto como pro-
jamón), aunque también se han realiza- ductor de ETA, por tanto, nos planteamos
do en productos vegetales (ej. lechuga). como objetivo describir las aplicaciones
Los tipos de modelo que se emplean para informáticas que faciliten el modelado pre-
estos estudios son en su mayoría mode- dictivo de E. coli O157:H7 en alimentos, su
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importancia y la aplicabilidad los mismos. resis posterior de la PCR convencional47,


además, los procesos de amplificación y
Aislamiento De E. Coli O157:H7 detección se producen de manera simul-
Para el aislamiento de E. coli O157:H7 se tánea en el mismo vial cerrado, sin necesi-
emplea el agar MacConkey sorbitol, me- dad de ninguna acción posterior. Mediante
dio en el cual es reemplazada la lactosa detección por fluorescencia se puede me-
por sorbitol. Las colonias sorbitol negativo dir durante la amplificación la cantidad de
(transparentes) se confirman por ensayos ADN sintetizado en cada momento, ya que
bioquímicos, serológicos, de verotoxici- la emisión de fluorescencia producida en
dad, y técnicas moleculares (37). la reacción es proporcional a la cantidad
de ADN formad (48).
Debido a las bajas concentraciones de
E. coli O157:H7 halladas en alimentos Los primers o cebadores son moléculas
responsables de brotes, se ha visto la cortas (entre 10 y 30 bases) de DNA de
necesidad de utilizar métodos altamente cadena sencilla que delimitan el fragmento
sensibles. La técnica de Separación Inmu- a amplificar. En el caso de E. coli el gen
nomagnética (SIM), en la que anticuerpos uidA que codifica para la β-glucoronidasa
anti-E.coli O157 purificados, adsorbidos es común a todos los serotipos de este
y unidos covalentemente a la superficie microorganismo, pero se ha descrito una
de partículas esféricas paramagnéticas mutación en la posición +93 en el serotipo
de poliestireno, reaccionan con el antí- O157:H7, en el que para su uso en PCR
geno somático O157, recuperándose el convencional, así como en PCR en tiempo
microorganismo cuando las partículas uni- real la utilización del cebador PT2 cubre
das al O157, son atraídas magnéticamen- esta mutación. Para la detección por PCR
te y sembradas posteriormente en placas en tiempo real en modo TaqMan, esta mu-
de aislamiento. En medios selectivos, tación es reconocida por una sonda MGB
como el agar MacConkey sorbitol suple- que cubre la posición +93(47,49).
mentado con cefixima y telurito de potasio
(CT-SMAC) o medios cromogénicos, es E. Coli O157:H7 A Nivel Mundial Y En
un procedimiento sensible y eficaz para la Colombia
detección de Escherichia coli O157:H7 en Se han presentado reportes de E. coli
alimentos de origen animal (44,45). O157:H7 en alimentos en Estados Uni-
dos, Alemania, España y en otros lugares
Por otra parte, el Instituto Nacional de Sa- a nivel mundial, excepto en la Antártida
lud de Colombia indica que para la identifi- 22,50-52. Los últimos datos disponibles
cación de E. coli O157:H7, se recomienda en la Agencia Europea de Seguridad Ali-
el método de PCR en tiempo real, el cual mentaria (EFSA) aportados por los países
recientemente fue validado por la FDA de la Unión Europea correspondientes al
(Food Drug Administration, USA) y que año 2006, recogen un total de 4.916 ca-
mostró mejor recuperación al compararlo sos de toxiinfecciones asociadas a E. coli
con el método microbiológico46. La técni- 0157:H7, de los cuales 13 se produjeron
ca de PRC en tiempo real principalmen- en España(47). Otra recopilación reciente
te se basa en la detección de una señal estableció que en el período comprendido
fluorescente emitida durante la amplifica- entre 1990-2006, se presentaron 83 bro-
ción, con lo que se dispone del resultado tes asociados al consumo de leche líquida
en tiempo real. La detección automatizada de los cuales 37 estaban asociados con
42 de la señal fluorescente evita la electrofo- leche pasteurizada y 46 con leche no pas-
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teurizada siendo causante de ello los mi- En Colombia en el 2010 se reportó que el
croorganismos más frecuentemente aisla- 30% de los productos alimentarios dispo-
dos como Campylobacter spp.c y E. coli nibles en supermercados en Bogotá esta-
patógenas(46). ban contaminados con E. coli enteropa-
tógenas. Los agentes más comunes ais-
En 1998, se observó en Estados Unidos lados de vegetales y carne de res fueron
una incidencia de 2,3 por cada 100. 000 ECTS (E. coli productora de toxina Shiga)
habitantes, pero luego descendió a 1,1 y ECEA (E. coli enteroagregativa). No se
por cada 100.000 habitantes en el 2003. detectaron ECET (E. coli enterotoxigéni-
Sin embargo, esta incidencia se mantuvo ca), ECEP clásica ni ECEI (E. coli ente-
en los últimos años e incluso en el 2006 roinvasora), las cuales están más asocia-
reportaron 29 brotes de toxiinfecciones das a aguas contaminadas. Más estudios
por E. coli productores de toxina “shiga” son necesarios para encontrar las fuentes
(ECTS) contra 24 que se reportaron en más comunes de dicha contaminación y
promedio entre 2001 y 2005, de los cuales para evaluar si la contaminación de pro-
27 fueron causados por O157. En Alema- ductos alimentarios varía de acuerdo con
nia demostraron el aislamiento de cultivos la región y a la época del año. El primer
de E. coli portadores de toxina “shiga” que estudio sobre las ECTS en Colombia re-
correspondía a varios serotipos, siendo portó la presencia en 0,87% de muestras
el más frecuente el O157:H750. También de carne molida de res y en 6,5% de fecas
la presencia de este patógeno ha sido de ganado vacuno (51).
informada en diversos países de Latino-
américa como Argentina, Colombia, Uru-
En 2013, se identificó el serotipo O157:H7
guay y Costa Rica, variando de acuerdo
en carne de cerdo comercializada en di-
a su posición geográfica (asociándose a
ferentes supermercados de la ciudad de
casos de diarrea y SUH)(7,41,50,53) en
Cartagena de Indias, durante agosto y
el que Colombia informó de su hallazgo
Septiembre de 2008. De 60 muestras ana-
por primera vez solo hasta el año de 1996,
lizadas se obtuvo 36 con E. coli sp. en
lo que resultó de gran importancia a nivel
epidemiológico ya que anteriormente no niveles no aceptables según las exigen-
se tenía documentado etiológicamente la cias del Instituto Nacional de Vigilancia
presencia de este germen en el país(33). de Medicamentos y Alimentos (INVIMA)
Este hecho desde entonces propició la para productos cárnicos, identificándose
realización de estudios en diferentes zo- el serotipo O157:H7 en 17 muestras; sin
nas del país donde se ha identificado a embargo, en el caso de este estudio, esta
la bacteria a partir de diversos tipos de caracterización debe considerarse como
alimentos, agua y materia fecal(33,46). presuntiva de acuerdo al método utiliza-
Situación que destaca la importancia de do, debido a que en el estudio no se de-
buscarlo como agente causal de EDA por muestra su confirmación por otros méto-
consumo de alimentos contaminados(37), dos como los moleculares, que además
con un 7.2% de los casos de diarrea en pueden permitir la identificación de genes
Colombia, y cuya prevalencia es del 4.7%, productores de toxinas(37,54). En el Cono
en pacientes pediátricos, que aunque Sur de América, la toxiinfección por E. coli
aparentemente baja, está entre los lími- O157:H7 son endémicas, y esto obedece
tes de otros estudios realizados en otros fundamentalmente a la falta de programas
países, y presentándose además con una de vigilancia de brotes de toxiinfecciones
alta tasa de incidencia en bovinos sanos alimentarias en toda esta región (24).
(6.5%)(33).
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Modelos Predictivos y su Clasificación. experimentalmente. Dichos modelos son


El estudio del crecimiento microbiano en utilizados para describir la velocidad de
función del medio que le rodea (el alimen- crecimiento (Nmax), la fase de latencia
to), es considerado una de las bases de (LDP) y otros parámetros en función de
la microbiología de alimentos. Cada uno condiciones experimentales como la tem-
de los factores intrínsecos de un alimen- peratura, el pH, entre otras 59. En cuanto
to influye sobre el desarrollo microbia- a los modelos mecanicistas se diferencian
no y hace que favorezca el desarrollo de de los empíricos, debido a que estos par-
unos microorganismos en detrimento de ten de una base teórica biológica, la cual
otros(55). La microbiología predictiva, de- obliga al modelo a adaptarse a la realidad
finida científicamente, como la disciplina biológica mediante una hipótesis deter-
que combina elementos de matemáticas, minada, en consecuencia, estos modelos
estadística, sistemas informáticos, inge- explican con más exactitud los datos ex-
niería, química y ecología microbiana para perimentales aunque no se ajusten con
desarrollar modelos que describen y pre- tanta exactitud como los modelos empíri-
dicen el comportamiento de los microor- cos a los datos utilizados para la genera-
ganismos bajo factores específicos como: ción del modelo. Dentro de estos modelos
pH, Temperatura, actividad de agua (aw), se destacan los que predicen la tasa de
entre otros56. A partir del conocimiento crecimiento en función de la temperatura
de las respuestas microbianas ante los o aquellos que describen la velocidad de
elementos del entorno se formulan ecua- catálisis enzimática a bajas temperaturas,
ciones matemáticas que describen un entre otros (60).
comportamiento, ya sea de crecimiento,
supervivencia o inactivación; las cuales, La segunda clasificación de los modelos
se identifican como modelos predictivos predictivos se fundamenta en la finalidad y
microbiológicos (39). agrupan los modelos en cinéticos y proba-
bilísticos. Los modelos cinéticos estiman
En Microbiología Alimentaria, los modelos la respuesta de crecimiento específica,
predictivos constituyen un método rápido, con respecto a diferentes variables como
relativamente económico y no invasivo la temperatura, pH, aw, la concentración
para la determinación objetiva de la cali- gaseosa, el potencial de oxidoreducción,
dad de los alimentos(57). Existen diferen- humedad relativa, contenido de nutrientes
tes criterios para clasificar los modelos y propiedades antimicrobianas. Los mode-
predictivos del crecimiento microbiano, los cinéticos pueden utilizarse para pre-
los cuales pueden ser agrupados según decir cambios en el número de microor-
su funcionamiento matemático, según su ganismos con respecto al tiempo, incluso
finalidad o el esquema propuesto por Whi- cuando una variable que puede afectar
ting y Buchanan en 1993, que los ordena al crecimiento esté cambiando. Los mo-
en modelos primarios, secundarios y ter- delos cinéticos han sido empleados con
ciarios (58,59). mayor frecuencia que los probabilísticos,
para modelar los efectos de variables in-
La primera clasificación agrupa los mo- trínsecas y extrínsecas, particularmente
delos de acuerdo con su funcionamiento la temperatura, en el crecimiento micro-
matemático, en modelos empíricos y me- biano. Los modelos probabilísticos han
canicistas. Los modelos empíricos son sido extendidos para definir los límites de
aquellos modelos matemáticos que son crecimiento de microorganismos en am-
44 desarrollados a partir de datos obtenidos bientes específicos, donde un único factor
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no es limitante pero en conjunto con otros marios y secundarios se denomina mode-


sí previenen o inhiben el crecimiento mi- los terciarios (59).
crobiano. La probabilidad de crecimiento
microbiano puede ayudar al productor de Modelos predictivos para describir el
alimentos a la hora de tomar decisiones comportamiento de E. COLI O157:H7
sobre de la formulación, procesamiento, en alimentos
envasado y almacenamiento de un pro- Cada año mueren en el mundo varias de-
ducto (58). cenas de personas a causa de la infección
alimentaria por cepas de E. coli O157:H7.
Finalmente, según la clasificación pro- Por tanto, su control es prioridad para go-
puesta por Whiting y Buchanan en 1993, biernos de la mitad de los países a nivel
en los modelos primarios el crecimiento mundial en especial en Norteamérica5. Se
de los microorganismos es descrito por los ha despertado un interés internacional por
parámetros cinéticos; que son representa- la microbiología predictiva particularmente
dos en tres etapas. La primera es la fase en Estados Unidos y Reino Unido, tam-
de latencia (LDP), la fase de crecimiento bién en Australia y los países del este de
exponencial (µmax) y finalmente, la fase Europa(56). Los gobiernos, los institutos
estacionaria donde se alcanza la pobla- de investigación y la industria están tra-
ción máxima (Nmax)(61). El crecimiento bajando, independientemente o en cola-
de los microorganismos se ve afectado boración, en programas para generar las
por las condiciones ambientales, la com- bases de datos necesarias para el desa-
posición del alimento y por el estado fisio- rrollo de modelos predictivos que ayuden
lógico de las células (62). a describir la respuesta microbiana frente
a factores extrínsecos e intrínsecos al ali-
Los modelos secundarios consisten en mento, con el fin de minimizar el riesgo de
prever el comportamiento de la población ETA y controlar la aparición de la bacteria
microbiana (parámetros cinéticos de creci- en diferentes matrices alimentarias (65).
miento) mediante el uso de modelos ma-
temáticos, los cuales se encuentra en fun- Un ejemplo de los proyectos internacio-
ción de los factores propios del producto nales desarrollados con este fin, es el
y condiciones de almacenamiento(63,64). propuesto por el equipo de investigación
Dentro de esta categoría se encuentran HIBRO de la Universidad de Córdoba, Es-
el modelo de Arrhenius, modelos de raíz paña, en el año 2011, que buscaba con-
cuadrada, modelos de superficie de res- trolar la aparición de E. coli O157:H7 en
puesta, modelos probabilísticos y modelos productos vegetales mínimamente proce-
obtenidos mediante redes neuronales arti- sados, mediante el diseño de un modelo
ficiales entre otros (59). matemático integrado en una aplicación
informática que podría ser utilizada tanto
Los modelos secundarios pueden ser in- por autoridades sanitarias como los agen-
corporados a un software, el cual con la tes de evaluación de riesgos (66).
tecnología de monitoreo adecuada pue-
de estimar la vida útil de los productos o Concretamente los equipos científicos
el riesgo de pérdida de la inocuidad que de las Universidades de Córdoba (UCO),
atente contra la seguridad alimentaria, Georgia y Clemson, el Instituto de tecno-
sin recurrir a las técnicas tradicionales de logía de Illinois, la Universidad estatal de
recuento en placa de los microorganis- Michigan (UEM) y Consultores del Servi-
mos(64); esta integración de modelos pri- cio de Investigación en Agricultura del De-
45
MENTE JOVEN

partamento de Agricultura de los Estados las bacteria utilizadas para las realización
Unidos (USDA-ARS), la Administración de de los modelos predictivos de crecimiento
Alimentos y Medicamentos (por sus siglas y muerte microbiana son Salmonella spp.,
en inglés FDA) y el Consorcio de Investi- Listeria monocytogenes y E. coli O157:H7,
gación de seguridad de los alimentos (por siendo esta última la bacteria con más mo-
sus siglas en inglés FSRC), trabajan en di- delos descritos, especialmente en los mo-
ferentes aspectos: en la inactivación de E. delos de crecimiento en vegetales donde
coli sp. sobre el compost; en el estudio de sólo se modela este patógeno (65,66).
la contaminación superficial en vegetales
de hoja; en la transferencia de la bacte- También, se permite realizar estimaciones
ria durante operaciones de procesamien- de los parámetros cinéticos como tasa
to; en el análisis del agua de tratamiento máxima de crecimiento, tiempo de latencia
como un indicador de contaminación; en y densidad máxima de población, basadas
las intervenciones de proceso para reducir en la combinación de modelos secundarios
E. coli O157:H7 en productos vegetales de tipo Gamma, Ratkowsky o raíz cuadra-
de hoja y en el efecto del almacenamiento da y tipo Cardinal y primarios como el mo-
post-cosecha. Todos los datos derivados delo de Gompertz y el modelo de Baranyi
de estas líneas de investigación son em- y Robert en 1994, contenidos en esta base
pleados por investigadores de la UCO y la de datos. Igualmente, reproducen la curva
UEM en el desarrollo de un modelo ma- de crecimiento, proporcionando el nivel de
temático de riesgo con el fin de identificar microorganismo a diferentes intervalos de
estrategias de mitigación de la bacteria. tiempo(30). El segundo módulo, incluye
(66). un sistema de validación, cuyo propósito
es comparar las predicciones de un mo-
Actualmente el grupo cordobés, cuenta delo seleccionado con valores reales pro-
con una herramienta en-línea desarrollada porcionados por el usuario, se encuentra
por ellos, llamada MicroHibro (http://www. basado en diferentes índices estadísticos
microhibro.com/), un espacio virtual de tra- y una representación gráfica, se puede
bajo, de carácter integrado y personaliza- evaluar si el modelo realiza predicciones
do que permite evaluar el riesgo microbia- certeras para un alimento dado sobre el
no en vegetales y productos cárnicos. Ésta que el usuario ha realizado la validación.
posee un sistema de control y cuentas de El tercer módulo es una herramienta para
usuarios con el objeto de restringir el acce- el desarrollo de modelos probabilístico del
so a personas del ámbito empresarial, pú- riesgo, éste permite diseñar su propio mo-
blico y académico interesadas en realizar delo de riesgo basado en la combinación
estudios de evaluación del riesgo. Micro- de diferentes procesos básicos que des-
Hibro, se encuentra estructurada en tres criben los cambios de concentración y pre-
módulos. En el primer módulo, cuenta con valencia de un determinado microorganis-
un sistema de predicción del crecimiento mo a lo largo de una cadena alimentaria
microbiano en productos cárnicos (carne específica. En cada proceso, se pueden
cocida con o sin nitritos, carne, carne de definir las variables fundamentales a tra-
cerdo, carne curada lista para el consumo vés de valores puntuales o distribuciones
y salchichas) y vegetales (Acelga, vegeta- de probabilidad. Así mismo, los resultados
les de hoja, lechuga, lechuga MAP, perejil pueden ser analizados mediante la utiliza-
y espinacas) bajo diferentes condiciones ción de escenarios o herramientas de aná-
ambientales (pH, NaNO2, Temperatura, lisis de sensibilidad (65).
46 Aw, NaCl, Lactato K, RH y Diacetato Na);
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En esta aplicación, el usuario puede reali- ajustar las variables de temperatura, pH,
zar simulaciones “in silico” para condicio- NaCl, Nitrito de sodio, Lactato de sodio,
nes específicas, proporcionando una es- Aw, y pirofosfato de sodio dependiendo
timación del riesgo asociado al alimento, del modelo. (40,67).
proceso y patógeno objeto de estudio. El
enfoque estocástico de la aplicación per- Existe otro programa informático que ayu-
mite considerar todos los posibles escena- da a predecir el comportamiento de mi-
rios de riesgo, ayudando a tener una visión croorganismos bajo determinadas situa-
más completa del caso analizado. (41). ciones, si así se quiere. Dicho programa
fue desarrollado por Palisade Corporation,
Con el propósito de garantizar la seguridad denominado @Risk®, un software que se
alimentaria el Servicio de Investigación en incorpora a Microsoft Excel, asegurando
Agricultura del Departamento de Agricul- flexibilidad, facilidad de uso y gran atracti-
tura de los Estados Unidos (USDA), en vo en una amplia gama de sectores de la
conjunto con el Eastern Regional Reseach industria, desde las áreas financieras has-
Center (ERRC) y complementado con es- ta las científicas (finanzas, gestión de pro-
tudios independientes de diversas fuentes yectos, energía, manufacturación, inge-
de investigación, han desarrollado un Pro- niería, investigación y desarrollo, seguros,
grama de Modelado de Patógenos (PMP petróleo y gas, transporte y medio ambien-
Versión 6.0)(39-43), puesto a disposición te)(68), cualquiera que tenga incertidum-
de la comunidad científica gratuitamente, bre en sus análisis cuantitativos, utilizando
el cual consiste en un paquete de modelos simulación de Monte Carlo(69). La aplica-
terciarios (combina los modelos primarios ción debe ser comprada para ser utilizada
y secundarios) que se pueden utilizar para indefinidamente, sin embargo cuenta con
predecir el crecimiento, supervivencia, en- una versión gratuita de prueba por quince
friamiento, transferencia e inactivación por días disponible para todo usuario en http://
calor de 15 bacterias transmitidas por los www.palisade-lta.com/trials.asp. Este pro-
alimentos, principalmente patógenas, bajo grama permite realizar análisis de riesgo
diversas condiciones ambientales intrínse- utilizando la simulación para mostrar múl-
cas y extrínsecas(18). Estas predicciones tiples resultados posibles en un modelo de
son específicas de ciertos ambientes (por hoja de cálculo, y le indica qué probabili-
ejemplo, medios de cultivo, alimentos, etc.) dad hay de que se produzcan. Computa y
y cepas bacterianas específicas (entre las controla matemática y objetivamente gran
que se encuentra Bacillus cereus, Salmo- número de escenarios futuros posibles, y
nella enteritidis, Listeria monocytogenes, luego le indica las probabilidades y riesgos
Escherichia coli O157:H7, Clostridium bo- asociados con cada uno. Es decir, que el
tulinum y otras), que se utilizan para gene- programa permite decidir los riesgos que
rar los modelos, por lo que la precisión de se desean tomar y cuáles se prefieren evi-
estas predicciones no se puede garantizar tar, tomando la mejor decisión en situacio-
para otras cepas bacterianas y/o ambien- nes de incertidumbre (42,70).
tes, sin estudios de validación adecuados.
Específicamente para E. coli O157:H7 Ejemplo del uso de este software a nivel
esta herramienta describe modelos de científico, es el que nos ofrece Olvera A,
crecimiento (en medio de cultivo aerobio et. al 2010, quienes desarrollaron un pro-
y anaerobio), supervivencia e inactivación yecto de investigación en Argentina, que
en alimentos como carne molida con aditi- tuvo como objetivos cuantificar la frecuen-
vos, jamón cocido y salchichas, pudiendo cia y la magnitud de la contaminación por
47
MENTE JOVEN

E. coli O157:H7 en las canales de ganado a desarrollar enfermedades asociadas no


bovino y generar estimaciones de exposi- sólo a cuadros clínicos típicos de las to-
ción en tres escenarios probables: la vacu- xiinfecciones alimentarias, sino hasta sín-
nación de las reses, la descontaminación tomas severos como el Síndrome Urémico
de las canales y el sistema de engorde. Hemolítico (SUH) y la Enfermedad Diarrei-
Para esto, se modeló la frecuencia y la ca Aguda (EDA).
concentración de la contaminación por E.
coli O157:H7 desde la producción prima- Si bien la prevalencia de este patógeno
ria de bovinos hasta la canal a la salida en Latinoamérica es aún incierta, lo que
del frigorífico, a partir de la información es claro es que varía según la localización
científica publicada y datos epidemiológi- geográfica, por lo que predecir el com-
cos y de expertos locales. El modelo de portamiento de dicho patógeno en los ali-
simulación estocástico se creó en Micro- mentos es un gran reto, donde confluyen
soft Excel 2007 y @Risk® (versión 4.0, diversidad de factores. Aplicaciones dise-
Palisade Corporation, New York, Estados ñadas con base a modelos predictivos del
Unidos), donde se realizaron 5,000 itera- crecimiento o inactivación del desarrollo
ciones con la técnica de simulación Monte microbiano pueden ser una herramienta
Carlo(31,37). Las dos variables de interés de mucha ayuda para lograr este objetivo.
(medidas de resultado) del modelo fueron El modelo de E. coli O157:H7 se basa en
la proporción de canales contaminadas el principio general de todo modelo pre-
con E. coli O157:H7 y la magnitud de esa dictivo para comprender los riesgos de las
carga bacteriana a la salida del frigorífico. enfermedades bacterianas transmitidas
Teniendo en cuenta los resultados obte- por los alimentos.
nidos se llegó a la conclusión de que la
vacunación de los animales resultó el es- En Colombia, actualmente no se han desa-
cenario más eficaz para reducir el ingreso rrollado modelos predictivos para describir
de la bacteria en la cadena agroindustrial el comportamiento de E. coli O157:H7 en
de la carne bovina (6). alimentos, por tanto en los estudios pre-
dictivos pueden ser utilizadas aplicaciones
Teniendo en cuenta este estudio, no es como Modelado Predictivo de Patógenos
necesario contar con una aplicación ex- (PMP) propuestos por el Departamento de
clusiva para el modelado predictivo de mi- Agricultura de los Estados Unidos (USDA),
croorganismos sino que existen otras, de MicroHibro de España y software como @
tipo “genérico”, que nos permiten tomar Risk® de New York. Predecir el comporta-
decisiones de situaciones futuras teniendo miento de este microorganismo en las dis-
en cuenta datos reales que nos arrojen re- tintas matrices alimentarias ayudaría en
sultados confiables. la mitigación de su impacto como agente
productor de ETA, permitiendo tomar las
Conclusiones medidas necesarias y llevar a cabo un
Escherichia coli O157:H7 es un patógeno control microbiológico efectivo, logrando
con gran importancia a nivel mundial en garantizar la calidad de estos alimentos a
los alimentos y en la salud pública, debido los consumidores. Esto, generaría avan-
a que es transmitido a los seres humanos ces no solo en la industria alimentaria sino
principalmente por alimentos básicos de la también en la prevención de enfermeda-
canasta familiar (agua, carne y vegetales) des, afectando positivamente la salud pú-
y que por presentar dosis infectiva baja, blica del país.
48 aumentando el riesgo en el consumidor
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