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Producción y optimización de Ácido Hialurónico extraído de aislados de

Streptococcus thermophilus

ArtículoenArchivos del Instituto Razi · Junio 2022

DOI: 10.22092/ARI.2022.358612.2262

CITAS LEE
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2 autores:

Amir Abbas Mohamed Alaa Kareem Niamah

Universidad de Basora Universidad de Basora

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 Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305 Derechos de autor © 2022 por

Instituto de Investigación de Vacunas y Sueros

Razi DOI: 10.22092/ARI.2022.358612.2262

Artículo original

Producción y Optimización de Ácido Hialurónico Extraído

deStreptococcus thermophilusAislamientos

Abbas Mohamed, A.1 *, Niamah, A. K.2

1. Departamento de Vertebrados Marinos, Centro de Ciencias Marinas, Universidad de Basora, Basora, Irak
2. Facultad de Agricultura, Departamento de Ciencias de la Alimentación, Universidad de Basora, Basora, Iraq

Recibido el 7 de mayo de 2022; Aceptado el 8 de junio de 2022

Autor para correspondencia: amer.mohammed@uobasrah.edu.iq

Abstracto
Los biopolímeros, particularmente los exopolisacáridos producidos por microorganismos como bacterias, levaduras y algas,
han ganado popularidad en los últimos años debido a sus propiedades físicas, químicas y funcionales que son ampliamente
útiles en sistemas alimentarios, industriales, cosméticos y farmacéuticos. El ácido hialurónico es un tipo de estos
polisacáridos. Este estudio investigó las condiciones óptimas para producir ácido hialurónico a partir de Streptococcus
thermophilusCepa bacteriana. el aisladoStreptococcus thermophilusse cultivaron en caldo MRS, leche descremada y caldo
M17 con una adición de lactosa al 1%. Las cepas bacterianas diagnosticadas se cultivaron en 100 ml de medio de cultivo, se
colocaron en matraces volumétricos de 250 ml de capacidad y se incubaron a 42 C̊ durante 24 horas, pH 6,8, volumen de
inóculo al 1 % e incubadora vibratoria a 150 rpm. Después del final del período de fermentación, el aislamiento y la
purificación de HA se realizaron en consecuencia: las proteínas se eliminaron utilizando ácido tricloroacético (TCA) al 1% y el
HA en el sobrenadante se recogió mediante precipitación con isopropanol. El HA recogido se dializó frente a agua ultrapura y
se liofilizó. Se estimó la cantidad de ácido producido. Los resultados muestran que la mejor producción de ácido hialurónico
fue de laS. termófilocepa bacteriana cultivada en el medio alternativo que contiene suero de leche en una proporción de 450
ml/L y 7,5 g/L de extracto de levadura a 40 C̊, con un 3% de volumen de inóculo y 102×108unidades formadoras de colonias/
ml de células bacterianas, en pH 6,8 y velocidad de agitación de 150 rpm durante 18 h, que tuvo el efecto más significativo en
el proceso de fermentación y dio el mayor valor de producción de HA de 0,598 g/L y biomasa de 6,08 g/L. Estos resultados
mostraron el mejor método de producción de HA para lograr la producción máxima gritada.

Palabras clave:Ácido Hialurónico, Condiciones Óptimas,S. termófiloCepa de bacterias

1. Introducción que consta de unidades repetitivas de disacárido ácido D-

biopolímeros, particularmente exopolisacáridos
producidos por microorganismos como bacterias,
levaduras y algas, han ganado popularidad en los últimos
años debido a sus propiedades físicas, químicas y
funcionales que son ampliamente útiles en los sistemas
alimentario, industrial, cosmético y farmacéutico Özcan y
Öner (1). El ácido hialurónico (HA) es un tipo de estos
polisacáridos. Se define como un polímero natural lineal
con carga negativa que pertenece a los polisacáridos
glucurónico y N-acetil-D-glucosamina. Se encuentra de
forma natural en el cuerpo humano y en animales como
conejos, vacas y gallos, así como en los microorganismos
que la secretan como productos metabólicos
secundarios, como Streptococcus equi,Streptococcus
zooepidermicus, Streptococcus equisimilis,Streptococcus
uberisy levaduras comoCryptococcus neoformansy las
algas Chlorellasp. (2).
La producción de ácido hialurónico a partir de fuentes microbianas

heterocíclicos llamados glicosaminoglicanos (GAG) depende principalmente de la fermentación deEstreptococo

2296 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
bacterias Dado que algunas especies de esta bacteria son
patógenas, los estudios se han centrado en producirla a partir
de cepas bacterianas generalmente reconocidas como seguras
(GRAS), comoStreptococcus thermophilus(3). La biosíntesis del
ácido hialurónico enS. termófilo requiere mucha energía, y las
células bacterianas compiten por la fuente de carbono que
utilizan para el crecimiento celular. Cuando se dispone de una
pequeña cantidad de la fuente de carbono, el porcentaje más
significativo de la fuente de carbono se consume rápidamente
para el crecimiento, lo que conduce a una disminución de la
productividad del ácido con una tasa alta de su peso molecular.
Sin embargo, cuando las bacterias crecen en presencia de una
cantidad abundante de fuente de carbono, la producción de
ácido hialurónico se observa a un ritmo elevado (4). Además,
existe una estrecha relación entre el tipo de fuente de carbono,
la cantidad de ácido producido y la cantidad de biomasa, ya que
la lactosa es la fuente de carbono preferida paraS. termófiloen el
proceso del metabolismo. Por lo tanto, produce una cantidad
más significativa de polisacáridos, incluido el ácido hialurónico
(1, 5). La cantidad de ácido producido se ve afectada por la
diferencia en la fuente de nitrógeno y su porcentaje en el medio
de producción (6).
Estudios anteriores indicaron que la cantidad de ácido producido
se ve afectada por las condiciones de producción, como la
temperatura de incubación, el tamaño del inóculo, el pH, el período
de incubación y la velocidad de vibración de la incubadora (7-9). Por
lo tanto, el presente estudio fue diseñado para encontrar las
mejores condiciones para producir ácido hialurónico a partir deS.
termófilopara reducir los costos de producción.
2. Materiales y métodos
2.1. Aislamiento de bacterias
Se llevó a cabo una serie de diluciones decenales de muestras de
yogur tomadas de los mercados locales de Basora en una solución
de peptona al 0,1 %, y se tomó 1 ml de las tres últimas diluciones y
se esparció con un difusor de vidrio en forma de L sobre la superficie
del medio de agar M17 en placas de Petri. . Las placas se incubaron a
42 °C durante 48 h en condiciones aeróbicas (10).
2.2. Identificación fenotípica de aislados
2.2.1. Extracción de ADN
Se usó el Kit Presto™ Mini gDNA Bacteria Extraction Kit
suministrado por Geneaid Biotech Ltd para extraer
ADN de aislados bacterianos. El proceso de extracción
de ADN y amplificación por PCR se realizó de acuerdo
a las instrucciones del fabricante.
2.2.2. Cebadores y condiciones de PCR
El cebador siguiente y 0,5 U Taq ADN polimerasa
(BOIRON) y 500 ng de ADN. La reacción constaba de
una desnaturalización inicial durante 2 min a 95°C; 35
ciclos de desnaturalización de 1 min a 95°C, recocido
de 1 min a 56°C y elongación de 1 min a 72°C; y
polimerización final durante 10 min a 72°C; los
amplicones se almacenaron a 4°C.
2.3. Medios de cultivo y fermentaciones
Se utilizaron tres medios de cultivo para producir caldo MRS,
leche descremada y caldo M17, agregando 1% de lactosa (11).
Las cepas bacterianas diagnosticadas se cultivaron en 100 ml de
medio de cultivo, se colocaron en matraces volumétricos de 250
ml de capacidad y se incubaron a 42 °C durante 24 horas, pH
6,8, volumen de inóculo al 1 % e incubadora vibratoria a 150
rpm (12). La biomasa se estimó según Izawa, Serata (13).
2.4. Extracción y Purificación de Ácido Hialurónico Una
vez finalizado el período de fermentación, el
aislamiento y la purificación de HA se realizaron
mediante el procedimiento descrito anteriormente (14).
Brevemente, las proteínas se eliminaron utilizando ácido
tricloroacético (TCA) al 1 % y el HA del sobrenadante se
recogió mediante precipitación con isopropanol. El HA
recogido se dializó frente a agua ultrapura y se liofilizó.
La cantidad de ácido producido se estimó según el
método de Sciabica, Tafuro (15).
2.5. Condiciones óptimas para la producción de HA
2.5.1. Fuentes de carbono y nitrógeno para la producción de
ácido hialurónico
Se utilizaron varias fuentes de carbono para
reemplazarlo con lactosa en el medio de producción
óptima. Las alternativas preparadas incluyeron jugo de
dátil según lo mencionado en Al-Roomi y Al-Sahlany (16),
jugo de uva (17, 18) y suero de leche (19). La lactosa total
de estos sustitutos se estimó por el método de Lane-
Eynon mencionado en Ranganna (20). La lactosa
constituye 20 g/L en el medio de producción óptima, con
equivalentes consistentes en jugo de dátiles,
 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
jugo de uva y suero con las proporciones de 58, 210.5 y
321.15 ml/L ml de medio, respectivamente.
Se adicionó el resto de los ingredientes, se inoculó 1% del
cultivo bacteriano activado, y se incubó a 42°C en una
incubadora vibratoria a una velocidad de 150 rpm durante
24 horas. Se estimó la producción de ácido hialurónico para
seleccionar la mejor concentración de suero de leche a
utilizar como sustituto de la fuente de carbono para la
producción de ácido.
2.5.2. Efecto de varios parámetros en la producción
de HA
Efecto de varios parámetros físicos en la producción de HA
y biomasa, como la temperatura de incubación (35-42 °C),
volumen de inóculo (0,5-10 %), pH (5,5-7,8), período de
fermentación (6-48 horas) y diferentes velocidades de
agitación (100-400 rpm) se estudiaron en un medio de
producción alternativo en un matraz de agitación usando
S. termófilo.
3. Resultados y discusión
3.1. Amplificación por PCR
El rRNA 16S se consideró para investigaciones moleculares
para identificar los aislados bacterianos más productivos. La
Figura 1 muestra bandas con un tamaño de (1500) pares de
bases (pb). Estos resultados coincidieron con Cebeci y
Gürakan (21) cuando las cepas bacterianas deS. termófilose
aislaron de la leche con bandas en (1500) pares de bases.
Figura 1.Amplificación de ARNr 16S de aislados bacterianos de yogur
local para producir ácido hialurónico
2297
Después de analizar los resultados en el banco de genes,
mostraron una coincidencia (100%) conS. termófiloJIM 8232,
cepa previamente registrada en el banco de germoplasma,
como se muestra en la figura 2. El árbol de coincidencia
genética parael S. thermophilusa la cepa se le dio el código
ABST y se registró en el banco de genes japonés: http://
submit.ncbi.nlm.nih.gov/nucccore/MZ841806.
3.2. Condiciones óptimas para la producción de ácido
hialurónico
3.2.1. Producción de ácido hialurónico
La figura 3 muestra la concentración de HA y biomasa
producida porS. termófiloutilizando tres medios de
producción diferentes. Los resultados mostraron que la
mayor producción de ácido hialurónico se logró utilizando el
caldo M17. La producción máxima de HA fue de 0,334 g/l. El
peso de la biomasa fue de 5,32 g/L en comparación con los
valores de producción del caldo MRS y la leche descremada,
que ascendieron a 0,296 y 0,308 g/L, respectivamente,
debido a la diferencia en las fuentes de carbono y nitrógeno
y sus tipos. así como la presencia de iones metálicos que
estimulan la producción de sustancias metabólicas en el
medio y su efecto en la concentración de HA y biomasa
producidosChen, Li (22). Estos resultados concuerdan con lo
encontrado por Sheng, Ling (11) al producir ácido
hialurónico a partir de dos aislados de plantas
genéticamente modificadas.Lactococcuslactisutilizando
caldo M17. La cantidad de ácido producido para los aislados
bacterianos fue de 0,380 y 0,492 g/L. Saraphanchotiwitthaya
y Sripalakit (3) descubrieron que al producir ácido
hialurónico a partir deS. termófilo bacterias utilizando
melaza como fuente de carbono e incubando durante 12
horas, la mayor cantidad de ácido producido fue de 0,213 g/
L.
3.3. El uso de sustitutos locales en el medio de
producción
3.3.1. Alternativas locales a las fuentes de carbono La Figura
4 muestra el efecto del uso de alternativas locales, como jugo
de dátiles, jugo de uva y suero, para sustituir la fuente de
carbono en el caldo M17 del medio de producción en la
concentración de HA y biomasa producida. La fuente de carbono
del suero dio la mayor cantidad de ácido.
2298 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305

El producto fue 0,359 g/L. La cantidad de biomasa fue de 5,15 g/
L. La cantidad de ácido para las alternativas de jugo de dátiles y
jugo de uva fue de 0,195 y 0,321 g/L, respectivamente, debido a
que el suero contiene un alto porcentaje de lactosa, que es el
azúcar preferido por las bacterias en el proceso de
metabolismo. Por lo tanto, produce una cantidad más
significativa de polisacáridos (1, 5). Estos resultados concuerdan
con trabajos publicados previamente (5), cuando estudiaron el
efecto de los desechos de fabricación de productos lácteos en la
producción de ácido hialurónico de productos lácteos a partir de
S. termófilo. La cantidad de ácido producido fue de 0,342 g/L
dependiendo del suero como fuente alternativa de carbono.
en el medio de producción.
Pires, Macedo (12) utilizó desechos agrícolas e industriales
(proteínas de soya degradadas, proteínas de suero, jugo de
manzana y maíz descompuesto) para fortalecer el medio de
producción industrial que consiste en glucosa y extracto de
levadura como fuente de carbono y nitrógeno para la
producción de ácido hialurónico. deEstreptococo.
zooepidemicus. Se encontró que el jugo de manzana, cuando se
usó como fuente de carbono, dio la mayor cantidad de ácido,
que ascendió a 0,890 g/L. El maíz descompuesto dio 0,84 g/L. La
producción de ácido de las proteínas del suero y la
descomposición de la soja como fuentes de nitrógeno fueron de
0,1 y 0,13 g/L, respectivamente.

Figura 2.Árbol de compatibilidad genética paraS. termófiloscepa de bacterias

Figura 3.Producción de ácido hialurónico y ácido de biomasa porS. Figura 4.Efecto de las alternativas locales utilizadas como fuentes de
termófiloen diferentes medios de producción carbono en la concentración media de HA y biomasa producidos
 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
3.4. Uso de diferentes concentraciones de suero en el
medio de producción
Se usaron diferentes concentraciones de suero en el
medio de producción de ácido hialurónico, incluyendo
200, 250, 300, 321,5, 40, 450, 500 y 550 ml/L del medio
de producción. Los resultados mostraron que la
concentración de ácido aumenta con el aumento de la
concentración de suero agregado al medio de
producción hasta una concentración de 450 ml/L de
medio de producción como se muestra en la figura 5
para disminuir la concentración de ácido después de
agregar 500 y 550 ml/L a medio de producción,
elevando la cantidad de ácido hialurónico producido a
0,381 y 0,364 g/L respectivamente. La disminución de
la concentración de ácido a una alta concentración de
la fuente de carbono puede explicarse por la
inhibición del material base (inhibición del sustrato),
que es un fenómeno que ocurre a través del cultivo
discontinuo.
La mejor concentración para la producción de ácido fue 450
ml/L del medio de producción. La cantidad de ácido producido
fue de 0,425 g/L y la cantidad de biomasa fue de 6,35 g/L. Por lo
tanto, esta concentración fue adoptada y utilizada en todas las
etapas posteriores del presente estudio. Se observó que la
concentración del ácido resultante disminuyó a las
concentraciones iniciales de suero. La cantidad de ácido
hialurónico producido fue de 0,188 g/l, lo que puede deberse a
la concentración insuficiente de la fuente de carbono para
formar un número más significativo de unidades de
construcción básicas de ácidos hialurónicos, como el ácido
uránico y el ácido glucurónico.
Estos resultados concuerdan con lo mencionado por
Prasad, Jayaraman (23) cuando estudiaron la producción de
ácido hialurónico a partir de ácido hialurónico modificado
genéticamente.Lactococcuslactisbacterias La producción de
ácido hialurónico depende de la concentración de la fuente
de carbono. Las concentraciones iniciales de azúcar
inferiores a 5 g/L se agotan en el medio de crecimiento
celular (biomasa) antes de la producción de ácido. A altas
concentraciones de más de 30 g/L, el crecimiento celular y
2299
el aumento de biomasa se produce a expensas del ácido
producido.
Figura 5.Efecto de la concentración de suero en la producción de HA y
biomasa
3.5. Alternativas de fuente de nitrógeno
La Figura 6 muestra el efecto del uso de diferentes fuentes de
extracto de levadura con fuente de nitrógeno, triptona, urea,
peptona y casaminoácido en el medio de producción de ácido
hialurónico a una tasa de 17,5 g/L utilizando la cepa bacteriana
más productiva y fuente de carbono de suero con una cantidad
de 450 ml/L del medio de producción. Los resultados mostraron
que los valores del ácido producido variaron según la fuente de
nitrógeno. La fuente de nitrógeno dio al extracto de levadura la
mayor cantidad de ácido, 0,462 g/L. La cantidad de biomasa fue
de 6,8 g/L. Las fuentes restantes de nitrógeno fueron triptona,
peptona, urea y casaminoácido. El ácido hialurónico producido
es de 0,415, 0,436, 0,418 y 0,098 g/L, respectivamente. Esto
puede deberse a que estas bacterias necesitan requerimientos
nutricionales complejos para su crecimiento que pueden ser
proporcionados por fuentes nitrogenadas orgánicas de
aminoácidos y péptidos que estimulan las actividades
metabólicas, en comparación con las fuentes nitrogenadas
inorgánicas como la Urea (6). La disminución en la cantidad de
ácido producido al usar urea como fuente de nitrógeno podría
deberse a la falta deS. termófilo, que degrada la enzima y el
agua. Por tanto, es imposible beneficiarse de la fuente de
nitrógeno en la producción de ácido. Estos resultados
concuerdan con lo mencionado por Lee, Ha (24), quien estudió
el efecto de las fuentes de nitrógeno sobre la cantidad de ácido
hialurónico producido porS. zooepidemicus. Ellos
2300 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
encontraron que el extracto de levadura dio la mayor
cantidad de ácido, ascendiendo a 0,410 g/L. La cantidad de
ácido producido fue menor que la obtenida por Chen, Chen
(25), quien produjo ácido hialurónico a partir deS.
zooepidemicus. La cantidad de ácido hialurónico fue de 2,5
g/L usando extracto de levadura como fuente de nitrógeno,
que es 10 g/L del medio de producción.
Figura 6.Efecto de las fuentes de nitrógeno en la producción de HA y
biomasa
3.6. Efecto del Uso de Diferentes Concentraciones de
Extracto de Levadura en el Medio de Producción
Las Figuras 3-7 muestran el efecto de usar diferentes
porcentajes de la fuente de nitrógeno óptima para el extracto de
levadura 5, 7,5, 10, 15, 17,5 y 20 g/L, ya que los resultados
mostraron el mejor porcentaje de la fuente de nitrógeno óptima
para el extracto de levadura fue de 7,5 g/L. El ácido fue 0.496 g/
L, y la cantidad de biomasa fue 5.84 g/L usando el
S. termófiloy suero como fuente de carbono con una cantidad
de 450 ml/L del medio de producción. El porcentaje mencionado
fue adoptado para la fuente de nitrógeno en todas las etapas
posteriores del estudio, mientras que la cantidad de ácido
hialurónico fue para proporciones de 5, 10, 15, 17,5 y 20 g/L, que
ascendió a 0,312, 0,489, 0,482, 0,457, 0,351 g/l. Quizás debido a
la cantidad de fuente de nitrógeno que ayudó a lograr un
equilibrio en la proporción de carbono y nitrógeno (C/N) que
afecta la cantidad de biomasa y la cantidad de ácido. El ácido
hialurónico resultante puede deberse a que el Streptococcus
aureus generalmente depende de la fuente de nitrógeno en la
producción de biomasa. Por el contrario, la fuente de carbono se
utiliza principalmente en la producción de ácido hialurónico, lo
que condujo a un aumento en la producción de ácido
hialurónico. Sin embargo,
con el aumento de la fuente de carbono, las bacterias tienden a
producir ácidos orgánicos ácido hialurónico en lugar de ácido
hialurónico (26).
El aumento en la relación de la fuente de nitrógeno estimula a
las bacterias a producir biomasa para proporcionar los
aminoácidos y las proteínas que necesitan las células en el
metabolismo para multiplicarse y aumentar su biomasa.
Figura 7.Efecto de las concentraciones de extracto de levadura en la
producción de HA y biomasa
Este estudio concuerda con lo encontrado por Im, Song
(27) al producir ácido hialurónico producido por
Estreptococosp. bacterias, lo que indicó una superioridad
del 0,75% del extracto de levadura como fuente de
nitrógeno. El ácido hialurónico producido fue de 1,56 -
2,24 g/L, entre varias concentraciones de 0,25, 0,5 y 1%.
3.7. Efecto de la temperatura de incubación en la
producción de HA
Hay un efecto de diferentes temperaturas en la producción
de ácido hialurónico a partir de laS. termófilo Cepa
bacteriana. Los resultados que se muestran en la figura 8
revelan que la mayor cantidad de ácido hialurónico
producido se logró utilizando la temperatura de incubación
de 40 °C. La cantidad de ácido fue de 0,519 g/L y la cantidad
de biomasa fue de 6,59 g/L. Las cantidades del ácido
hialurónico obtenido fueron 0,044, 0,167, 0,489, 0,368 y
0,312 g/L para temperaturas de 35, 37, 42, 45 y 50°C,
respectivamente.
Varios estudios demostraron el efecto de la temperatura
de incubación sobre la cantidad de ácido hialurónico
producido. Izawa, Hanamizu (28) informaron que la mejor
temperatura para la producción de ácido hialurónico a partir
deS. termófiloestaba entre 33-40°C. Después
 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
estudiando el efecto de la temperatura de incubación en un
rango de (30-45 °C), los resultados diferían de lo encontrado
por Tu y Trang (9), quienes indicaron que la mejor
temperatura de incubación fue 37 °C al producir ácido
hialurónico a partir deS. termófiloutilizando diferentes
rangos térmicos de 34, 37 y 40 °C.
La tasa de producción de polisacáridos aumenta con el
aumento de la temperatura de incubación hasta alcanzar
la temperatura de incubación óptima, que depende del
tipo de bacteria utilizada en el estudio. La temperatura
de incubación es un factor crítico en la biosíntesis de
polisacáridos. Afecta la tasa de biomasa, la actividad de
las enzimas dentro de la célula y el tiempo requerido
para construir las principales unidades de azúcar de los
polisacáridos (29).
Figura 8.Efecto de las temperaturas de incubación en la producción de HA
y biomasa
3.8. Efecto del volumen de inóculo en la producción
de HA
La Figura 9 muestra el efecto de los volúmenes de
inóculo utilizados en la producción de ácido hialurónico y
biomasa formada a partir del medio alternativo. Los
resultados mostraron que el mejor volumen de inóculo
en la producción de ácido hialurónico fue 3%, y el
número de células bacterianas fue (102 x 108) UFC/ml. La
cantidad de ácido producido fue (0,578) g/L y la cantidad
de biomasa fue 6,63 g/L. La cantidad de ácido hialurónico
producido fue de 0,288, 0,519, 0,537, 0,578, 0,469 y 0,304
g/L para los volúmenes de polen de 0,5, 1, 2, 5 y 10%
respectivamente.
2301
Figura 9.Efecto de los volúmenes de inóculo en la producción de HA y
biomasa
El éxito del proceso de fermentación industrial requiere
proporcionar un volumen de inóculo adecuado libre de
contaminantes para producir los productos deseados.
Cuanto menor es el volumen de inóculo, más tiempo
requiere para adaptarse, lo que se conoce como fase
logarítmica, en la que las células bacterianas aún deben
estar en un estado activo en el proceso de metabolismo.
Por otro lado, el aumento del volumen de inóculo
provoca el consumo de oxígeno y el consumo de
componentes del medio, y el aumento de la acidez en el
medio muy rápidamente sin producir el producto en
cantidad suficiente.
Los volúmenes de inóculo variaron en la producción de
ácido hialurónico utilizando diferentes microorganismos.
Aroskar, Kamat (30) afirmaron que el mejor volumen de
inóculo fue el 3% al producir ácido hialurónico a partir de
S. zooepidemicus, y no hubo diferencias significativas
entre el volumen de inóculo de 3 y 5 % en contraste con
el volumen de inóculo de 10 %, que presentó una menor
productividad debido al mayor consumo de la fuente de
carbono en las etapas iniciales de crecimiento, lo que
conduce a una disminución del pH debido a la
producción de ácido láctico así como una alta tasa de
biomasa a expensas de la tasa de producción de ácido
hialurónico.
3.9. El efecto del pH inicial en la producción de HA La
Figura 10 muestra el efecto de los diferentes pH del
medio de producción de ácido hialurónico usando elS.
termófiloCepa bacteriana. El mejor pH inicial de la
2302 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
medio de producción fue de 6,8. La cantidad de ácido
hialurónico producido fue de 0,578 g/L y la cantidad de biomasa
fue de 6,63 g/L. La cantidad de ácido producido tenía niveles de
pH de 5,5, 6, 7,3 y 7,8, que ascendían a 0,251, 0,283, 0,448 y
0,321 g/L, respectivamente. El pH neutro es el óptimo para el
crecimiento bacteriano (biomasa) y la producción de ácido en
una cantidad más significativa (31). Sin embargo, el mayor
efecto del pH sobre la producción de ácido hialurónico en
comparación con el crecimiento de las células (biomasa) afecta
principalmente a las enzimas responsables de la producción de
ácido por parte de las bacterias (29). Los resultados concuerdan
con Izawa, Hanamizu (28), quienes estudiaron el efecto de
diferentes rangos de pH de (4.8, 5.3, 5.8, 6.3, 6.8, 7.3 y 7.8). El
mejor pH para la producción de ácido fue
(6.8) ya que la cantidad de ácido hialurónico fue (0.208) g/L.
Amado, Vázquez (7) demostraron que el mejor pH para
producir ácido hialurónico a partir deS. zooepidemicusmediante
el uso de melazas de residuos agrícolas y descomponedores de
maíz como alternativas en el medio de producción fue (6.7). La
cantidad de ácido producido fue (3,48) g/L.
Figura 10.Efecto del pH sobre la producción de HA y biomasa
3.10. Efecto de los períodos de incubación en la
producción de HA El efecto de los tiempos de incubación
de 6, 12, 18, 24, 30, 36 y 48 horas sobre la producción de
ácido hialurónico y la cantidad de biomasa formada a partir
del medio alternativo utilizando elS. termófilose estudió la
cepa. Los resultados mostraron que la mejor producción fue
después de 18 horas de fermentación. La cantidad de ácido
hialurónico fue de 0,598 g/L. La cantidad de biomasa fue de
6,08 g/L. Las cantidades de ácido hialurónico producidas
fueron 0,305, 0,425, 0,578, 0,277, 0,175 y 0,034 g/L para
períodos de incubación de 6, 12, 24, 30, 36 y 48 horas,
respectivamente (Figura 11).
Figura 11.Efecto de diferentes tiempos de incubación en la
producción de HA y biomasa
La cantidad de producción de ácido hialurónico comienza a
disminuir después de 18 horas del proceso de fermentación
debido al agotamiento de los nutrientes del medio de
producción con el tiempo y la dirección de las células hacia la
etapa de muerte, lo que provoca un aumento de las toxinas
producidas en el medio de producción. .
Estos resultados concuerdan con el hallazgo de Gedikli,
Güngör (8), quien estudió el efecto de los tiempos de incubación
en la producción de ácido hialurónico. La producción de ácido
hialurónico utilizandoStreptococcus equisimilusfue de 0.592 g/L
después de 18 horas de fermentación. Kumar, Janakiraman (32)
estudiaron las condiciones óptimas para producir ácido
hialurónico a partir deS. equisímily afirmó que el mejor período
de incubación fue de 28 horas ya que la cantidad de ácido
hialurónico fue de 0,68 g/L.
3.11. Efecto de la velocidad de agitación en la producción
de HA La Figura 12 muestra el efecto de diferentes
velocidades de agitación en la producción de HA y biomasa
usandoS. termófilo. La mayor cantidad de ácido hialurónico
a una velocidad de 150 rpm fue de 0,598 g/L, y la biomasa
fue de 6,08 g/L. La cantidad de ácido hialurónico a la
velocidad de vibración 0, 100, 200, 300 y 400 rpm fue de
0,086, 0,438, 0,525, 0,251 y 0,115 g/L, respectivamente. La
mayoría de los estudios previos indican que la velocidad de
vibración aumenta la cantidad de ácido hialurónico en
condiciones aeróbicas y anaeróbicas (33-35). Esto se debe a
que la velocidad de vibración funciona para transferir
biomasa, evita su aglomeración y reduce la viscosidad de la
 Abbas Mohammed et al / Archivos del Instituto Razi, vol. 77, núm. 6 (2022) 2295-2305
medio debido a la producción de ácido hialurónico (35).
El aumento de la alta velocidad de vibración reduce la
producción de ácido hialurónico debido al aumento del
porcentaje de oxígeno disuelto en el medio de
producción (36).
La velocidad de vibración de la incubadora utilizada para producir
ácido hialurónico varió para diferentes microorganismos. Pires,
Macedo (12) utilizó una velocidad de vibración de 150 rpm al
producir ácido hialurónico a partir deS. zooepidemicus utilizando
residuos agrícolas como alternativas en el medio de producción. La
cantidad de ácido hialurónico fue de 0,89 g/L. Zakeri y Rasaee (37)
encontraron que la mejor velocidad de vibración para producir ácido
hialurónico a partir de
S. zooepidemicusera de 300rpm. La cantidad de ácido fue de
5,3 g/L. Sunguroğlu, Sezgin (38) también pudo producir
ácido hialurónico utilizando ácido hialurónico modificado
genéticamente. Lactococcuslactisa una velocidad de
vibración de 150 rpm. La cantidad de ácido hialurónico
producido fue de 6,09 g/L. Duffek, Pan (39) no notaron
ninguna diferencia en la cantidad de ácido producido al
producir ácido hialurónico usandoS. zooepidemicusal utilizar
una velocidad de vibración que osciló entre 100-300 rpm,
que ascendió a 2,55 g/L.
Figura 12.Efecto de la velocidad de agitación en la producción de HA y
biomasa
A pesar de numerosas investigaciones sobre bacterias
GRAS para la generación de ácido hialurónico (HA) utilizando
técnicas metabólicas,Estreptococo, que se considera una
bacteria segura y probiótica, ha recibido menos atención.S.
termófiloes una bacteria única que ha sido modificada en
medios de cultivo para generar más HA. Entonces, porque el
2303
La ruta de síntesis de HA compitió con la ruta glicolítica y la
biosíntesis de la pared celular, eligiendo variables
influyentes para cambiar los precursores hacia la síntesis de
HA impactó la cantidad de producción. Finalmente, la mayor
cantidad de HA en condiciones óptimas fue de 0,598 g/L.
Contribución de los autores
Concepto y diseño del estudio: AKN
Adquisición de datos: AAM
Análisis e interpretación de datos: AAM
Redacción del manuscrito: AKN
Revisión crítica del manuscrito por contenido
intelectual importante: AKN
Análisis estadístico: AAM
Apoyo administrativo, técnico y material: AAM
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener ningún conflicto de
intereses.
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