UPTAEB

PROGRAMA NACIONAL DE FORMACIÓN

SISTEMAS DE CALIDAD Y AMBIENTE

ANALISIS INSTRUMENTAL
(CROMATOGRAMA)

Participantes:
Garcías, Eleannys
Peña, Hummary
Torres, Leonardo
Sección: 4321

Barquisimeto, Mayo 2013.

 Cromatograma:
Es la representación grafica de la señal en función del tiempo una vez que la muestra es
inyectada a un sistema cromatográfico. Para obtener este cromatograma a la salida de la
columna se coloca un sistema de detección y registro, que permite responder a una
propiedad de la solución que contiene el analito o del propio analito en función del tiempo.

Tiempo de Retención
El tiempo que transcurre después de la inyección de la muestra para que el pico del analito
Alcance el detector se denomina tiempo de retención y se le da el símbolo tR. (Ver figura
1)

Tiempo Muerto
Es el tiempo tM para que la especie no retenida alcance el detector (ver figura 1)

Represente gráficamente y explique:

- Cromatograma de un componente y sus parámetros característicos que se debe tomar en
cuenta:
Se muestran los parámetros de retención, para el caso de una única banda cromatográfica,
se refleja que el tiempo de retención de la banda, puede dividirse en dos partes: el tiempo
muerto (tM), y el tiempo transcurrido a partir de este momento hasta la aparición del
máximo de la banda. A partir de la definición del tiempo muerto, se induce, que el segundo,
es el tiempo real que la fase estacionaria ha retrasado al avance del compuesto, y se conoce
con el nombre de tiempo de retención corregido (t'R)
En base a los parámetros de retención descritos, se define el factor de capacidad (k'), como:

Este factor adimensional expresa la retención de un compuesto por la fase estacionaria,

independientemente del caudal de la fase móvil. En el laboratorio los compuestos de interés
deben presentar, en el sistema cromatográfico elegido, valores de k' comprendidos entre 1 y
15, con el fin de no alargar excesivamente los tiempos de retención.
Dispersión de bandas:
Cuando se introduce, en una forma de banda muy estrecha, una mezcla de los componentes
a separar en la columna cromatográfica (cabeza de la columna), al eluir la mezcla desde un
extremo de la columna a otra, se observa que las bandas de los solutos se van ensanchando
al mismo tiempo que se separan; este proceso es debido fundamentalmente a la difusión
termodinámica de las moléculas de la banda, que tienden a distribuirse uniformemente en
todo el volumen disponible.

El proceso de difusión es dependiente del tiempo, de forma que la dispersión de la banda

aumentara en función del tiempo de elución. Dado que los procesos de difusión de las
moléculas , tiene su fundamento en movimientos de las mismas al azar, la concentración
final de las moléculas, dentro de una banda cromatográfica adoptara, en un caso ideal, un
perfil de distribución normal, y el registro de las concentraciones de la banda en función del
volumen eluido o del tiempo, dará lugar a una forma gaussiana de anchura definida por la
desviación estándar de la dispersión, estos parámetros característicos se ilustran en la
siguiente figura:
Cromatograma de dos bandas y sus parámetros característicos que se debe tomar en cuenta:
La eficacia de la columna es muy importante en el sistema cromatográfico, expresada en
números de platos teóricos, donde se calcula utilizando la anchura de uno de los picos,
normalmente el ultimo que pueda medirse directamente sobre el cromatograma, con las
siguientes formulas:

El

numero de platos de una columna cromatográfica, depende lógicamente de su longitud, por

lo que para comparar la eficacia de columnas con diferente longitud, se introduce otro
término, denominado altura equivalente de un plato teórico, que relaciona la eficacia de una
columna con su longitud, y que se define como el cociente entre la longitud de la columna y
el numero de platos teóricos: H=L/n
Al considerar la eficacia, solamente se han tenido en cuenta los efectos propios de la
columna, también existen otros parámetros del sistema (anchura de la banda inicial,
velocidad de la fase móvil, etc.) que contribuyen al ensanchamiento de las bandas
cromatográficas. No siempre la baja eficacia de un sistema cromatográfico es atribuible a la
columna, sino también a otros factores.
Por otros lado, para la separación y resolución se puede considerar que el cromatograma
exista una sola banda, sin embargo, el objeto de la cromatografía es separar mezclas de
varios componentes, siendo de suma importancia considerar la separación entre ellos.
Independientemente del número de componentes que pueda tener una mezcla, el problema
de separación de todos ellos, queda siempre reducido al de las dos bandas adyacentes más
difíciles de separar.
La separación entre dos bandas cromatográfica, puede estudiarse en función de dos
parámetros, la retención relativa, definida como el cociente entre los tiempos de retención
corregidos de las dos bandas:
Y la resolución que se define como el cociente de la distancia entre los centros de las dos
bandas y el valor medio de la anchura de las mismas:

Una separación de dos bandas requerirá valores de  y de R, lo más elevado posible. Donde
un valor elevado de R pueda conseguirse aumentando la eficacia de la columna (mayor
longitud de las columnas, menores dispersiones de bandas, etc.) el valor de  es constante
para cada sistema cromatográfico, y solamente podrá variarse alterando la fase estacionaria
o móvil.
La separación de dos bandas debe darse en función de los valores de  y de R, que presente
así los valores altos  y los bajos de R, la separación podrá conseguirse mediante el
aumento de eficacia, mientras que para los valores bajos de  no es practico intentar la
separación en base a un aumento de eficacia y debe procederse a un cambio de sistema.

4.) Cuál es la asimetría de pico adecuada para realizar un análisis. Explique los tipos de
pico
¿Cómo debemos realizar la interpretación del cromatograma?

En la práctica los picos cromatográficos raramente son Gaussianos y la realización

de cálculos sobre el cromatograma basado en esta premisa, puede causar errores
significativos al trabajar con picos distorsionados. La curva de Gauss más apropiada es la
que trabaja con picos cuya asimetría es ligera; aunque todos los picos cromatográficos son
ligeramente asimétricos existen factores que ocasionan errores en la cuantificación.
El factor de asimetría para un pico cromatográfico puede calcularse por medio de la
siguiente ecuación:

As = b + ƒ
b + ƒ - ∆w

Dónde:

∆w = |b - f|

Para los picos gaussianos el factor de asimetria es a 1 si los picos presentan cola y se asigna
a As valores positivos y cuando los picos presentan distorsion frontal se le asignan valores
negativos.
Existen 3 tipos de picos:

- Los asimétricos o picos de Gauss

- Los asimétricos positivos o picos con cola.
- Los asimétricos negativos o picos con distorsión frontal.

¿Cómo debemos realizar la interpretación del cromatograma?

La cromatografía como ya se ha mencionado, es un método de separación tal vez el

más potente del que se pueda disponer en un laboratorio y permite identificar en el mejor de
los casos el número de compuestos químicos presentes en una mezcla, pero no proporciona
información sobre su naturaleza.
Luego de considerar estas limitaciones, la forma o método para realizar un análisis
cuantitativo es la comparación directa entre los patrones de retención de los picos de la
muestra con los de sustancias patrón, trabajando en ambos casos con el mismo sistema
cromatográfico. Se debe tomar en cuenta al momento de las comparaciones utilizar
determinados parámetros que permitan corregir la variabilidad inducida por determinadas
condiciones: como parámetros de retención.

Los más utilizados son:

- Tiempos o volúmenes de retención corregidos.

- Factores de capacidad.
- Tiempos de retención relativos.

5.) Elija un cromatograma donde se observen mínimo 3 bandas (picos) con él calcule el
área para cada pico. Importante para este ejercicio se debe tomar en cuenta todo lo
investigado anteriormente.