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3. Adición de un estándar interno: para hacer el análisis según los tiempos de retención
relativos. El estándar debe reunir los siguientes requisitos:
c. Debe dar solamente un pico y éste no debe solapar o cubrir parcialmente ninguno de los
picos de los componentes de la muestra.
Inyectada la muestra con el estándar, se calcula el tiempo de retención relativo para el compuesto de
interés, luego en igualdad de condiciones se inyecta con el estándar el compuesto que se supone es
de interés, calculando nuevamente el tiempo de retención relativo y comparando el tiempo de
retención relativo con el de la muestra, si corresponde se confirma la presencia del compuesto.
Donde:
La relación de los tiempos de retención, permite minimizar errores cometidos al hacer la inyección y
colocar en funcionamiento el registrador o puesta en marcha del programa., acción que debe ser
simultánea.
( [ ] )
donde:
es el tiempo de retención de la sustancia desconocida X
es el tiempo de retención del alcano normal que tiene z átomos de carbono
es el tiempo de retención de un alcano normal teniendo z+n átomos de carbono
n es la diferencia de átomos de carbono existente entre los alcanos normales (z+n)-z = n
Ejemplo: Una sustancia X se supone que tiene 7 carbonos. Se mezcla con hexano (C 6H14) y
con octano (C8H18) y se obtuvo el cromatograma de la figura.
La cromatografía de gas líquido es una técnica que para el análisis cuantitativo presenta las
siguiente ventajas: Se requiere cantidades de muestra muy pequeñas por el orden de 10 -7 µL,
presenta limites de detección muy bajos, con algunos detectores por el orden de 10 -14 g, los limites
de cuantificación y el rango de linealidad de las gráficas de calibración son muy confiables y
reproducibles si se conservan las condiciones del análisis.
1. Relacionando las áreas de los picos: para medir las áreas se pueden emplear varios métodos:
b. Ancho a media altura: tomando el área como la altura x ancho de base a media altura esta área
así obtenida no es igual al área del triángulo pero si aproximado. Se puede aplicar este método para
relacionar todos los picos del cromatograma, cuando se presentan colas y bases poco netas en los
mismos y así evitar errores. El error es mayor para picos muy angostos. La exactitud será razonable
para picos netos y bien simétricos. Las relaciones matemáticas para determinar los porcentajes de
cada componente se hacen de igual manera que en a.
2. Relacionando alturas: se utiliza este método cuando los picos son angostos, simétricos, bien
definidos y poseen ancho de base muy iguales. Se mide la altura de cada pico desde la base hasta
la cúspide. La sumatoria de las alturas se hace igual al 100% de la mezcla y luego se hacen las
relaciones matemáticas para determinar el % de cada compuesto, de tal forma que para una mezcla
de 3 compuestos a, b y c cuyas alturas son: para a = 90 mm, b = 110 mm, c = 50 mm la sumatoria de
las alturas será igual a 250 mm y el porcentaje de un compuesto como a está dado por:
Procedimiento:
2. Se toma un alícuota de la muestra, se le adiciona igual cantidad de estándar que a los patrones y
se afora al mismo volumen de estos.
4. Se mide la altura, el área o se determina el peso del pico de cada patrón y del estándar y se
calculan las alturas, áreas o pesos relativos, igual procedimiento se hace con el pico del compuesto
de interés en la muestra y el estándar.
5. Se construye una tabla de datos la cual nos da una idea aproximada del rango de concentración
en el cual se encuentra el compuesto en la muestra.
6. Si se requiere mayor precisión se construye una curva de calibración en cuyo eje de abscisas (eje
x) se coloca la concentración relativa y en el eje de ordenadas (eje y) las alturas, áreas o pesos
relativos. Se ubica cada punto, se traza la gráfica y se extrapola a cero. Si quedan puntos por fuera
de la línea, se puede realizar un ajuste por mínimos cuadrados. Se interpola el valor relativo
obtenido para el compuesto en la muestra problema y se determina su concentración. La
concentración real del compuesto en la muestra será igual a la concentración leída en la gráfica
multiplicada por el Factor de dilución (Fd).
La escogencia de la altura, área o peso como parámetro relativo depende de la forma del pico y su
tratamiento debe ser igual para todos los patrones y la muestra.
El rango de concentración para preparar los patrones depende la linealidad de respuesta que presente el
detector para el compuesto de interés.
Ejercicio
Para el análisis del pesticida Malatión en una muestra de tomate por GC, se procedió como sigue: se
pesó una muestra de 10 g de tomate previamente secado, se realizó una extracción con 10 mL de
acetonitrilo y 1 mL de solución de Fenitrotión de 2 mg/L (patrón interno), luego se realizó una
extracción en fase sólida quedando la mezcla finalmente en un extracto de 1 mL usando como
solvente una mezcla de acetona – hexano (1:1). La muestra se inyectó en las condiciones descritas:
Detector NPD
Temperatura del Detector 300 °C
Temperaturas del horno 200 °C (isoterma)
Temperatura Portal de Inyección 275 °C
Flujo gas portador (nitrógeno) 0,6 mLlmin
Volumen de Inyección 1 µL
Se preparó una serie de cuatro patrones usando diferentes volúmenes de un patrón de 10 mg/L de
Malatión que se sometieron al mismo proceso que la muestra (extracción con 10 mL de acetonitrilo +
1 mL de Fenitrotión, y extracto final de 1 mL) y se inyectaron obteniéndose los siguientes resultados