FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA

SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

PROYECTO DE TESIS:
TÍTULO

“EFECTO ANTIMICÓTICO DEL ACEITE ESENCIAL

DE Azadirachta indica Y Schinus molle SOBRE
CEPAS DE Candida Albicans IN VITRO”

PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

QUÍMICO FARMACÉUTICO

PRESENTADO POR:

NEPO CABREJOS SOLEDAD VERONICA

ASESOR

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

CHICLAYO, PERÚ, AGOSTO 2019

 INDICE
Índice general………………………………………………………………....ii
Indice de
imágenes………………………………………………………… .iv
Introducción……………………………………...……………………………v

CAPÍTULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...................................1

1.1 Descripción de la Realidad Problemática........................................1

1.2 Formulación del Problema..............................................................4

1.2.1 Problema General:..................................................................4

1.2.2 Problema Específico:.............................................................4
1.3 Objetivos de la Investigación...........................................................4

1.3.1 Objetivo General......................................................................4

1.3.2 Objetivos Específicos..............................................................4
1.4 Justificación, Importancia y viabilidad de la Investigación...............5

1.4.1 Justificación de la investigación................................................5

1.4.2 Importancia de la investigación...............................................5
1.4.3 Viabilidad de la investigación.................................................6
1.5 Limitaciones del estudio.................................................................7

CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO............................................................8

2.1 Antecedentes..................................................................................8

2.1.1 A nivel Nacional..........................................................................8

2.1.2 A nivel Internacional..............................................................10
2.2 Bases Teóricas..............................................................................13

2.3 Definición de términos básicos......................................................21

CAPÍTULO III: HIPÓTESIS Y VARIABLES...............................................22

3.1 Hipótesis de la Investigación........................................................22

3.1.1 Hipótesis General..............................................................22

3.1.2 Hipótesis Específicas.....................................................22
3.2 Identificación de variables...........................................................23
 3.3 Operacionalización de variables..................................................23

CAPÍTULO IV: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN......................25

4.1. Tipo y Nivel de Investigación:.........................................................25

4.1.1. Tipo de Investigación.............................................................25

4.1.2. Nivel de Investigación...........................................................25
4.2. Método y Diseño de la investigación:............................................25

4.2.1 Método de la investigación...................................................25

4.2.2 Diseño de la investigación.....................................................25
4.3 Población y muestra de la Investigación........................................25

4.3.1 Población:.................................................................................25
4.3.2 Muestra:...................................................................................25
4.4 Técnicas e Instrumentos de Recolección de Datos:......................26

4.4.1 Técnicas:...............................................................................26
4.4.2 Instrumentos.........................................................................27
4.4.3 Procedimientos.....................................................................28
4.5 Aspectos Eticos.............................................................................28

CAPÍTULO V: ADMINISTRACIÓN DEL PROYECTO DE TESIS.............29

5.1 Asignación de Recursos.................................................................29

5.1.1 Recursos Humanos...............................................................29

5.1.2 Recursos Materiales.............................................................29
5.2 Presupuesto...................................................................................30

5.3 Cronograma...................................................................................32

FUENTES DE INFORMACIÓN.................................................................33
ANEXO 01: MATRIZ DE CONSISTENCIA...............................................37
 ÍNDICE DE FIGURAS

pág.
Figura Nº 01: Figura Nº 01 Azadirachta indica ……………………………14
Figura Nº 02: Figura Nº 02 Flores de Azadirachta indica…..…..……..…15
Figura Nº 03: Estructura químicas de los triterpenoides………………...…
17
Figura Nº 04 Arbol de Schinus molle…….………………………………….18
Figura Nº 05 Hoja, Frutos y Flores de Scihinus molle….
………………….18
 INTRODUCCION

Existiendo actualmente un alto consumo de plantas medicinales , el Perú

posee una megadiversidad de flora cuyos usos son impiricamente
utilizados y aunque algunos ya han sido estudiadas falta conocer sus
usos terapéuticos , muchas de ellas conocidas por poseer propiedades
medicinales que se caracterizan por tener principios activos, metabolitos
secundarios y aceites esenciales, sin embargo existe otro gran grupo de
estos recursos, de los cuales se tienen poca información sobre su
actividad farmacológica y uso medicinal. Teniendo en cuenta esto, cada
día se está impulsando la investigación de estos recursos, como es el
caso Azadirachta indica y schinus molle L que presentan compuestos
químicos, a los cuales se les atribuye propiedades terapéuticas tales
como actividad antimicrobiana, antifúngica, antiinflamatoria y analgésica
entre otras.
Este trabajo tiene como objetivo demostrar el efecto antimicótico del
aceite esencial de Azadirachta indica y Schinus molle aplicándolas en
cepas de Candida albicans in vitro, el cual nos dará a conocer el
potencial del efecto en diferentes concentraciónes de los aceites de estas
dos plantas que posteriormente desarrollando este trabajo de
investigación y teniendo el conocimiento previo que el uso de
Azadirachta indica y Schinus molle L. tiene propiedades curativas
podrán ser utilizadas como tratamiento alternativo o coadyudante en
micosis producidas por Candida albicans.
 CAPÍTULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 Descripción de la Realidad Problemática

Las enfermedades causadas por hongos son un problema

que siempre ha sido de importancia a nivel mundial, pero; en los últimos
años se han convertido en las enfermedades desatendidas. Así se
generan estudios actualmente de la incidencia de esta micosis llamada
candidiasis, en las UCI (unidad de cuidados intensivos) europeas, las
cuales estimaron que por cada 7.07 episodios por 1000 admisiones en la
UCI, la mortalidad se debía en un 40% por esta micosis causada (1).

La candidiasis es una causa principal de mortalidad asociada a

micosis en los Estados Unidos, los datos del Centro Nacional de
Estadísticas de Salud dicen que la mortalidad asociada a Candida se ha
mantenido estable, aproximadamente a 0.4 muertes por cada 100,000
habitantes, desde 1997, pero a ido en aumento con el tiempo por exhibir
resistencia a los triazoles y anfotericina B siendo la segunda causa de
muertes en pacientes hospitalizados en UCI y pacientes
inmunocomprometidos.

Las infecciones por Candida están asociadas con una alta

mortalidad bruta del 46% al 75%, lo que refleja las enfermedades
subyacentes graves de los pacientes infectados; esta es una infección
común de la piel, la cavidad oral y el esófago, el tracto gastrointestinal, la
vagina y el sistema vascular de los seres humanos. Aunque la mayoría de
las infecciones se producen en pacientes inmunodeprimidos o debilitados
de alguna otra manera, el organismo más responsable de la enfermedad,
Candida albicans, expresa varios factores de virulencia que contribuyen a
la patogénesis.

La capacidad de Candida albicans para infectar nichos de

hospedadores tan diversos es apoyado por una amplia gama de factores

1
de virulencia como las adhesinas e invasiones, formación de biopelículas,
tigmotropismo, polimorfismo. reguladores de pH, metabolismo adaptativo,
secreción de hidrolasa, proteínas de shock térmico, respuestas al estrés
ambiental y debido a la a la alta gama de adaptación y factores que
generan la resistencia a los antibióticos como el fluconazol y la nistatina
los cuales son los más usados en última instancia para la erradicación de
esta levadura, generando que se apliquen más antibióticos de alta gama
causando efectos secundarios en los pacientes tratados (2).

Las plantas y sus propiedades cumplen un rol importante desde ya

hace muchos años, debido a la aparición de los antibióticos se fueron
dejando de lado, hoy se han retomado por el alto consumo, la resistencia
y los efectos secundarios que generan los antibióticos.

El árbol de Nim, también conocido como lila india y margosa, cuyo

nombre científico es Azadirachta indica, es un árbol perteneciente a la
familia Meliaceae, originario de la India. Al Nim se le conoce un uso
ancestral, los estudios están encaminados a conocer la eficacia del Nim,
donde se han encontrado nuevos usos para este árbol: sus semillas, su
corteza y sus hojas, los cuales tienen compuestos con usos antisépticos,
antivirales, antipiréticos, antiinflamatorios (3).

La semilla de neem es muy rica en ácido graso, constituyendo el 40 % de

su peso, los componentes grasos son denominados terpenoides
identificándose la presencia de más de 100 tipos. Los limonnoides
(Triterpenos) los más importantes son nueve grupos y comúnmente son
utilizados por su actividad fúngica bactericida y antialimentaria para
control de insectos de manera natural sin contaminantes donde los más
importantes son: azadiractina, melantriol, nimbina y salannina (4)

La nimbidina también demostró actividad antifúngica al inhibir el

crecimiento de Tinea rubrum; Gedunin, aislado del aceite de semilla de
neem ha sido informado que posee actividad antifúngica (5). Compuestos
que contienen azufre, como los cíclicos.trisulfuro y tetrasulfuro aislados

2
del destilado al vapor de hojas de neem frescas y maduras tienen
actividad antifúngica contra Trichophyton mentagrophytes (6).

Schinus molle es un árbol que se puede encontrar en la región

andina de Sudamérica, principalmente Perú, crecen en los Andes
Peruanos a altitudes de hasta 3 650 m.s.n.m, florece en primavera y
verano, los frutos aparecen en otoño y persisten en invierno. Sabinene y
limoneno son los principales componentes de los aceites obtenidos de las
hojas y bayas de S. molle respectivamente, mientras que se ha informado
que su aceite esencial tiene propiedades antimicrobianas, antifúngicas,
antiinflamatorias, antiespasmódicas, antipiréticas, antitumorales y
cicatrizantes. El aceite generalmente se obtiene por destilación por hidro o
vapor. Esta técnica, incluso cuando no induce fenómenos extensos de
hidrólisis y degradación térmica, proporciona en cualquier caso un
producto con un olor característico (7).

Debido a las propiedades de estas plantas y su alto potencial en el

tratamiento de muchas enfermedades se realiza este estudio, ya que aún
se desconocen investigaciones con respecto al aceite extraído de estas
dos plantas frente a micosis producidas por Candida albicans.

1.2 Formulación del Problema

1.2.1 Problema General:

¿Cuál es el efecto antimicótico del aceite esencial de Azadirachta indica y

Schinus molle sobre cepas de Candida albicans in vitro?

1.2.2 Problema Específico:

¿Cuál es el efecto antimicótico del aceite esencial de Azadirachta indica
sobre Candida albicans?

3
¿Cuál es el efecto antimicótico del aceite esencial de Schinus molle
sobre Candida albicans?
¿Cuál será la concentración del aceite esencial de Azadirachta indica y
aceite esencial de Schinus molle L. en relación a la actividad antimicótica
sobre Candida albicans in vitro?

1.3 Objetivos de la Investigación

1.3.1 Objetivo General

Demostrar el efecto antimicótico del aceite esencial de Azadirachta
indica y el aceite esencial Schinus molle L. sobre cepas de Candida
albicans in vitro.

1.3.2 Objetivos Específicos

Determinar el efecto antimicótico del aceite esencial de Azadirachta

indica sobre cepas de Candida albicans.

Determinar el efecto antimicótico del aceite esencial Schinus molle sobre

cepas de Candida albicans.

Comparar la efectividad antimicótica del aceite esencial de Azadirachta

indica en relación con el aceite esencial de Schinus molle sobre
Candida albicans in vitro.

1.4 Justificación, Importancia y viabilidad de la Investigación

1.4.1 Justificación de la investigación

Los medicamentos utilizados actualmente para el tratamiento de

enfermedades fúngicas producen o causan resistencia, lo que nos
conlleva a la búsqueda de nuevas y mejores opciones para sustituir los
medicamentos convencionales. Lamentablemente las células humanas y
las fúngicas son parecidas ya que comparten gran parte de las vías del
metabolismo intermediario, lo que hace que sea más difícil encontrar

4
blancos que inhiban directamente a las células fúngicas y no afecten las
células humanas.
Es por esto por lo que se plantea como una solución el uso de plantas
para la obtención de agentes antimicóticos más seguros para el cuerpo
humano. El icosano (C20H42), ácido esteárico (C18H36O2) y el ácido oleico
(C18H34O2) son conocidos por tener propiedades antimicóticas,
antibacteriales y antitumorales (Chemical composition of steam and
solvent crude oil extracts from Azadirachta indica leaves), Azadirachta
indica y Schinus molle contienen estos compuestos lo que las hace
importantes opciones para el tratamiento de la micosis producida por
Candida albicans (3) .

1.4.2 Importancia de la investigación

El Perú es reconocido a nivel mundial por ser un país con una gran
biodiversidad natural y teniendo encuenta que cada región geográfica
cuenta con su propia flora donde se desarrolla dependiendo de las
diferentes condiciones climáticas y geográficas como no realizar
estudios basados en la flora de la región costa realizando
investigaciones desde el punto de vista fitoquímico o farmacológico,
donde nos podría llevar al descubrimiento de nuevas moléculas
bioactivas con aplicación en medicina natural que podrían reemplazar a
los medicamentos formulados a base de preparaciones sintéticas, ya que
estos generan una serie de efectos secundarios en el cuerpo humano.
Azadirachta indica y Schinus molle L., son plantas que encontramos en
nuestro país, que cuentan con actividad antifúngica en los compuestos
contenidos en su aceite esencial extraído de las hojas y bayas
respectivamente. Es por esto que es de mucha importancia estudiar
ambas plantas para poder encontrar soluciones naturales que no generen
efectos adversos o resistencia en el cuerpo humano.

5
1.4.3 Viabilidad de la investigación
La investigación es viable por los siguientes aspectos:

Teórico: Se cuenta con el acceso a importantes bases de

datos, repositorios tanto nacionales como internacionales, revistas
científicas, entre otros; para obtener información confiable que respaldará
el presente proyecto de investigación.

Recursos humanos: El proyecto puede ser desarrollado por

un grupo pequeño de personas, no siendo necesario contar con personal
especializado o numeroso.

Temporal: El presente proyecto de investigación se llevará a

cabo a corto plazo, siendo el tiempo de duración aproximadamente de 4
meses.

Financiero: Los gastos económicos que demande este

proyecto de investigación serán cubiertos en su totalidad por el
investigador, ya que no representa una gran inversión, ni existe la
necesidad que sea financiado por alguna institución.

1.5 Limitaciones del estudio

El presente proyecto solo demostrará el efecto antimicótico del aceite

esencial de las hojas de Azadirachta indica “neen” y Schinus molle “molle”
sobre Candida albicans, por lo que loa resultados obtenidos no deben ser
generalizados a otro tipo de hongos ya que se necesitaría realizar
estudios con más variedades de microrganismos para tener un panorama
más amplio que nos permita hacer inferencias.

Por lo que realizar estudios más extensos mostrara limitaciones en

cuanto al costo de financiamiento, así mismo, el tiempo resulta siendo
otra limitación a tener en cuenta, ya que un estudio de mayor amplitud

6
demandaría mayor tiempo el cual no puede ser asumido por el
investigador.

CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO

2.1 Antecedentes
2.1.1 A nivel Nacional

Zambrano A., en su investigación “ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA “IN

VITRO” DEL ACEITE ESENCIAL DEL FRUTO MADURO DE Schinus
molle L. (Molle) FRENTE A CEPA DE Candida albicans ATCC 10231”,
tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico
Universidad Norbert Wiener Lima- Perú 2019 Se desarrolló el presente
estudio con el objetivo de evaluar la actividad antimicótica “in vitro” del
aceite esencial del fruto maduro de Schinus molle L. (Molle) frente a cepa
de Candida albicans ATCC 10231.La metodología para la extracción del
aceite esencial se realizó por destilación con arrastre de vapor. La
evaluación de actividad antimicótica por el método de Kirby-Bauer
(difusión en disco). En 18 placas con Agar Sabouraud Dextrosa, se
sembró la cepa con una turbidez de 0,5 de McFarland. Se evaluó el aceite
esencial de Schinus molle L. en concentraciones de 40, 60, 80 y 100%,
con el control positivo Fluconazol 25 µg y el negativo dimetilsulfóxido, se
midieron los halos de inhibición con vernier digital a las 24, 48 y 72 horas.
En los Resultados el rendimiento del aceite esencial de los frutos
maduros de Schinus molle L. fue 5,2%, la densidad 0,833 g/mL y el pH 5.
El aceite esencial de Schinus molle L. a 40 y 60% mostró halos de
inhibición de 6 mm, 80% de 9,7 mm y 100% de 12,3 mm. Se concluye que
el aceite esencial de Schinus molle L. a 40 y 60% no presentó actividad, a
80 y 100% presentó actividad antimicótica frente a cepa de Candida
albicans ATCC 10231 (8).

Cano W. en su trabajo de investigación “EFECTO DEL EXTRACTO

ETANÓLICO DE Azadirachta indica SOBRE LA VIABILIDAD IN VITRO

7
DE Streptococcus mutans” para obtener el Título Profesional de Cirujano
Dentista de la Universidad Cesar Vallejos Piura-Perú 2017. Tuvo como
objetivo principal, evaluar el efecto del extracto etanólico de Azadirachta
indica sobre la viabilidad in vitro de Streptococcus mutans. Se utilizaron
dos métodos de evaluación, el método de discodifusión para evaluar el
efecto antibacteriano y para determinar la concentración mínima
inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) se utilizó el
método de microdilución en caldo. Por el método de microdilución se
realizó la medición en el programa LASEZ Leica y se reportó en µm de
diámetro de botón. Experimentalmente de comprobó que el extracto
etanólico de NEEM tiene efecto inhibitorio sobre S. mutans ATCC 25175
pero estadísticamente se demostró que no había significancia respecto al
control positivo p < 0.05. Se concluye que el extracto alcohólico de
Azadirachta indica (Neem) tiene efecto inhibitorio in vitro sobre
Streptococcus mutans ATCC 25175 pero dicha inhibición cuando se
compara con el control positivo gluconato de clorhexidina al 0.12 % no es
estadísticamente significativa (9).

Velarde H, en su proyecto de investigación “EFECTO ANTIBACTERIANO

IN VITRO DEL ACEITE ESENCIAL DE Citrus reticlulata VARIEDAD
Satsuma “MANDARINA” SOBRE Staphylococcus aureus y Escherichia
coli” para obtener el grado académico Bachiller en Medicina Trujillo-Perú
2017. Tuvo como objetivo demostrar el efecto antibacteriano in vitro del
aceite esencial de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina” sobre
Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Utilizaron el método difusión
en discos, utilizando diferentes concentraciones (30,60 y 90%) de aceite
esencial de Citrus reticulata y utilizaron como fármacos controles
vancomicina y ciprofloxacino En los resultados se evidenció que a todas
las concentraciones del aceite esencial hubo efecto antibacteriano ya que
los halos de inhibición fueron mayores a 8mm según escala de
Duraffourd, asimismo a mayor concentración utilizada mayor era el efecto
antibacteriano sobre Staphylococcus aureus que en la cepa Escherichia

8
coli, de esta manera se llegó a la conclusión que el aceite esencial de
citrus reticulata variedad Satsuma “ mandarina ” posee efecto
antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus y Escherichia
coli (10).

Arévalo O., “Efecto antibacteriano y citotóxico de dos extractos

metanólicos a base de Moringa oleifera (moringa) y Azadirachta indica
(neem) sobre cepas de Enterococcus faecalis” tesis para optar el título
profesional de: Cirujano Dentista de la Universidad Peruana De Ciencias
Aplicadas Lima-Perú 2016, cuyo objetivo fue evaluar in vitro el efecto
antibacteriano y citotóxico de dos extractos metanólicos de Azadirachta
indica y Moringa oleifera en cepas de Enterococcus faecalis (ATCC
29212). Métodos: Los extractos metanólicos de Azadirachta indica y
Moringa oleifera se prepararon in vitro. El efecto antibacteriano de los
extractos contra cepas de Enterococcus faecalis se evaluó mediante la
técnica de difusión en agar (perforación en gel). La concentración
inhibitoria mínima (MIC) se determinó mediante el método de
microdilución y la citotoxicidad utilizando la línea celular MDCK.
Resultados: El extracto metanólico que obtuvo el mayor efecto
antibacteriano en 24 y 48 horas contra Enterococcus faecalis fue Moringa
oleifera, obteniendo un halo de 35.5 ± 1.05 y 44.83 ± 0.98,
respectivamente. La MIC para ambos extractos fue de 75 μg / ml. El
efecto bactericida para el extracto de Azadirachta indica fue de 25 μg / ml
y para el extracto de Moringa oleifera fue de 75 μg / ml. Conclusiones: se
demostró que los extractos metanólicos de Azadirachta indica y Moringa
oleifera tienen un efecto antibacteriano contra cepas de Enterococcus
faecalis a las 24 y 48 horas. Ninguno de los extractos fue tóxico para las
líneas celulares a bajas concentraciones.

9
Espíndola R., en su trabajo de tesis “EFECTO ANTIFUNGICO IN VITRO
DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LAS HOJAS DE Bixa orellana L.
“achiote” SOBRE Candida albicans ATCC 10231” para obtener el Título
de Médico Cirujano en la Universidad Privada Antenor Orrego Trujillo –
Perú 2015, cuyo objetivo fue evaluar el efecto antifúngico in vitro del extracto
etanólico de las hojas de Bixa orellana L. "Achiote" sobre Candida albicans
ATCC 10231. En la metodología se preparó el extracto etanólico de las hojas de
Bixa orellana L. "Achiote" a concentraciones: 5%, 25%, 50%, 75% y 100%. Para
la evaluación de la actividad antifúngica se utilizó el método de Kirby Bauer
(difusión en disco) y la determinación de la concentración mínima inhibitoria, se
expuso Candida albicans ATCC 10231 a cinco concentraciones del extracto, así
mismo se utilizaron dos grupo control, uno con fluconazol y otro con el inóculo
microbiano con suero fisiológico; realizándose diez repeticiones en cada caso.
En los resultados se demostró el efecto antifúngico del extracto etanólico de las
hojas de Bixa orellana L. "Achiote" sobre Candida albicans ATCC 10231 al
comparar los halos de inhibición según escala de Duraffourd para las cinco
concentraciones utilizadas, según la cual Candida albicans ATCC 10231 fue
sensible a partir concentraciones de 50% y 75% con un diametro promedio de
los halos de 11.6 y 16.1mm de diametro respectivamemte, mientras que a
concentracion de 100% el diametro promedio del halo fue 33.8 mostrando así un
efecto semejante al fluconazol. La CMI para Candida albicans ATCC 10231 fue a
concentración del 5%. Además utilizando las pruebas de análisis de varianza y
DUNCAN, se observó que existe diferencia estadísticamente significativa entre
las diferentes concentraciones del extracto etanólico de Bixa orellana L.
"Achiote" sobre el crecimiento de Candida albicans ATCC 10231. Se concluyó
que el extracto etanólico de las hojas de Bixa orellana L. "Achiote" si tiene
efecto antifúngico sobre Candida albicans ATCC 10231 (11).

Salas A., en su trabajo de tesis Efecto antimicótico del aceite esencial de

Minthostachys mollis (muña) en cepas de Candida albicans .Para obtener
el título profesional de licenciado en biología, universidad del Altiplano
Puno - Perú 2015 cuyo objetivo fue determinar el efecto antimicótico del
aceite esencial de Minthostachys mollis (muña) en cepas de Candida
albicans, cuya metodología estuvo basada midiendo 105 halos de

10
inhibición, distribuidos en 8 grupos mediante el método de Kirby –
Bauer, para ello utilizó una cepa clínica de Candida albicans. Los grupos
de estudio fueron concentraciones de
1/25, 1/50, 1/100, 1/150, 1/200, 1/250, un grupo control positivo
fluconazol, y un grupo control negativo agua destilada estéril. El análisis
estadístico se realizó mediante la prueba de DCA y Tukey, usando el
paquete SAS v. En los resultados no se encontró diferencia significativa
entre el T1 (1/25), T6 (1/250) y el grupo de Fluconazol (p <.0001), a un α
= 0.05. En Conclusión de los seis tratamientos, el sexto demostró una
concentración inhibitoria adecuada de 1ml/250ul (T6), resultando ser
superior con un diámetro de halo de inhibición mayor, en comparación al
fluconazol (control positivo), demostrándose que el aceite de
Minthostachys mollis tiene efecto antimicótico sobre cepas de Candida
albicans (12).

Tuyo L, “EFECTO DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA “IN VITRO” DEL

ACEITE ESENCIAL DE Tagetes minuta L. “HUACATAY” FRENTE A
Candida albicans”, tesis para optar el Título Profesional de biólogo
microbiólogo, en la Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann,
Perú – Tacna, 2015. Objetivo: Evaluar la actividad antimicótica in vitro del
aceite esencial de Tagetes minuta L. “huacatay” frente a la levadura
Candida albicans. Metodología: Para la extracción del aceite esencial, se
emplearon las hojas y tallos, realizándose por arrastre a vapor. La cepa
utilizada para este ensayo fue Candida albicans. La actividad antimicótica
“in vitro” del aceite esencial de esta planta se puso de manifiesto
utilizando el método de difusión del disco (Kirby Bauer), con cuatro
repeticiones a diferentes concentraciones, obteniéndose de esta manera
la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima
Fungicida (CMF). Los resultados para la difusión en disco fue para el caso
de Candida albicans en el tratamiento T1 con una sensibilidad promedio
de 13,25 mm; a partir de ello los demás tratamientos fueron sensibles.

11
Los resultados del MIC fue en el caso de Candida albicans de 2,8728
mg/ml (T8). Además, la CMF fue para esta levadura de 3,2886 mg/ml, en
la que no se evidenció crecimiento alguno. Se concluye que el aceite
esencial de Tagetes minuta L. presentó compuestos bioactivos,
principalmente monoterpenos, con efecto antimicótico in vitro frente a la
levadura Candida albicans (13) .

2.1.2 A nivel Internacional

En la investigación realizado por Huerfano C., EVALUACIÓN DE LA

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE CINCO EXTRACTOS VEGETALES
DE ESPECIES ALTOANDINAS FRENTE A DISTINTOS
MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA CLÍNICA, tesis para optar por
el título de Microbiólogo Industrial, Universidad Javeriana - Colombia
2018, realizo la presente investigación con el objetivo de evaluar la
actividad antimicrobiana de extractos vegetales de cinco especies
altoandinas frente a microorganismos de importancia clínica, en la
metodología para la concentración de extractos etanólicos vegetales se
trituraron las hojas secas y se maceraron en frío, se evaluó la actividad
antimicrobiana mediante la técnica de difusión de agar, midiendo halos de
inhibición en cajas de Petri que contenían el microorganismos sobre agar
Mueller Hinton. Además se llevó a cabo el ensayo y cálculo de la
concentración mínima inhibitoria mediante el método se diluciones
seriadas en caldo nutritivo. En los resultados obtenidos se evidenció que
el extracto etanólico de Tiobuchina grossa fue el único que presento
actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus y Candida
albicans, en concentración de 30mg/ml. Este trabajo concluyó que el
extracto de las hojas de Tibouchina grossa presentó actividad
antimicrobiana sobre microorganismo de importancia clínica, lo que tiene
grandes implicancias si se tiene en cuenta que en la actualidad no se
reportan estudios (14)

12
Lara L, EFECTO INHIBIDOR DEL EXTRACTO OLEOSO DEL Orégano
vulgare SOBRE EL CRECIMIENTO IN VITRO DE CEPAS DE
Streptococcus mutans, tesis para obtener el título de Odontólogo, en la
Universidad Central del Ecuador, 2017.Objetivo: determinar el efecto
inhibidor del aceite esencial Orégano vulgare al 50 y 100%, sobre el
crecimiento in vitro de Streptococcus mutans. Metodología: mediante el
método de difusión en agar con disco de (Kirby – Bauer). Se obtuvo el
aceite esencial de Orégano vulgare por el método de arrastre por vapor
de agua. Dicho aceite fue adquirido a la empresa de especies naturales
ISABRU BOTANIK SA. Para realizar el análisis microbiológico, se utilizó el
aceite esencial del orégano al 50 y 100%. Este aceite esencial, fue
comparado con Gluconato de Clorhexidina al 0.12% como grupo de
control positivo y como control negativo se utilizó agua destilada.
Resultados: una vez realizado el estudio in vitro y pruebas de sensibilidad
se obtuvieron los siguientes resultados: El aceite esencial del Orégano
vulgare a la concentración del 100% tuvo mayor efecto sobre
Streptococcus mutans, que a la concentración del 50%. El aceite esencial
de Orégano vulgare a sus dos concentraciones al 50 y 100% tienen
mayor efectividad antibacteriana que el control positivo: Clorhexidina al
0.12%.Conclusiones: el extracto oleoso del Orégano vulgare al 100%
presenta una mayor acción antimicrobiana frente a la concentrcion al 50%
y clorhexidina al 0.12% sobre cepas de Streptococos mutans (15) .

Rivadeneira D, “POTENCIAL BIOSIDA DEL ACEITE ESENCIAL DE

Schinus molle L. (Molle) FRENTE AL GLUCONATO DE CLORHEXIDINA
AL 0.12% SOBRE Streptococcus mutans, PRINCIPAL AGENTE
CARIOGÉNICO” ESTUDIO IN VITRO. Proyecto de investigación como
requisito previo a la obtención del grado académico de Odontólogo en la
Universidad Central del Ecuador, 2015. La presente investigación tuvo
como objetivo evaluar el potencial biocida “in vitro” que posee el AE de
Schinus molle L. frente al Gluconato de clorhexidina al 0,12% sobre
Streptococcus mutans. La metodología: para la extracción del aceite
esencial de 140 g de hojas mediante hidrodestilación se obtuvo 2 mL de

13
aceite esencial. Se Evaluó el efecto antibacteriano del aceite esencial de
Schinus molle L. al 50 y 100% utilizando el método de Kirby-Bauer
(difusión en disco). Realizó la siembra por hisopado del microorganismo
con una turbidez de 0,5 de Mcfarland, empleó el control positivo
clorhexidina al 0.12% y negativo agua destilada. Incubó las placas a 37°C
por 24 y 72 horas, midió los halos de inhibición con calibrador milimétrico.
En su resultado reportó un rendimiento de 1,48% y los halos de inhibición
del aceite esencial de Schinus molle L. al 50% en 24 horas fueron de
13,15 mm y a las 72 horas de 13,25 mm, mientras que al 100% en 24
horas fueron de 12,50 mm y a las 72 horas de 12,60 mm. Concluye que
el aceite esencial de Shinus molle L. tiene actividad biocida sobre cepa
de Streptococcus mutans ATCC 25175 en ambas concentraciones (16)

Ospina D., en su investigación “ACTIVIDAD ANTIFUNGICA DEL

EXTRACTO CRUDO DE Azadirachta indica A.JUSS. DE SUSPENSIÓN
DE CÉLULAS SOBRE DERMATOFITOS CAUSANTES
ENFERMEDADES PATÓGENOS AL HOMBRE”, en su tesis para optar
título de Magister en Ciencias Agrarias Medellin - Colombia 2014 cuyo
objetivo principal de este trabajo fue evaluar a través de un método de
referencia in vitro la actividad antifúngica de diferentes extractos de
cultivos celulares de neem sobre varios aislamientos de Trichophyton
mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Microsporum canis y
Epidermophyton floccosum, cuya metodología emplearon la microdilución
en caldo M38-A2 de referencia para hongos filamentosos y dermatofitos.
Se evaluaron 14 aislamientos de los dermatofitos Trichophyton
mentagrophytes, Trichophyton rubrum, Microsporum canis y
Epidermophyton floccosum .Los extractos de neem fueron obtenidos
mediante partición metanol-hexano a partir del aceite de semillas y hojas
verdes maduras, adicionalmente se analizaron por cromatografía líquida
de alta resolución (CLAR) con el fin de relacionar su perfil químico con el
contenido de terpenoides de conocida actividad antifúngica. Se empleó
como control positivo al antimicótico terbinafina. Los resultados de esta
investigación mostraron inhibición total del crecimiento de los aislamientos

14
de dermatofitos a concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) entre
50µg/ml y 200 µg/ml para el extracto de hojas entre 625 µg/ml y
2500µg/ml, para el extracto de aceite de semillas. La CMI encontrada
para la terbinafina (control positivo) fluctuó entre 0,0078µg/ml y
0,0313µg/ml, los extractos metanólicos de hojas y aceite de semillas de
neem exhibieron diferentes perfiles cromatográficos en CLAR, lo cual
podría explicar las diferencias observadas en su actividad antifúngica, en
conclusión tanto las hojas de neem como los extractos de aceite de
semillas fueron capaces de inhibir el crecimiento de T. mentagrophytes, T.
rubrum, E rubrum, E. floccosum y M. canis, el extracto de las hojas neem
tuvo mayor actividad antifúngica de ambos , quizás debido a una mayor
concentración de terpenoides con baja polaridad , como reveló su perfil de
CLAR (17)

2.2 Bases Teóricas

Candida

Es un microorganismo unicelular, Gram positivo, considerado como un

hongo dimórfico debido a que en estado saprófito se encuentra en forma
de levadura y en estado parasitario presenta la forma de pseudohifa. La
levadura tiene forma redonda u ovalada de 2-4 um, mientras que la forma
filamentosa presenta un conjunto de células divididas por septos
originadas por blastosporas (18).

Factores de Virulencia

Morfogenesis: Es una condición reversible entre levadura (unicelular) y

la forma de crecimiento filamentoso de Candida albicans.Candida
albicans es polimórfica, ya que existe en forma de levadura (blastosporas)
o como filamentos (pseudohifa o hifa). La morfogénesis se refiere a la
transición entre las levaduras (unicelulares) y la forma de crecimiento
filamentosa del microorganismo, que puede convertirse de forma

15
reversible a células de levadura, con crecimiento de hifa o pseudohifa
(19).

Adherencia a las células del hospedadero : La adherencia de Candida

albicans a células del hospedero es crucial para iniciar y mantener la
relación de comensal, además de servir para la colonización de las
células epiteliales, endoteliales, factores solubles, matriz extracelular y
materiales inertes implantados en el cuerpo del hospedero. Las adhesinas
son biomoléculas que promueven la unión a las células del hospedero a
sus ligandos (20).

Enzimas degradativas secretadas. Existen dos grandes familias de

enzimas degradativas secretadas y algunos de sus miembros han sido
asociados con invasión. Corresponden a las aspartil proteinasas (SAP,
codificadas por 10 genes) y las fosfolipasas (PL). Las primeras pueden
estar unidas o incorporadas en la pared celular o ser secretadas y sirven
para que C. albicans hidrolice proteínas del hospedero como colágeno,
laminina, fibronectina, mucina, lactoferrina e inmunoglobulinas (20).

Formacion de biopelículas: Estan consisten en una estructura de

levaduras e hifas embebidas en una matriz extracelular producida por sí
misma, que contribuyen a la dificultad en el tratamiento de pacientes con
infecciones sistémicas, debido a la alta resistencia a la respuesta inmune,
a los medicamentos antifúngicos y a que genera una falla en artefactos
médicos como catéteres y válvulas cardíacas que le sirven al hongo como
superficie de adhesión (20).

Candida albicans

Candida albicans es un hongo micelio-levaduriforme, constituyente de la

flora indígena del ser humano y se encuentra normalmente en tracto
gastrointestinal y genital femenino (21) .

16
Se asocia a cuadros patológicos en los que usualmente el hospedero
presenta algún factor predisponentes, en el cual hay inhibición de los
mecanismos de defensa celular o tisular permitiendo que organismos
normalmente comensales, como C. albicans, invadan y causen
infecciones(22).

Entre los factores predisponentes se incluye el tratamiento con drogas

inmunosupresoras, antibióticos de amplio espectro, drogas
anticancerígenas, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA)
diabetes mellitus y deficiencias nutricionales. También el uso de catéteres
y procedimientos quirúrgicos se incluyen como factores de riesgo, pues
estos representan la puerta de entrada para el hongo a tejidos u órganos
internos (23).

Epidemiologia

C. albicans en condiciones normales es parte de la flora orofaríngea,

gastrointestinal y del aparato reproductor femenino. Las infecciones son
endógenas excepto en casos de contacto directo de la mucosa con
lesiones de otras personas (p. ej., contacto sexual). C. albicans es una
causa común de infecciones nosocomiales, pero los hongos con
frecuencia se derivan de la propia flora del paciente más que de
infecciones cruzadas. Los procedimientos con penetración corporal y los
dispositivos a permanencia pueden actuar como sitio de entrada para la
infección y el número de microorganismos de Candida disponibles puede
incrementarse con el uso de fármacos antibacterianos (24).

Azadirachta indica (Neem).

El Neem es un árbol originario de la India conocido también como

el nimbo de la India o margosa, nim o neem en Latinoamérica, y lila india,
es un árbol perteneciente a la familia Meliaceae se adapta y crece bien
en zonas de clima tropical y subtropical.

17
Es un árbol de crecimiento rápido que puede alcanzar de 15 a 20 metros,
se caracteriza por tener tronco recto y corto con hojas largas y pinadas.
Las Flores son ramificadas y miden de 5 a 15 cm de largo, las flores
individuales presentan 5 lóbulos redondos y de color pálido. Sus frutos
son pequeños de 1.0 a 2.0 cm de largo, de color Amarillo cuando
madura(25).

“El Neem presenta propiedades insecticidas, además tiene uso

medicinal, forestal y farmacológico. En la actualidad los científicos
continúan descubriendo aplicaciones medicinales de los derivados de
Neem, la corteza, la semilla y las hojas, han probado su efectividad como
antiséptico, antivirales, antinflamatorios, antihongos, antiúlceras,
antihelmintico, antipiretico, diurético, emoliente, astringente y vermífugos,
siendo estas propiedades en conjunto las que lo hacen ser una cura para
infinidad de enfermedades” (25) .

Taxonomía de Azadirachta indica

Reino: Plantae

División: Embriofitas
Orden: Geraniales.
Familia: Meliaceae.
Género: Azadirachta
Especie: Azadirachta indica.

18
Figura Nº 01 Azadirachta indica Fuente: Universidad Nacional de Piura
(2015)

Propiedades Medicinales de Azadirachta Indica

“En medicina tradicional, la corteza de neem se utiliza para aliviar

inflamaciones e irritaciones cutáneas y curar heridas, hemorroides y
encías sangrantes. La savia, por su parte, se emplea para curar diversas
dermatosis incluidas hasta hace poco las tremendas úlceras de la
lepra”(26).

“La goma, se utiliza como emulgente para el dolor de garganta y las

flores como vermífugos, para aliviar la tos y varias dolencias oculares,
entre ellas las cataratas. Los frutos, también con poder vermífugo, sirven
para tratar los trastornos urinarios, purificar la sangre y curar los granos
sangrantes”(26).

El aceite de neem se utilizaba como fortaleciente para niños (sur de la

India), se considera aun como un remedio óptimo para los eccemas,
abscesos, lesiones de lepra, psoriasis, caspa, para matar piojos, aliviar
picazón, reumatismo y los dolores articulares(26).

“Las hojas se emplean para aliviar los síntomas de la viruela y sarampión

, en la inducción del parto y el tratamiento de los trastornos posteriores,
para la higiene íntima (por sus propiedades antiinflamatorias y
antisépticas), para inducir la lactación (propiedad que también se utiliza a
veces en la industria láctica), para combatir distintas afecciones cutáneas
y para tratar la diabetes ”(26).

19
 Figura Nº 02 Flores de Azadirachta indica Fuente: Universidad
Nacional de Piura (2015).

Composición Química

Actualmente se conoce la existencia de unos 100 terpenoides. En el

Neem, el más activo es la azadiractina (Angulo, et al, 2004).

Entre los principales compuestos bioactivos del Neem se encuentran:

nimbidina, nimbidato de sodio, nimbolida, gedunina, azadirachtina,
ácido gálico, margolona y polisacáridos. (Salazar y pariacote, 2004).

También se han aislado constituyentes como: diterpenos,

triperpenoides, polifenoles, compuestos sulfurosos, y poliacetatos
derivados

Estos extractos están compuestos en su mayoría por productos del

metabolismo secundario, como: terpenoides, fenoles, aminoácidos no
esenciales y alcaloides (Govindachari, et al., 1998).

Estudios adicionales han mostrado que los extractos en metanol al 90%

por HPLC revelan mayor presencia de triterpenoides. Donde la actividad
inhibitoria de hongos se atribuye a fracciones de triterpenoides en el
caso de semillas (Govindachari et al., 1998 y Verma et al., 2007)

20
En forma pura algunos de los triterpenoides tienen una actividad
antifúngica muy baja o nula, mientras que la combinación de varios de
ellos muestra una excelente actividad contra algunos hongos. Según la
literatura los triterpenoides obtenidos de fracciones metabólicas pueden
ser antifúngicos, aditivos y tener efectos sinérgicos. Por lo tanto la
concentración necesaria para inhibir cada hongo debe ser trabajado
independientemente (Govindachari et al., 1998).

Azadirachtina Nimbina

Figura Nº 03 Estructura químicas de los triterpenoides Azadirachtina y

Nimbina. (Tomado de Atawodi 2009).

Schinus molle L. (Molle)

Descripcion Botanica

El Schinus molle pertenece a la familia Anacardiaceae; es un árbol que

puede medir de 3 a 8 metros de altura, de ramas péndulas. Las hojas
tienen 20 a 35 foliolos opuestos subalternos sésiles, con inflorescencias
terminales de flores pequeñas unisexuales, de color amarillo pálido. Los
frutos tienen forma de drupa de color rosada o roja, con fuerte aroma a
pimienta (27).

21
“El molle es originario de la región andina de Sudamérica, principalmente
Perú, aunque se extiende a Ecuador, Chile y Bolivia. Y ampliamente
distribuido en México, Centroamérica, el sur de California y oeste de
Texas (Estados Unidos); además, se ha aclimatado bien en países
tropicales y subtropicales de los cinco continentes” (28) .

“Los frutos son pequeñas drupas de tamaño menor al de una arveja, de

color rojizo, olor aromático y sabor dulce, razón por la cual se usa en la
elaboración de la chicha de molle. Las semillas que forman el fruto son
pequeñas, de superficie arrugada y aspecto característico”(29)

Taxonomía de Schinus molle L.

Reino: Plantae.
División: magnoliophyta.
Sub clase: Rosidae.
Orden: Sapindales.
Familia: Anacardiaceae.
Género: Schinus
Especie: Schinus molle L

Figura Nº 04 Arbol de Schinus molle Fuente: Manual de identificacion de

especies. Arboles del ecosistema Forestals Andinos

22
 Figura Nº 05 Hoja, Frutos y Flores de Scihinus molle Fuente: Manual
de identificacion de especies .Arboles del ecosistema Forestals
Andinos.

Propiedades Medicinales de Schinus molle L.

“Tiene actividad contra hongos y bacterias, la decocción o tintura de los

tallos y hojas jóvenes, se emplea para lavar heridas, grietas de la piel y la
sarna ”(27)

Sus hojas se utilizan en forma de cataplasma para antirreumátismo,

cicatrizante, en la limpieza de los dientes, digestivo. El cocimiento de
hojas de molle aplicadas en baños locales desinflama la pierna de los
hidrópicos y gotosos.Las hojas mojadas curan las heridas, repelente de
los mosquitos.

“Los aceites esenciales son obtenidos del material fresco que los
contienen, utilizando principalmente destilación por arrastre de vapor de
agua. Son lipofílicos y miscibles en los disolventes orgánicos
habituales” (29).

Composicion Quimica

23
“Metabolitos secundarios presentes en el estudio fitoquímico de
Schinus molle L. “molle” indica que contiene taninos, alcaloides,
flavonoides, saponinas esteroidales, esteroles, terpenos y aceite
esencial”(29).

Las hojas del molle, contienen el 2% del aceite esencial, existen

terpenoides en mayor cantidad en lashojas según estudios (30).

°El aceite esencial presente en las hojas contiene ácido behenico,

bergamota, bicyclogermacreno, borneno, cadineno, cadinol,
calacoreno, calaminediol, calamaneno, can-feno, carvacrol, ácido
gálico, butirato de geraniol, limoneno, mirceno, ácido linoleico, ácido
palmítico, entre otros”(29) .

2.3 Definición de términos básicos

Candidiasis
Es una infección primaria o secundaria, causada por levaduras del género
Candida, con manifestaciones clínicas extremadamente variables de
evolución aguda, subaguda, crónica o episódica, en las cuales el hongo
puede causar lesiones cutáneas, mucocutáneas, profundas ó
diseminadas(31).

Incidencia
La incidencia es esencial para analizar la ocurrencia de eventos nuevos
en las poblaciones y sus factores asociados. La prevalencia es esencial
para planificar y organizar los servicios y recursos existentes y obtener
apoyo adicional, cuando sea necesario(32)

24
Inmunodeprimidos
Los pacientes inmunodeprimidos tienen disminución de la capacidad para
combatir infecciones y enfermedades. Las causas incluyen ciertas
enfermedades o afecciones, como el SIDA, el cáncer, la diabetes, la
desnutrición y ciertos trastornos genéticos(33).

Patogenesis
Describe los factores y reacciones celulares y otros mecanismos
patológicos que suceden en la evolución de una enfermedad (34).

Polimorfismo
Es una variante en genética en la secuencia del ADN entre individuos de
la misma especie (35).

Tigmotropismo
Es una cualidad biológica que indica movimiento en el sentido
direccional del crecimiento de un ser vivo(36).

CAPÍTULO III: HIPÓTESIS Y VARIABLES

3.1 Hipótesis de la Investigación
3.1.1 Hipótesis General
H1: El aceite esencial de Azadirachta indica y Schinus molle
tienen efecto antifúngico in vitro frente candida albicans

H0: El aceite esencial aceite de Azadirachta indica y Schinus

molle no tienen efecto antifúngico in vitro frente Candida
albicans.

3.1.2 Hipótesis Específicas.

H1: el aceite esencial de Azadirachta indica tiene efecto
antifúngico in vitro frente Candida albicans.

25
 H0: El aceite esencial de Azadirachta indica no tiene efecto
antifúngico in vitro frente Candida albicans.

H1: El aceite esencial de Schinus molle tiene efecto

antifúngico in vitro frente Candida albicans.

H0: El aceite esencial de Schinus molle no tienen efecto

antifúngico in vitro frente Candida albicans.

H1: El aceite esencial de Azadirachta indica presenta mayor

efecto que el aceite esencial Schinus molle a diferentes
concentraciones in vitro frente Candida albicans.

H0: El aceite esencial de Azadirachta indica presenta igual

efecto que el aceite esencial Schinus molle a diferentes
concentraciones in vitro frente Candida albicans

3.2 Identificación de variables

Aceite Esencial de Azadirachta indica

VARIABLE
y Schinus molle L.
INDEPENDIENTE

VARIABLE efecto antifúngico in vitro frente a

DEPENDIENTE Candida albicans

3.3 Operacionalización de variables

26
 UNIDAD DE
VARIABLE
DEFINICIÓN CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADORES MEDIDA/PUNTO
INDEPENDIENTE
DE CORTE

El aceite de neem
suele ser de color
50%
marrón más o menos
Aceite oscuro, amargo. Está
Concentración 75%
esencial de compuesto Porcentaje
Azadirachta mg/ml
principalmente de
indica 100%
triglicéridos y una
importante cantidad
de compuestos
triterpenoides, que
son los responsables
del sabor amargo(19).

Aceite El aceite esencial Concentración 50%

esencial presente en las hojas mg/ml Porcentaje
Schinus contiene ácido 75%
molle behenico, bergamota,
bicyclogermacreno, 100%
borneno, cadineno,
cadinol, calacoreno,
calaminediol,
calamaneno, can-
feno, carvacrol, ácido
gálico, butirato de
geraniol, limoneno,
mirceno, ácido

27
 linoleico, ácido
palmítico, entre otros
(47) .

VARIABLE UNIDAD DE
DEFINICIÓN CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADORES
DEPENDIENTE MEDIDA/PUNTO
DE CORTE

 Nula  (< 8mm)

La Candida albicans  Sensible  (8- 14mm)

Actividad
es la que causa  Intermedio  (14-20mm)
antimicótica infecciones micóticas,
 Sumamente
en Cepas de forma halos de Medida del
inhibición alrededor sensible  (>20mm)
Candida halo
del disco durante la
albicans in Diámetro de
exposición de una
vitro sustancia antimicótica. halo de mm
inhibición

28
 CAPÍTULO IV: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

4.1. Tipo y Nivel de Investigación:

4.1.1. Tipo de Investigación
 Según la variable de estudio:
Transversal - Analítica
4.1.2. Nivel de Investigación
 Investigación aplicada.

4.2. Método y Diseño de la investigación:

4.2.1 Método de la investigación
 Inductivo
4.2.2 Diseño de la investigación
 Experimental

4.3 Población y muestra de la Investigación

4.3.1 Población :
Cepas de Candida albicans.

4.3.2 Muestra:
30 cultivos de Candida albicans
Criterios de inclusión:
- Cepas reactivadas de Candida albicans
- Cepas identificadas de Candida albicans
- Crecimiento uniforme de las cepas
Criterios de exclusión:
- Cepas no reactivadas de Candida albicans.
- Cepas no identificadas de Candida albicans
- Muestras que no hayan desarrollado completamente o
presenten contaminación

29
4.4 Técnicas e Instrumentos de Recolección de Datos:

4.4.1 Técnicas:

Obtención de la muestra.

La muestra de Schinus molle L, fue recolectada de la provincia de

Chiclayo, departamento de Lambayeque, para luego obtener la
certificación respectiva en el Herbarium de la Universidad Nacionalidad
Pedro Ruiz Gallo. Posteriormente se recolectaran 8 kilos de la especie y
se procederá a eliminar las hojas secas,

Para obtener el aceite esencial de hojas de Schinus molle L, se realizará

por el método de arrastre a vapor en el equipo de Clevenger de maca
ISOLAB, en el laboratorio de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Alas Peruanas – Filial Chiclayo

El Aceite esencial de Azadirachta indica se extraerán de las semillas las

cuales seran compradas limpias fuera de pajilla o tierra en la ciudad de
Chulucanas -Piura se mantendrán limpias, frescas y bajo sombra, ya que
antes como prueba piloto se trato de extraer aceite de las hojas de
Azadirachta indica por medio de destillacion por arrastre a vapor el cual
no se extrajo nada de aceite

Se compraran 500 gr de semilla de Azadirachta indica (Neem) y se

extraerá el aceite esencial por la técnica prensado al frio.

a) Extracción del aceite esencial

La destilación por arrastre de vapor

Es una técnica que permite la separación de sustancias insolubles en

H2O y ligeramente volátiles de otros productos no volátiles. A la mezcla
que contiene el producto que se pretende separar, se le adiciona un
exceso de agua, y el conjunto se somete a destilación. En el matraz de

30
destilación se recuperan los compuestos no volátiles y/o solubles en agua
caliente, y en el matraz colector se obtienen los compuestos volátiles y
insolubles en agua. Finalmente, el aislamiento de los compuestos
orgánicos recogidos en el matraz colector se realiza mediante una
extracción.

Prensado al frio

Esta técnica se utilizará para obtener el aceite de Azadirachta indica.

El procedimiento se utilizará para extraer aceite esencial de las semillas

secas y descascaradas 500 g. Las mismas que se colocaron en una
prensa provista de un tornillo sin fin, el cual movilizará, cortará y prensará
las semillas que se iran adicionando, obteniéndose ası un aceite que se
recolectará y se filtrará para eliminar el particulado. El aceite se guardará
en refrigeración hasta su uso.

El aceite extraido será un líquido café oscuro, espeso, semisólido, de

sabor amargo y fuerte olor. El cual está compuesto principalmente de
triglicéridos y algunos compuestos triterpenoides, los cuales son
responsables del sabor amargo.

b) Reactivación de la cepa de Candida albicans:

Se tomará de la cepa de Candida albicans, una pequeña muestra

mediante un hisopo y se procederá a sembrar en la placa Petri, luego se
incubará a 35 grados centígrados por 24 horas según las especificaciones
técnicas.

c) Preparación del inóculo:

Se calculará la concentración del cultivo teniendo en cuenta la escala de

Mc Farland, se tomará una alícuota de 1ml. del cultivo y se preparará una
dilución de este hasta alcanzar 0.5 Mc Farland y se observa al
espectrofotómetro a una longitud de onda de 600 nm. De esta dilución se

31
agrega 100 ul. A cada placa y se extiende con un asa de Digrasky, luego
se deja secar por aproximadamente 15 minutos

d) Prueba de sensibilidad:

En esta etapa se preparan diferentes concentraciones de los aceites

esenciales (25%, 50%, 75% y 100%), luego se sumergeran los discos en
cada concentración preparada y se realizarán los controles positivo con
fluconazol y negativo empleando agua esterilizada, luego se deja en
incubación a 35 grados centígrados por 24 horas.

e) Medición de los halos de inhibición:

Luego de pasar por el periodo de incubación se retirará la placa de la

incubadora y verfiicará el tipo de crecimiento, lluego proceder a la
investigación respectiva.

Retirar la placa de la incubadora, examinar detenidamente la placa para

verificar que el crecimiento sea uniforme y confluente de tal modo que se
pueda identificar zonas sin crecimiento, luego proceder a medir con un pie
de rey.

f) Análisis estadístico:

El análisis estadístico se realizará mediante el cálculo y aplicación de

pruebas estadísticas paramétricas, tomando en cuenta los valores del
diámetro del halo de inhibición, para ellos se realizarán el análisis de
ANOVA, y la prueba de DUNNET, esto se realizará considerando un nivel
de significancia de 0.05%.

4.4.2 Instrumentos
Los instrumentos que nos servirán para la recolección de los datos serán:

Hoja de registro: Mediante esa se registrará todas las observaciones

encontradas de los experimentos

32
Bases de datos: Se dispondrá de una base de datos donde se ingresará
de manera ordenada todos los datos cuantitativos.

Análisis de confiabilidad: Los datos se procesarán mediante pruebas

estadísticas con una confianza del 95%.

4.4.3 Procedimientos

Los datos obtenidos en los instrumentos se agruparan de

acuerdos al grupo correspondiente y realizarán pruebas de
tendencia central y de dispersión, así mismo, se realizará la prueba
ANOVA y DUNNET.

4.5 Aspectos Eticos

Aspectos éticos se tendrá en cuenta la manipulación y eliminación

del microorganismo utilizando la bacteria Candida albicans, de
acuerdo al manual de bioseguridad en el laboratorio. Así como a
las consideraciones de eliminación de residuos biocontaminados
recomendados por la Organización Mundial de la Salud y
Organización Panamericana de la Salud.

CAPÍTULO V: ADMINISTRACIÓN DEL PROYECTO DE TESIS

5.1 Asignación de Recursos

5.1.1 Recursos Humanos
 Autor del Proyecto
 Asesor

33
 5.1.2 Recursos Materiales
Muestras biológicas:
 Candida albicans
 Aceite esencial de Azadirachta indica
 Aceite esencial de Schinus molle
Material de vidrio:
 Placas petri
 Micro Pipetas de 1000 uL
 Atomizador
 Bagueta
 Beaker de 50ml, 100 ml y 250 ml
 Capilares de vidrio
 Embudo de vidrio
 Fiolas de 10ml y 25 ml
 Termometro
Otros:
 Mortero
Reactivos:
 Agua destilada
 Alcohol de 70°
 Dimetilsulfóxido (DMSO)
Medios de cultivo:
 Agar Muller Hington
Equipos:
 Balanza Analítica Sartorious
 Equipo de Destilación por arrastre de vapor
 Estufa esterilizadora
 Campana extractora

5.2 Presupuesto

34
 PRECIO
DESCRIPCIÓN CANTIDAD UNITARIO TOTAL (S/.)
(S/.)
BIENES Y SERVICIOS

Aceite Esencial De
Azadirachta indica Y 2 100 200.0
Schinus molle
Cepas de estudio
Cepa de candida
1 100 100.0
albicans

MATERIAL Y ÚTILES DE OFICINA

Bolígrafo 6 0.50 3.00

Papel Bond A4 1 millar 23 23.00
Resaltador 6 2.50 15.00
Corrector 1 2.50 2.50
Borrador 2 1.00 2.00
Cinta adhesiva 2 1.00 2.00
Tijeras 1 4.00 4.00
Engrapador 1 10.0 10.00
Etiquetas 1 paquete 2.00 4.00
Grapas 1 paquete 2.00 5.00
Fólder 5 0.50 2.50
Regla 1 1.00 1.00
Plumones tinta
2 3.00 6.00
indeleble
Lejía 2 2.00 4.00
Detergente 2 kg 10.00 10.00
Papel toalla x 2 1 paquete 3.00 8.00
Toalla 3 2.00 6.00
Jabón y jaboncillo 3 2.00 6.00

35
Bolsas de plástico 1 paquete 1.50 1.50
MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL DE LABORATORIO

Algodón 1 Kg 4.00 4.00

Guantes estériles 1 caja 15.00 15.00
Suero Salino
2 6.00 12.00
Fisiológico
Placas Petri 30 5.00 150.0
Reactivos 6 90.00 540.0
SERVICIO DE INTERNET Y OTROS

Internet (x mes) 4 mes 69.0 276.0

Otros: Asesoria 1500 1500 1500
SERVICIO DE IMPRESIONES, ENCUADERNACIÓN Y EMPASTADO

Impresiones 100 0.20 20.00

03
Empastados 20.00 60.00
Unidades
DE OTROS BIENES Y ACTIVOS

Fotocopia 200 0.10 20.00

TOTAL 3012.5

36
5.3 Cronograma

MESES
FASE 7 8 9 10 11 12

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

Recolección de la
x
Información
Elaboración del Proyecto X x x x

Presentación del proyecto x x

Revisión y Aprobación del

x x
Proyecto

Ejecución del Proyecto x

Realizar las pruebas x x

Analizar los resultados x

Informe preliminar x

Revisión y aprobación del

x x
informe final

Sustentación x

37
 FUENTES DE INFORMACIÓN

1. Bassetti M, Giacobbe DR, Vena A, Trucchi C, Ansaldi F, Antonelli M,

et al. Incidence and outcome of invasive candidiasis in intensive care
units (icus) in europe: Results of the eucandicu project. Critical Care
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43
 ANEXO 01: MATRIZ DE CONSISTENCIA

Título: Efecto Antimicótico Del Aceite Esencial De Azadirachta indica Y Schinus Molle Sobre Cepas De Candida Albicans In

Vitro.

PROBLEMAS DE OBJETIVOS DE TIPO Y NIVEL DE METODO Y DISEÑO POBLACION

HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN VARIABLES
INVESTIGACIÓN INVESTIGACIÓN INVESTIGACION DE INVESTIGACION MUESTRA

Objetivo General Hipótesis General Tipo de Método de Variable Población :

Problema General Investigación: Investigación: Independiente (x)
Demostrar efecto H1: El aceite esencial del aceite
antifúngico del aceite esencial de Azadirachta indica y Según la Inductivo X: Aceite esencial Cepas
¿Cuál será el efecto esencial de Azadirachta Schinus molle tienen efecto variable de Azadirachta indica y Candida
antifúngico in vitro del indica y Schinus molle in antifúngico in vitro frente Candida estudio: Schinus molle L. albicans
aceite esencial de la vitro comparado del aceite albicans Transversal – Diseño de
hoja Azadirachta esencial frente Candida Analítica. Investigación: Indicadores: Muestra:
indica “Neem” y albicans. H0: El aceite esencial de x1: Porcentaje
Schinus molle . “Molle” Azadirachta indica y Schinus molle 30 muestras
x2: Dragendorf
frente Candida no tienen efecto antifúngico in vitro Nivel de Experimental Candida
albicans in vitro? Objetivos Específicos frente Candida albicans Investigación: x3: Meyer
x4: Bouchardat
Determinar el efecto Hipótesis Especificas Investigación
Problemas antifúngico del aceite aplicada x5: FeCl3
Específicos esencial de Azadirachta H1: El aceite esencial de
x6: AlCl3 1%
indica frente Candida Azadirachta indica tiene efecto
albicans. antifúngico in vitro frente Candida Variable
¿Cuál es el efecto del
albicans. Dependiente (y)
aceite esencial de
Azadirachta indica
Y: efecto antifúngico
sobre Candida
in vitro frente a
albicans?
Candida albicans

44
¿Cuál es el efecto del Determinar el efecto H0: El Aceite Esencial de Indicadores:
aceite esencial de antifúngico del aceite Azadirachta indica no tiene efecto
Schinus molle sobre antifúngico in vitro frente Candida y1: Nula
esencial Schinus molle
Candida albicans? albicans.
frente Candida albicans.
y2: sensible
H1: El aceite esencial de
¿Cuál será la Schinus molle tiene efecto
efectividad Comparar la efectividad antifúngico in vitro frente Candida y3:intermedio
antimicótica del antimicótica del aceite albicans.
aceite esencial de esencial de Azadirachta y4:sumamente
indica en relación con el H0: El aceite esencial de Schinus sensible
Azadirachta indica en molle no tienen efecto antifúngico
relación con el aceite aceite esencial de Schinus
in vitro frente Candida albicans.
esencial de Schinus molle sobre Candida y5: Diámetro de halo
molle sobre Candida albicans in vitro. H1: El aceite esencial de de inhibición.
albicans in vitro. Azadirachta indica presenta
mayor efecto que el aceite y6:Forma
esencial Schinus molle a
diferentes concentraciones in y7:Colonias
vitro frente Candida albicans. levaduriformes
H0: El aceite esencial de
Azadirachta indica presenta igual
efecto que el aceite esencial
Schinus molle a diferentes
concentraciones in vitro frente
Candida albicans

45