Unidad 2.

Biología Molecular
Retículo endoplasmático.
- Proteínas al sintetizarse se liberan en la luz del RE en un proceso llamado “Translocación
cotraduccional”.
Ribosomas libres:
a) Proteínas pertenecientes al citosol.
b) Proteínas periféricas de superficie citosólica.
c) Proteínas que se transportan al núcleo
d) Proteínas que se incorporan a peroxisomas, cloroplastos o mitocondrias.

Ribosomas RE:
a) Proteínas secretadas
b) Proteínas de membrana integrales
c) Proteínas solubles que residen del RE, Golgi, lisosomas, endosomas, vesículas y
vacuolas de plantas.

- Hipótesis de la señal: lo que determina la ubicación de un RNAm de un ribosoma libre o

unido es por la secuencia de aminoácidos en la porción N-terminal.

Imagen 1. Introducción de proteína a la luz del Retículo endoplasmático.

La traducción inicia con un ribosoma libre, cuando empieza la traducción se formará la
secuencia señal, el cual dará la orden y direccionamiento hacia la membrana del retículo.
Esta secuencia señal es reconocida por una partícula de reconocimiento de señal (SRP) la
cual se unirá al ribosoma de traducción. El SRP es anclado y reconocido por el receptor de
SRP, el cual formara un complejo ribosoma-SRP, dicho complejo permitirá que la secuencia
señal se una a un translocón (para este punto, la partícula SRP será desprendida) el cual le
dará acceso a la proteína ya que esta termine la etapa de traducción. Ya en la luz del ER, la
proteína se somete a plegamiento con la ayuda de chaperonas, en este caso BiP y la
secuencia señal es eliminada con una enzima proteolítica.

* Chaperonas: son proteína que interactúa, estabiliza o ayuda a otra proteína mal-plegada o
parcialmente desplegada a adquirir su conformación nativa.
 • Rugoso
- Red de sacos aplanados (cisternas) continua con membrana externa nuclear.
➢ Funciones:
- Síntesis de proteínas. Los carbohidratos se unen a la proteína mediante la enzima
oligosacariltransferasa (proteína de membrana integrales).
- Adición de carbohidratos a los residuos de asparagina.

• Liso
- Membranas curvas y tubulares.
- Reticulones: responsables de las curvaturas en las membranas.
- Las vesículas pequeñas de transporte se separan del Rliso y migran al aparato de Golgi.
➢ Funciones:
- Síntesis de hormonas esteroideas, y lípidos especializados (fosfolípidos y colesterol).
- Desintoxicación del hígado de diversos compuestos como etanol.
- Secuestro de iones de calcio Ca2+ de las células de músculos esqueléticos/cardiacos, esto
desencadena la contracción.

Proteínas recién entradas a la luz del ER:

- El interior del RER está repleto de chaperonas, las cuales reconocen y se unen a proteínas
mal plegadas o desplegadas y les dan la oportunidad de alcanzar su estructura
tridimensional (nativa) correcta.
- La luz de la cisterna del ER proporciona un entorno que favorece la modificación, el
plegamiento y el ensamblaje de subconjunto seleccionado de proteínas.

Biosíntesis de membrana en el retículo endoplásmico

- Las membranas surgen de membranas preexistentes.
- Las membranas crecen como proteínas recién sintetizadas, y los lípidos se insertan en las
membranas existentes en el ER.
- La mayoría de los lípidos de membrana se sintetizan por completo en el ER.

Glucosilación en el RER
- Casi todas las proteínas producidas en los ribosomas unidos a la membrana se convierten
en glucoproteínas.
- Los grupos de hidratos de carbono tienen funciones clave en la función de muchas
glucoproteínas, en particular como sitios de unión en interacciones con otras
macromoléculas.
. Secuencias de azucares que comprenden los oligosacáridos de las glucoproteínas son
altamente especificas

Orden de los azucares en los oligosacáridos.

- La adición de azucares a una cadena de oligosacáridos está catalizada por enzimas unidas
a la membrana llamadas “glucosiltransferasas.
- La disposición de azucares en las cadenas de oligosacáridos de una glucoproteína depende
de la localización espacial de enzimas particulares en la línea de ensamblaje.
- Dolicol fosfato: es un transportador lipídico incrustado en la membrana del ER.
- Los azucares se añaden a la molécula de dolicol fosfato mediante glucosiltransferasas,
este proceso inicia en la parte de la membrana citosólica, en esta parte se añaden 2 N-
Acetilglucosamina (NAG) y 5 manosas, después el dolicol con sus oligosacáridos unidos se
voltea a través de la membrana. Los azucares restantes, se sintetizan dentro del RE en el
lumen, para dar lugar a 2 N-Acetilglucosamina, 9 manosas y 3 glucosas. Una vez que el
oligosacárido esté completamente ensamblado, se transfiere enzimáticamente a un residuo
de asparagina del polipéptido naciente. El dolicol fosfato se voltea por la membrana de RE
hacia el citosol para volver a comenzar la síntesis.
Resumen:
- Fuera de la luz del RE: 2 N-Acetilglucosamina y 5 manosas.
- Dentro de la luz del RE: 2 N-Acetilglucosamina, 9 manosas y 3 glucosas.
Control de calidad
- La cadena de oligosacáridos experimenta un proceso de modificación gradual, la cual
comienza con la eliminación enzimática de 2 de 3 residuos de glucosa, esto da lugar a que
la glucoproteína sea sometida a un sistema de control de calidad.
- Cada glucoproteína contiene una glucosa restante que se une a una chaperona llamada
“calnexina” o “calreticulina”. La eliminación de dicha glucosa por glucosidasa II conduce a
la liberación de la glucoproteína de la chaperona. Si para este punto, una glucoproteína no
ha completado su plegamiento o se ha plegado erróneamente es reconocida por una enzima
llamada “UGGT” agregando un residuo de glucosa, estas muestran residuos hidrofóbicos
expuestos que están ausentes de las proteínas plegadas correctamente. Este marcaje es
reconocido por chaperonas que dan otra posibilidad de plegarse de modo correcto, después
se recorte este residuo y la enzima de detección la evalúa. Si después de varios intentos, no
se plegan bien, estas células salen del ER y son degradadas por proteasomas por un proceso
llamado “ERAD”.
- La acumulación de proteínas mal plegadas, es potencialmente letal y desencadena un
“plan de acción” integral dentro de la célula conocida como “respuesta de proteína
desplegada o UPR”. Cuando hay una acumulación de glucoproteínas mal plegadas, se
activan señales, las cuales desencadenan moléculas BiP, también se transmiten señales
tanto al núcleo como al citosol como respuesta del estrés, dando como resultado las
posibles vías de aliviar el estrés:
a) Expresión de genes cuyas proteínas tienen la función de aliviar el estrés. Estas
proteínas pueden ser: chaperonas, proteínas involucradas en el transporte de
proteínas fuera del ER y proteínas involucradas en la destrucción selectiva de
proteínas anormales (ERAD).
b) Fosforilación de una proteína requerida para la síntesis de proteínas, la cual inhibe la
síntesis de proteínas (traducción) disminuyendo el flujo de proteínas recién
sintetizada.
c) Si el estrés es demasiado a pesar de las demás vías ya señaladas para aliviar el
estrés, se procede a la muerte celular.

Proteínas que entran al Golgi:

- Proteínas de membrana
- Proteínas secretoras
- Proteínas lisosomales
 Aparato de Golgi.
- Una vez terminado los procesos en el RER, este tiene compartimentos de salida, en los
que se forman las primeras vesículas de transporte.
- El viaje del RER al Golgi se puede seguir mediante en células vidas mediante el marcaje de
proteínas secretoras con la proteína verde fluorescente (GFP). Las vesículas de transporte
se funcionan para formar vesículas más grandes y túbulos interconectado entre los 2
organelos, dicha región entre ambos se le llama “retículo endoplásmico del compartimiento
intermedio de Golgi (ERGIC)”.
- Los portadores vesiculares recién formados se llaman VTC y el movimiento de los VTC se
produce a lo largo de pistas compuestas por microtúbulos.

- Las cisternas están dispuestas en una pila ordenada. Una pila de Golgi contiene menos de
8 cisternas
- Se divide en varios departamentos funcionales dispuestos a lo largo de un eje.
- Entrada o cis más cerca “red de cis Golgi (CGN): se cree que el CGN sirve como una
estación de clasificación que distingue proteínas que serán devueltas al RE y las que
seguirán por todo el Golgi.
- La mayor parte del Golgi comprende una serie de grandes cisternas aplanadas que se
dividen en cisterna cis, medial y trans.
- Cara de salida “trans” “red trans Golgi” (TGN): sirve como una estación de clasificación
donde las proteínas se agregan en diferentes tipos de vesículas que conducen a la
membrana plas matica o a diversos destinos intracelulares.

- Los sitios membranosos del Golgi, se cree que están soportados por un andamio
compuesto por proteínas que incluyen miembros de espectrina, anquirina y familias de
actina, proteínas que también están como parte de la membrana plasmática
* Un grupo de proteínas fibrosas forman una matriz de Golgi, que desempeña un papel clave
en el desensamblaje y reensamblaje del complejo de Golgi durante la mitosis.
 • Glucosilación en el Golgi.
- En el Golgi se ensambla el componente de carbohidrato de las glucoproteínas y
glucolípidos.
- La secuencia en la que los azúcares se incorporan a los oligosacáridos está determinada
por la disposición espacial de las glucosiltransferasas.
* Glucosiltransferasas: tipos de enzimas que catalizan la transferencia de residuos de
glucosa.
* Sialiltransferasa: coloca un ácido siálico en la posición terminal de la cadena en células
animales.
* El complejo de Golgi es el sitio de síntesis de la mayoría de polisacáridos complejos de una
célula.

• Movimiento de materiales a través del complejo de Golgi.

1) Modelo de maduración cisternal: cada cisterna madura en la próxima cisterna a lo

largo de la pila. Las cisternas se forman en la cara “cis” de la pila mediante la fusión
de portadores membranosos del ER y ERGIC, c/cisterna se mueve físicamente
desde “cis” a “trans”.
Observaciones de validez:
- Este modelo muestra un Golgi más dinámico, en el que las cisternas del Golgi dependen
de la formación de estas en la cara cis y de ahí se dispersan a la cara trans. Según este
modelo, la existencia del Golgi depende de la afluencia continua de transportistas desde el
ER y ERGIC. Esto se nota en la adición de fármacos.
- Se puede demostrar que ciertos materiales que se producen en el ER y viajan a través del
complejo de Golgi permanecen dentro de las cisternas de Golgi y nunca aparecen dentro de
las vesículas de transporte asociadas a Golgi.
- Se asumió que las vesículas de transporte siempre se movían de manera “anterógrada”
(hacia adelante), desde un cis a un más trans, sin embargo evidencias indican que se mueve
de una membrana donadora tran a una membrana aceptora cis “retrogadro”.

2) Modelo de transporte vesicular: la carga a través del Golgi se transporta a través de

la pila de Golgi desde la CGN al TGN, en vesículas que brotan de un compartimiento
de membrana y se fusionan con otro compartimento vecino más adelante
Observaciones de validez:
- C/u de las diversas cisternas del Golgi de una pilla tiene diferentes enzimas residentes,
entonces, como las diversas cisternas podrían tener propiedades tan diferentes si c/cisterna
estaría dando lugar a la siguiente en línea tal como lo sugiere el otro modelo.
- Micrografías electrónicas muestran que vesículas con carga brotan de la cara “cis” y se
mueven hacia una cara más “trans”. James Rothman en 1983 demostro in vitro este hecho.

3) Versión actual: en este modelo, las vesículas de transporte no transportan la carga

en una dirección anterógrada, sino que transportan enzimas de Golgi residentes en
una dirección retrograda. En cambio, son las propias cisternas de Golgi las que sirven
como portadoras de Golgi anterógradas primarias. Este es un modelo de transporte
intraGolgi
Observaciones de validez:
- Micrografías electrónicas en las que representa secciones ultrafinas de células de
mamíferos cultivadas que se cortaron de un bloque congelado. Las secciones congeladas
de trataron con anticuerpos que se unieron a partículas de oro. Los anticuerpos mostraron
que ciertas moléculas se encuentran tanto en cisternas como en vesículas asociadas.
* Las proteínas residentes del Golgi también se pueden transportar de manera retrograda a
través de los microtúbulos que conectan cisternas el Golgi.
* Una serie de investigaciones expresa que la carga puede transportarse mediante vesículas
de transporte entre las cisternas de Golgi en una dirección anterógrada, por lo que el asunto
queda inconcluso.
El a) muestra el modelo de transporte vesicular, mientras que el b) muestra el modelo
actual.

• Tipos de vesículas de transporte

Las vesículas en el momento de gemación, estos brotes se encuentran cubiertos en su
superficie citosólica, una capa proteica formada por proteínas solubles. Estas capas tienen
las siguientes funciones:
- Actúan como dispositivos mecánicos que hacen que la membrana se curve y forme una
vesícula en gemación.
- Proporcionan un mecanismo para seleccionar componentes que transportará la vesícula,
los componentes seleccionados incluyen:
a) Carga de proteínas secretoras, lisosomales y de membrana para ser transportadas
b) Maquinaria requerida para dirigir y acoplar la vesícula a la membrana correctora aceptora.
Las vesículas tienen capas, una externa y una interna de adaptadores que se una a la
superficie externa de la bicapa lipídica.
Los adaptadores pueden seleccionar moléculas de carga especificas en virtud de su afinidad
a las colas citosólicas de las proteínas integrales que residen en le membrana donante.

Las vesículas recubiertas mejor estudiadas son:

1) Vesículas recubiertas con COPII: mueven materiales del ER
“hacia adelante” al complejo ERGIC y Golgi.
Las proteínas seleccionadas por vesículas recubiertas con COPII
incluyen
a) Enzimas que actúan en etapas posteriores de la vía
biosintética, como glucosiltransferasas del complejo de Golgi.
b) Proteínas de membrana implicadas en el acoplamiento y fusión
de vesículas con el compartimiento objetivo.
c) Proteínas de membrana que pueden unir carga soluble.

2) Vesículas recubiertas con COPI: mueven materiales en

dirección retrograda: desde ERGIC y pilas de Golgi hacia
 “atrás” hacia el ER, y desde cisternas de Golgi trans hacia atrás a cisternas de Golgi
cis.
La capa de COPI se compone de un complejo de 7 proteinas llamado “coatomero”. Este
recubrimiento ha estado implicado en el transporte retrogrado de proteínas, incluido:
a) Enzimas residentes de Golgi en una dirección trans a cis.
b) Las enzimas del ER residentes del ERGIC y el complejo de Golgi regresan al ER
Para entender el papel de las vesículas con COPI recubiertas se tiene que considerar la
retención y recuperación de las proteínas del ER residente. Los estudios sugieren que las
proteínas se mantienen en un organelo mediante una combinación de 2 mecanismos:
- “Retención” de moléculas residentes que están excluidas de las vesículas de transporte,
la retención puede basarse en propiedades físicas de la proteína.
- “Recuperación” de moléculas escapadas de vuelta al compartimiento en el que
normalmente residen.
Las proteínas que normalmente residen en el ER, tanto en la luz como en la membrana,
contienen secuencias de aminoácidos cortas en su terminal C que sirven como señales de
recuperación asegurando su regreso al ER si se les traslada por error al ERGIC o al Golgi.
Un ejemplo son las proteínas solubles en la luz del ER quienes presentan una señal de
recuperación KDEL, estas al ser transportadas de manera errónea por COPII al Golgi,
receptores de la señal KDEL se adhieren a la membrana cis del Golgi para encapsularas y
revestirlas de COPI devuelta al ER.
* Las secuencias de recuperación más comunes para proteínas de membrana del ER
implican 2 residuos básicos KKXX (K es lisina y X es cualquier residuo).
3) Vesículas recubiertas con Clatrina: mueve materiales del TGN a los endosomas,
lisosomas y vacuolas de las plantas. También mueven materiales de la membrana
plasmática a compartimientos citoplásmicos a lo largo de la vía endocítica. Otra
implicación es en el tráfico de endosomas y lisosomas.
COP: Proteínas de Cubierta

• Clasificación de proteínas en el TGN

• Enzimas lisosomales:
Se sintetizan en ribosomas unidos a la membrana del ER y se transportan al complejo de
Golgi junto con otros tipos de proteínas. Una vez en las cisternas de Golgi, las enzimas
lisosomales solubles son reconocidas específicamente por enzimas que catalizan la adición
de 2 pasos de un grupo fosfato a ciertos azucares de manosa de las cadenas de
carbohidratos ligada a N.
Las enzimas lisosomales poseen residuos de manosa fosforilados (manosa 6-fosfato), que
actúan como señales de clasificación. Las enzimas lisosomales que portan la señal de
manosa 6-fosfato son proteínas integrales de membrana que atraviesan las membranas de
TGN. Las vesículas con esta enzima son transportadas por un recubrimiento de clatrina. Las
enzimas lisosomales son entregadas a una endosoma y por último a un lisosoma. Los
receptores de manosa-6fosfato también se encuentran en la membrana plasmática.

• Clasificación y transporte de proteínas no lisosomales.

Proteínas de membrana destinadas a la membrana plasmática y materiales de secreción
destinados a la exportación desde la célula también se transportan desde la TGN.
Los mecanismos que se creen hay para dirigir vesículas a los compartimientos particulares
son:
a) Mediante el citoesqueleto, en donde se conecta le blanco y el Golgi.
b) Anclaje de vesículas mediante receptores (proteínas de anclaje).
c) La fusión de vesículas, membranas de la vesícula y el compartimiento objetivo entran
en contacto, en esta interacción participan proteínas llamadas “SNARE” una familia
de más de 35 proteínas, todas contienen de 60 a 70 aminoácidos capaces de formar
el complejo. Los SNARE mejor estudiados son para acoplamiento de vesículas
sinápticas con la membrana presináptica. Se dividen en 2: v-SNARE: se incorporan
a las membranas de las vesículas de transporte durante la gemación y t-SNARE: se
localizan en las membranas del objetivo.
En general, la capacidad de fusión de una vesícula y una membrana blanco particular está
determinada por la combinación especifica de proteínas que interactúan, que incluyen
proteínas de anclaje Rab y SNARE que pueden ensamblarse en ese sitio en la célula. En
conjunto, las múltiples interacciones entre varios tipos de proteínas proporcionan un alto
nivel de especificidad.

• Endocitosis
- Segmentos de la membrana plasmática se invaginan para formar vesículas citoplásmicas
que se transportan al interior de la célula
2 son los procesos básicos:
• Endocitosis
Es un proceso principalmente por el cual la célula internaliza receptores de superficie
celular y ligandos extracelulares unidos.
• Fagocitosis
Describe la absorción de material particulado.

La endocitosis se divide en 2 categorías:

• Endocitosis en fase masiva.
La endocitosis a gran escala (pinocitosis) es la captación no especifica de fluidos
extracelulares. Cualquier molécula, grande o pequeña, que esté presente en el fluido
encerrado también ingresa a la célula.
Aquí se eliminan partes de la membrana plasmática y pueden funcionar principalmente en
el reciclado de la membrana entre la superficie celular y los compartimientos interiores.
• Endocitosis mediada por receptor (RME)/ mediada por clatrina.
Provoca la captación de macromoléculas extracelulares especificas (ligandos) después de
su unión a los receptores en la superficie externa de la membrana plasmática.
Las vesículas que se forman durante la endocitosis también contienen una red de clatrina

• Vía endocitica.
Tipos de receptores sometidos a endocitosis:
a) Receptores de limpieza: es responsable de la absorción de los materiales que
utilizará la célula (como LDL)
b) Receptores de señalización: responsables de unir ligandos extracelulares que llevan
mensajes que cambian actividades de la célula.
Después de internalización de los materiales unidos a vesículas se tranportan a una red
dinámica de túbulos y vesículas conocidas como “endosomas” que en el lumen presentan
un ambiente acidificado.
Endosomas se dividen en 2:
a) Tempranos: típicamente se sitúan cerca de la región periférica de la célula.
b) Tardíos: típicamente se localizan más cerca del núcleo.

• Fagocitosis

• Exocitosis
- Es el proceso en el que una vesícula se fusiona con la membrana plasmática para poder
secretar su contenido al espacio extracelular.
- Cuando una vesícula citoplasmática se fusiona con la membrana plasmática, la superficie
luminal de la membrana vesicular se convierte en parte de la superficie externa de la
membrana plasmática, mientras que la parte citosólica de la membrana vesicular se
convierte en parte de la superficie interna.